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-` 核磁应用培训笔记 一、一维H谱实验操作流程 1、新建一个实验，可以直接输入New命令，name：样品名称；PROCNO:处理号；Solvent：不代表锁场的溶剂，只影响最后打印谱图参数中溶剂项的显示； Expenriment Dirs：标准实验，不代表脉冲系列； User下，可以建立自己的标准实验；H谱的标准实验名称是：proton 2、getprosol：把相关的脉冲参数保存在Acqupars表中: Acqupars→PL1 3、锁场，可以直接点击Lock图表选择溶剂后锁场，或者输入命令LOCK空格溶剂名称直接锁场； 锁场的目的？ 4、atma：topshim 5、NS输入数值 6、rga 7、za即zero go 的简写 Notice： （1）调谐：做同一样品的不同谱图时需要重新做一次调谐。 （2）当第一次匀场不好的时候，可以输入命令topshim+空格+tunea进行二次匀场，若多次匀场后仍然不能达到好的状态则需要做三维匀场。 （3）同一溶剂的样品，建议在同一时段做谱，有利于匀场。 （4）匀场不好的原因有以下几个方面：①样品中含有顺磁性金属离子②高粘度样品③溶液高度太低。 8、部分参数的设置 （1）eda采样参数设置：可以输入命令ased进入参数设置界面； ①PULPROG：脉冲系列名称，zg30:30度角激发，zg：90度角激发； ②AQ-mod：采样模式 ③TD：采样点数 ④NS:采样次数 ⑤DS:空扫：真正开始采样前先采集的次数，做一维谱时可设为0，二维谱空扫的次数设置非常重要。 ⑥TD0，真正采样次数，NS*TD0，如TD0设为10，NS为1024，则总采样次数为1024*10 ⑦SW谱宽，用默认的谱宽即可，其中SW与AQ成反比 ⑧O1P，O1，中心频率，其中前者是以ppm为单位，后者是以HZ为单位。 最右边：谱宽/2+O1P （2）和脉冲系列有关的参数 ①DE值，采样结束后等待衰减的时间。做杂核时需要更改。 ②D1：弛豫延迟，做定量H谱时需要更改 ③P1激发脉宽；PL1（dB）：激发功率； 9、谱图处理 （1）Procpars：窗口函数 ①efp：指数函数，em、ft、pk三个命令的组合 ②gfp：高窗函数：gm、ft、pk三个命令的组合 ③apk：根据当前的样品来调PHC,PHC1，当谱峰有很多鼓包时使用效果不好。 Notice：LB值越大信噪比越好，分辨率越差，LB值越小，分辨率越好。 LB0是相对于efp函数而言的，当调节LB值为负，信噪比仍然不好时，可用gfp函数，先更改GB值，再输入GFP命令冲零也可以提高分辨率。 （2）定标 （3）直接输入plot命令，进入打印界面。 （4）如何创建模板？ C:\Bruker\Topspin\Plot\Layouts,先另取名字创建模板，再将模板文件夹下的默认模板删除，如H谱的默认模板是：1D-Hxwp，先删除该模板，再将自己创建的模板改为默认模板的名字。 二、如何做H谱的定量？ 与标准一维氢谱相比，需要做一下变换 1、将脉冲系列zg30改为zg， 2、找内标，两个峰挨的很近且基线分离，一般很难找到合适的内标物。 3、调整O1P,使得O1P在两个峰之间 4、NS要足够大，为了保证较好的信噪比，定量最起码要做半个小时以上。 5、D1>5T1,D1要大于5倍的T1，首先要找最大的T1，D1的时间要足够长。 三、碳谱：碳谱的标准实验为C13CPD 1、getprosol 2、atma 3、采样参数的设置：谱宽sw一般设置为250,O1P，NS，TD0, 4、rga 5、zg 6、tr命令：保存数据，继续采样；如tr4，保存最近4次的2倍。 7、efp：apk 8、ppf：对碳谱的全谱进行标峰。 9、Mi+数字+PPF：表示强度低于该数值的不标峰。 10、go命令，样品浓度太低的情况下，过夜采集仍然不能得到理想的谱图，第二天白天需做其他谱图，可在第二天晚上将前一天晚上采集的谱图拖动到当前窗口，重新放入样品锁场调节后可以输入GO命令进行累加采集。 11、和脉冲相关的参数 CPDPRG2，通常情况下用Waltz16，做氢谱、碳谱的90度脉冲没有问题，做杂核时需要更改。 Notice：看到碳谱有裂分，首先要考虑是否有同分异构体，再考虑更改CPDPRG2，选择带bi的参数。 四、碳谱定量实验（实验时间相对很长，需要加弛豫试剂以减短实验时间。） 1、标准实验选择CBIG，new→ok 2、将zgig30改为zgig 3、DS:0加弛豫试剂后会影响锁场和匀场。 五、DEPT实验（45、90、135） 1、New→C13DEPT90→OK 2、getprosol 3、修改参数： (1)改动参数NS，采样次数是普通碳谱采样次数的1/4. (2)Pulseprog查看与脉冲相关的参数，其中NS是4的倍数。 (3)DS=8，NS=4，SW:谱宽，O1P. 4、rga：zg Notice： （1）DEPT45，只出现季碳；DEPT135：只出现CH （2）HALT空格数字 （3）SR值，从校正后的普通碳谱的处理参数中copy SR值，复制到DEPT谱图中，可将DEPT谱图中的化学位移与普通C谱的化学位移对齐。 六、如何将多种谱图打印在同一张图上？ 方法一： 1、先将全谱图调出并标好化学位移。 2、选择1D+1D+1Dxwp打印模板 3、在data中，点击ADD，选择实验数据现在的位置，将需要的数据拖入，点击Apply，确定。 此方法的优点是可以对每一张谱图进行修改。、 方法二： 1、随意拖入一张谱图，输入plot 2、全选中，并删除原有谱图 3、在DATA里面选谱图，APPLY→OK; 4、在右侧选择多个谱图叠加的图标，三条重叠的折线； 5、在空白处拖动鼠标，出现第一张谱图 6、右击选择Edit，选择steaked，输入谱图张数。 Spectra：0*5,0表示左右偏移量，5表示上下偏移量。 此方法的缺点是不能单独修改每一张谱图。 七、一些补充注意事项 1、BBf，探头。 2、新安装仪器可以做的核有H、C、P、F、N,可以直接选择标准实验，直接调用标准模板。 P31CPD,全去偶，zgpg30；P31：zg。 LOCK之后可以直接输入一系列命令，点击ENTER直接完成。 3、做杂核前要先确认两件事情：（1）有无脉宽和功率（2）有无标准实验； 4、P的化学位移的标定：外标法。 把标准品（查找网上文献）放到P样品中测定核磁，将标准品的化学位移定位为0后看SR值，再将SR值复制粘贴到后续做的P谱图上，再标定化学位移。 标准品：85%磷酸溶液。 不锁场、不匀场，直接调谐、prosol。 不锁场实验：（1）打开BSMS键盘，将lock变成灰色。（2）sweep要变成灰色（即将（1）（2）的ON-OFF都OFF掉）（3）atma；rga；zg； 八、对于没有标准实验、没有脉宽和功率的杂核如何入手做？以B11为例。 1、首先查询该杂核的旋磁比、天然丰度，对于天然丰度太低的要求浓度高些，或者很难做出来。 Help→NMR Guid→eNMR Encyclopedia→NMR Application→NMR penddic Table→点击要做的元素查看旋磁比和天然丰度。 2、先借用C谱的标准实验，新建一个实验，当旋磁比为正时标准实验选择C13CPD，当旋磁比为负时标准实验选择C13IG。点ok。 3、更改参数 查看Acqpar参数（都是C13的参数）→getprosol（读取C的脉宽和功率）→输入edsp命令→把F1维中的C13改为B11,F2维不变→Default→Save→再次回到Acqupars参数中→NS（扫描次数）、SW(谱宽，尽量设宽些400)，O1P（先赋予0）+-200位置找峰，D1（经验值）2S，对0也适合，（事先查D1值，太大可加弛豫试剂）→lock，topshim→输入atmm（不能用atma，手动调谐，第一次做核时必须用手动调谐。）→出现Tuning对话框，若点》《找不到会动的倒峰，则点击▽图标，放大范围，都调好后点①File②Save position③Exit→输入atma；rga；zg，弹出rga对话框，点OK，输入密码Bruker，接着弹出zg警告→halt8，efp；apk→输入sref弹出警告，close（将O1P放在最佳位置）→edmac（宏命令）+空格+名称（随意命名）。 校准背景信号，第一段（第一行，absf1+空格+最大值；第二行，absf2+空格+次大值；第三行，absf）；第二段（第一行，absf1+空格+最大值；第二行，absf2+空格+次大值；第三行，absf）；Notice：下一段的开始是上一段的结束，进入鼓包区域后区间要变小，节点值不能正好落在峰的最高点，从最左端分多段编辑到最右端。编辑好后保存。→输入BL命令 4、如何创建标准实验模板？ 输入wpar→在user下，不能存在par上面→点击write new→输入实验名称，OK→OK→close→new→不能getprosol（90%重水10%水叠代钠标样，可以用来建立O的标准实验，也可以用来建立Na的标准实验，需要做Pt的标准实验室，可打电话让工程师过来设置，另外做其他杂核的定量需用到C13IG脉冲系列，需要请工程师调90度脉冲的脉宽和功率，请工程师来做核。） 九、部分二维实验 温馨提示：二维谱实验最重要的就是控温。 （一）、实验一 1、New建立一个新实验，标准实验选择COSYGPMFSW：用梯度场进行相关路径的选择。其中GP表示梯度；MF表示多量子粒波，SW表示方波，标准波形。多量子粒波的好处：可以从对角峰上看到单峰的性质，简化对角峰，易于解析。 2、lock 3、atma；topshim；getprosol，调谐的目的是为了接收线圈的频率与中心频率保持一致，提高灵敏度。DS空扫16次。Pulseprog：查看脉冲系列。TD,F2维2000左右；F1维，大于256（设高一点可以提高分辨率）。采采样模式：QF；与采样相关的参数：TD、NS、DS、SW、O1P。其中NS、DS的设置可以参考限定值。 输入命令ased，可以查看与脉冲系列相关的参数，基本不需要自行修改。 4、rga；zg 5、谱图处理 （1）输入命令xfb进行变换，其中xf表示加窗函数，b表示两个维度。 （2）调进一维谱 ①选中一维谱，右击，选择display As 2D projection。②选F1+F2 （3）点等高线调整图标（一个没有底边的三角弧形，中间几条平行线穿过）进行等高线调整。Level increment：1.2-1.3即可；Number of levels（等高线数）：32；Fill→Apply→OK。或者可以输入命令clev+32可得到等高线数目。 （4）校准（即定标）放大谱图进行定标。 （5）去除噪音，选中噪音，输入命令proj，选择UP data rows/cols from display→ok→再选择最上面的calculate positive projection→输入sub2（对正峰和负峰都去除噪音） （二）、实验二 1、New，标准实验选择：MLEVPHSW,PH表示相位；MLEV表示自旋锁定或自旋传递；SW表示方波，形状脉冲SP；①查看与脉冲系列相关的参数，其中NS=8*n，DS=16*n；②TD(F2=2048，F1≥256)③SW,O1P;④D9：自旋锁定时间，默认值为0.08S，即混合时间（设短的话可能会无法调整相位） 2、lock 3、atma；topshim；getprosol； 4、谱图处理 （1）输入命令xfb变换谱图 （2）调等高线 （3）调相位，先调0级相位，再调1级相位。 （4）校准 （三）实验三 1、New→NOESYPHSW→适用于大分子 2、①NS：8*N；DS:16*N;②D8混合时间，空间＜5，峰的强度与距离的六次方成正比。对于大分子，D8=0.1～0.3S；对于小分子：D8=0.6～0.8。 Notice：分子量越大，弛豫时间越短，分子量越小，弛豫时间越长，温度越高弛豫时间越短。 3、lock 4、getprosol 5、atma；topshim；rga；zg （四）实验四 1、new，标准实验选择ROESYPHSW,PH：通过相位循环可以减掉一些峰。 2、具体实验步骤与前面的实验步骤大致相同，通过查看与脉冲系列相关的参数对参数进行设置。接着LOCK,getprosol；atma；topshim；rga；zg 3、Notice：输入Set命令，选中Enable automatic command spooling方框内□打钩。可以针对一个样品的自动排列做多个实验。 （五）实验五：J-Resolved同核实验。 1、new→cosy45sw（先借用） 2、Pulprog：jresqf（消除化学位移，保留耦合常数） 3、NS:4*N；DS：16； 4、F2维（化学位移）；F1维（耦合常数） SW=20，SWH=50HZ，O1P只针对F2设定值，F1不用设。 5、getprosol 6、lock 7、atma；topshim；rga；zg； （六）实验六H-C相关的二维谱 1、New，选择标准实验：HSQCETGPSISP,ET表示采样模式为回波反回波采样；GP梯度；SI灵敏度增强；SP形状脉冲，让激发更均匀。 2、输入命令eda，进行采样参数设置：NS=1*N,DS≥16,TD,SW谱宽(F2为H谱谱宽，F1为C谱谱宽)； 输入命令ased可进行与脉冲系列有关的参数设置，①CNST2：单位为HZ,C和H直接耦合常数的平均值。②GPZ2，C:20.1%，N15，8.1%，若有些杂核没有显示，则改核后可以输入命令gradratio查看 3、lock 4、getprosol；atma；topshim 5、rga；zg （七）实验七 1、New→HMBCGPND，ND表示在采样时间内不进行去耦。 2、（1）采样参数设置NS=2，DS=16,O1P=?,SW=? （2）与脉冲系列相关的参数设置，CNST13，远程耦合常数，系统默认一般为8HZ,可以适当地减小，当看不到交叉峰时，可能该值设大了，也可能是因为二面角的原因。，通过耦合常数可以计算二面角的大小。 3、lock 4、atma；topshim；rga；zg Notice：HMBC谱图中可能存在HSQC的残余峰。 （八）实验八，在HMBC二维谱中去除HSQC的残余峰。 1、new→HMBCGPND,Ttitle：J-Filter HMBC 2、更改脉冲系列及参数 将Pulprog→HMBCGPL2ndqf （1）输入命令eda，更改采样参数，NS=2*N,DS=16，QF，TD(分F1，F2)，O1P （2）输入命令ased，更改与脉冲系列相关的参数，CNST6:120HZ;CNST7180HZ,在该区间内HSQC残余峰去除。CNST13，百分比根据右侧提示填写。 3、getprosol 4、lock 5、atma；topshim；rga；zg 十、完整的二维谱图处理过程 1、输入xfb，谱图变换； 2、调入一维谱，选择F1+F2，→ok 3、clev32，修改等高线。 4、校正相位（NOESY、ROESY、TOCSY、HSQC需要校正相位，其他的不需要）点相位校正图标，选几个点，ADD，先校正红线所在的位置。 5、定标：先定好一维谱，读出化学位移，再点击定标图标，找出中心位置进行定标。 6、去除噪音，（T1噪音的去处），左边没有信号的投影。 Proj→edit→update→ok→第一个正峰第二个负峰，输入sub2。 7、可以通过选择性预测提高F1的分辨率，edp→procpars→founer→ME_mod→选择LPfr（LP表示线性预测，fr表示向前的）→NCOEF（HH相关选100，HC相关选32）。此处理的缺点是可能产生鬼峰。 十一、核磁的维护 （一）硬件维护 1、机柜里面的滤网一般一年清洗一次 2、建议每周重启电脑一次 3、打开机柜需要带放静电手环 4、每次严格开关机，关机开机后要做一次CF。 5、90度脉冲校准正常情况下半年做一次，对新仪器可能需要三个月做一次。 6、field的校准，正常情况下半年一次，对于新仪器三个月做一次。 （二）磁体及软件维护 1、1H 90度脉冲的校准,标样：0.1%EB in CDCL3 （1）new，建立实验，选择PROTON标准实验，title：1H90cal （2）lock （3）getprosol；atma；topshim （4）更改参数 ①输入命令eda更改采样参数，将zg30→zg；NS=1，DS=0;O1P=2.6PPM(即设定在乙基的四重峰中央)。 ②输入命令ased更改与脉冲系列相关的参数，D1=20S,RG=16; P1=10.60记录下来（脉冲作用时间）改为2；PLW1机PL1保持不变。 Notice：先把原来的P1值，再将P1赋予一个比较小的时间，eg，1us先试做一个谱看看。 （5）rga；zg （6）efp；apk，处理谱图，并找到四重峰，使当前窗口只出现四重峰。 （7）输入命令dpl，定义打印区间。 （8）回到处理参数procpars，将PH_mod中的模式改为PK （9）输入命令POPT，脉冲的功率为脉宽的优化模式。勾选第三个选项即perform automatic baseline(PARAMETER写上P1，OPTMUM中选zero，STARTVAL开始值：比原有值的三倍大一些即大于3*10.60；ENDVAL结束值：比原来的四倍大一些，即大于4*10.60+4；INC步长一般定为2，36、38等等)，填好以上各参数后，点击Staroptimlze→Save→ok→开始做实验→若出现负值的峰，说明已经越过180度得电，点击skip current optim…停止实验。 结果存在TITLE里面，不用记录。在Acquars中的P1（us）得到值/4,得到的值其实是零点的值，即360度得值，除4即可得到90度的值。 （10）更改prosol表，输入命令edprosol，将左右通道的pulse值改过来→Save→select all relevant →ok→输入密码→ok→yes→ok→yes→ok，关闭窗口。 2、C13的90度脉冲，标样：ASTM。（参考讲义P48） （1）new→PROCNO(处理号一定为1)→C13CPD(标准实验名称) （2）getprosol→lock 溶剂名称→atma；topshim （3）修改参数，①输入命令eda修改采样参数：将zgpg30改为zgpg；NS=1;DS=0，O1P=67，O2P=3.5②输入命令ased修改与脉冲系列相关的参数：RG=32或64； D1（S）=20；P1先记录下原始数值如8.8，先赋予小点的值如2us （4）输入zg命令直接采样 （5）efp；apk让窗口只出C的信号，输入dpl，以下步骤与H的90度脉冲一致，可参考H的90度脉冲。 Notice：测完后要到prosol表中进行更新。 3、如何计算当前样品的90度脉冲值？ （1）new→设定好参数之后做pulsecal （2）输入命令pulsecal，enter后可以计算当前样品的90度脉宽，测完后点击close。第一次做pulsecal命令时会弹出对话框“该命令正在编译”直接close掉就可以了。 4、3D匀场，标样：90%水+10%重水。 （1）new，建立一个一维H谱实验 （2）lock H20+D2O （3）atma；topshim gui（可以去除Y方向的匀场梯度） （4）选3D→After：ZX-Y-XZ-YZ-Z（不做Before）→Star→结束后点close。 （5）选一个常做的样品，做一个一维H谱，lock→getprosol；atma；topshim （6）输入wsh→在filename中输入文件夹名称→write→close Notice：怎样判断匀场好不好？①看DMSO、甲醇、丙酮的多重峰②看TMS的卫星峰③看溶剂本身的峰信号，越窄越好。 5、lock field的校准 方法一：锁场锁氘信号，标样用10%的EB in CDCl3 （1）进样 （2）lock CDCl3 （3）进入BSMS键盘→lock\level→field→读取field值并记录下来（6704.3）→点ON-OFF脱锁→输入命令lopo，enter进行锁场参数的优化→选溶剂，点ok→输入6704.3（锁场后的值）。 Notice：红线和绿线的交叉点在锁场的最中间，蝴蝶线完全对称，通过更改phase值可以使其变得对称，从交叉点出来的第一个峰都是向上的。 （4）点击stanby，命令行中输入edlock，点折线图标进行保存。 方法二：什么溶剂都锁不上的情况下使用该方法 （1）放H20+D2O的标样进去 （2）将sweep的ON-OFF关掉 （3）修改采样参数，建立一个H谱zg30，NS=1，DS=0，O1P=4.7，SW=30～40ppm （4）atma；rga；zg； （5）efp；apk （6）找到水峰，看水峰与4.7偏离了多少HZ，在procpars中将PH_mod改为pk； （7）输入命令gs，点实时变化谱图，打开BSMS键盘，进入lock\level里面，调节filed值，使水峰到达4.7的位置，到达4.7后点Standby，输入命令edlock，点折线图标，保存。 （8）将GS界面stop掉 （9）用CDCl3样品做校准。 十二、一维选择性激发实验 1、实验一：针对分的比较开的峰 （1）新建一个实验，做一个一维谱。 （2）点击积分符号，在自己想要的信号上，对其进行积分。 （3）“Save as veg”右击保存图标，保存。 （4）输入buttonnmr，选择select… （5）点击set Gr ROESY→OK→输入实验名称后点OK→①OK：不能再更改参数，直接采样；②cancel只是建立实验，还可以修改参数。本例中选cancel。 （6）修改NS=8%N，DS=4*N （7）rga；zg （8）ef→相位校正，一般会出现三种信号：相关信号、吸收型信号、色散信号。 2、实验二：针对重叠比较严重的多重峰。 CSSF:chemical shift 化学位移，selective filter。 （1）进样，采集一个一维谱 （2）找到重叠峰，拷贝其中的一个化学位移：所关心的峰的中间位置。 （3）新建一个实验，修改O1P为前一步骤的化学位移值。 （4）更改脉冲系列（pulprog），选择sel cssfzs.2→ok （5）查看参数，修改NS=2*N,DS=16，TD0=8~16，部分参数根据右侧提示修改。CNST2=4(此值取决于峰的重叠程度) （6）rga；zg 3、实验三 （1）在实验二的基础上，输入命令i，I命令表示做同样的实验。 （2）更改脉冲系列，将selcssfzs.2→selecssfdizs.2（2表示第二个版本，为了选择峰；带zs表示能量子激发；di自旋锁定，cosy峰为了找相关谱） （3）更改参数D9（混合时间）、NS、DS、TD0等参数。 （4）rga；zg Notice：cosy、tocsy、noesy、roesy对角峰、交叉峰都有；hsqc、hmbc没有对角峰，只有交叉峰。 十三、溶剂峰的压制 1、只压制一个峰 （1）做一个一维谱，找到要压制的峰，复制化学位移。 （2）new→标准实验名称为：WATERSUP,对应的脉冲系列为NOESYGPPR1d→ok （3）设置实验参数，D1：低功率、长时间的功率，关键设置参数D1和PL9。对于NS、DS无严格要求；PL9=60dB（该值越大，实际功率越大）；D1=2s(时间越长，频率覆盖范围越窄)；O1P的值直接粘贴步骤一复制的化学位移值，谱宽要足够大。 （4）getprosol； 2、压制两个峰 （1）edc→标准实验名称：LC1D12→OK （2）O1P:压制峰1的中间位置的化学位移值（谱图的中间） O2P：压制峰2的中间位置的化学位移值。 （3）getprosol （4）NS=8*N,DS=4,PL9=60 （5）rga；zg 3、如何压制多个峰？ （1）new→LC1DCWPS(标准实验名称) （2）修改参数NS、DS、SW （3）getprosol （4）输入命令L30(即压制峰的个数，如N) （5）输入命令xaua（自动采集一个一维谱），压制N个最强的峰 4、水峰的压制（与压制一个峰的步骤是一样的） （1）new→WATERSUB→NOESGPPR1d （2）O1P的确定，NS、DS、D1、PL9 （3）getprosol （4）lock （5）atma；topshim； （6）RGA→RG，记录RG值 （7）rga；zg→fp→all→apk （8）更改O1值 （9）rga；zg（多次循环，直到水峰的压制达到好的状态） 5、实验五 （1）edc（new）→NOESYPR1D(标准实验名称) （2）D8=0.1S;NS、DS(根据提示确定)；O1(O1P=4.7)、D11=30ms=0.03s，D1=2S;PL9=50~60Db(不宜给太大的值) （3）getprosol （4）lock （5）atma；topshim；rga；zg 拓展实验：输入I命令→NOESYGPPR1d（加梯度场实验），更改梯度参数。 Notice：加梯度场对锁场相位要求比较高。 十四、Topspin软件介绍 1、通过命令re、rep、rel、repl+空格+数字打开文件 2、rel：打开最后一个实验名称下的实验号。 Repl：实验号下面的某一处理号。 3、命令expl：按照2.1或者3.0版本的统一存放数据。 4、命令.all 5、E命令，选择要看的区域 6、批处理：processing→senal processing→Find找到实验名称→next→LB0.3；efp；apk；ppf（标峰）（输入一系列命令符）→excute→close。 Notice：LB增宽因子指数窗函数。 7、批处理积分（intser批处理积分命令） （1）先对第一张谱图进行积分并保存 （2）输入命令intser （3）选择第几个实验→next （4）options（calibrate：选定某一个位置；Normalize sum of integrals归一化法）→第几个峰→定义几个→ok，归一化值加和多少，可以自己增。 8、增加一个处理号（wrp命令） Corl dram预测化学位移 9、去卷积（去卷积的峰保留在999的处理号上面） Analysis→Deconvolution→ok→options（用什么函数）（use lorent zian shape）→选择区域（阈值）→ok 10、进入topspin用户名和密码的设置 Set命令→options→admmistration→lock topspin user interface 11、电子签名：Electromic signature creation，输入命令esign 12、audit跟踪文档，可以看到所有的操作 13、更改layout的三种途径①输入命令layout②contrl+P③处理参数中的Automation→layout 14、模板保存的路径，C:\Bruker\Topspin3.0\plot\layouts 15、stack1d多个谱图叠加 16、parplot参数修改 17、输入命令almanao打印化学位移 18、利用NMR Guide自学：NMR Guide→输入关键词→搜索 19、Help→manuals→1D\2D step-by-step basic多利用资源自学。 十五、T1、T2的测定 1、1H的T1 的测定（做二维时也需要控温） （1）做一个一维H谱（目的是看看①匀场好不好②有没有合适的谱宽和O1P） New→getprosol→lock→atma；topshim；NS=1;DS=0；rga；zg→efp；apk 12↓ （2）输入命令Iexpno：完全拷贝当前实验的所有参数，只是实验号加1，目的是为了谱宽和O1P都不变。 （3）进入采样参数栏，将zg30改为t1ir（实际是假二维）→点 图标（目的是将其改为二维），弹出对话框，点OK→到脉冲参数里面看采样参数：NS=8*N（此参数设置是实验的关键）,DS=4，FnMODE 选undefined→TD（f1：变换等待时间，一般给10即可；f265536），SW（F2：氢谱的谱宽，不变；F1不用管）→点击左侧LIST，找到VDLIST,自己定义一个VDLIST,edit（填十个点，这是个点必须包含在弛豫时间内，前面的点密集些，后面的点系数些，如0.01,0.02,0.05，0.1,0.4,0.8,1,3,5,10）其中最大值的确定是关键，要保证做出来的曲线变化要么是向上的一个平台，要么是向下的一个平台。设置好后保存→回到与脉冲相关的参数上，D1(S)=10，D1值必须要大于或者等于VDLIST中设置的最大值，设置好VDLIST后→rga；zg （4）数据处理 更改处理参数（procpars）SI{F1的一定是偶数，如16，其中SI(F1) ＞TD(F1); SI(F2) ＞TD(F2);}→输入命令xf2（表示只对f2做傅里叶变换）→点击相位调节图标，将十字线放在最下方，点鼠标右键选ADD（只需选一个点）→点R图标：出现氢谱，只需调节好氢谱的相位→保存，退出→返回处理参数propars中，将F2维中的PH_mod改为PK→点Analysis中的“T1/T2”图标，进入右侧界面→点第一个图标“折线FID”，弹出对话框，选spectrum，弹出下一个对话框，slice，number=1，ok→点第二个图标peaks ranges：弹出对话框，选manual integration，弹出另一对话框，点ok，进入积分模式，选择峰并进行积分→积分后点击“带A的保存”图标，选第三个选项Export regions to relaxation module and ret→点第三个图标：relaxtion，widows①fiting funtion uxnmrt1②listfile name：vdlist③点数是前面设置的点数10，检查以上三项无误后输入ok，点击“》》”图标，全部点拟合曲线→查看拟合曲线→输入plot命令→点击T1/T2，拉动左键。 2、1H的T2的测定（自选回波） （1）做一个一维H谱（目的是看看①匀场好不好②有没有合适的谱宽和O1P） New→getprosol→lock→atma；topshim；NS=1;DS=0；rga；zg→efp；apk 12↓ （2）输入命令Iexpno：完全拷贝当前实验的所有参数，只是实验号加1，目的是为了谱宽和O1P都不变。 （3）修改脉冲程序，改为cpmg，将一维模式改为二维模式。 （4）在与脉冲相关的参数里面查看NS、DS、Fnmode的定义 （5）修改NS=8*N,DS=16,TD(F2=65536，F1=10)，Fnmode:Nodefined，SW不变。 （6）在LIST中，编辑VIDLIST（表示的是循环次数）表，如：2,10,20,50,100,200,300,500,750，？（最后一个值的确定根据D2O来计算，是关键），单个循环时间=2D2O+P180→保存。 （7）回到采样参数中，查看和脉冲系列相关的参数，D2O稍微大于50*P2（注意单位换算），D1值的设定，表示弛豫的恢复时间，与T1有关，D1>5T1，本例中D1=10s；测T2实验中的关键参数有：①D2O②NS、DS③TDS1维④VVLIST的设定，最后一个循环次数由D2O决定。 （8）rga；zg （9）谱图处理（与T1的处理过程类似，唯一区别是拟合出来的是循环的次数） 更改处理参数（procpars）SI{F1的一定是偶数，如16，其中SI(F1) ＞TD(F1); SI(F2) ＞TD(F2);}→输入命令xf2（表示只对f2做傅里叶变换）→点击相位调节图标，将十字线放在最下方，点鼠标右键选ADD（只需选一个点）→点R图标：出现氢谱，只需调节好氢谱的相位→保存，退出→返回处理参数propars中，将F2维中的PH_mod改为PK→点Analysis中的“T1/T2”图标，进入右侧界面→点第一个图标“折线FID”，弹出对话框，选spectrum，弹出下一个对话框，slice，number=1，ok→点第二个图标peaks ranges：弹出对话框，选manual integration，弹出另一对话框，点ok，进入积分模式，选择峰并进行积分→积分后点击“带A的保存”图标，选第三个选项Export regions to relaxation module and ret→点第三个图标：relaxtion，widows①fiting funtion uxnmrt1②listfile name：vclist③点数是前面设置的点数10，检查以上三项无误后输入ok，点击“》》”图标，全部点拟合曲线→查看拟合曲线→输入plot命令→点击T1/T2，拉动左键。 Notice：此时得到的T2不是真正意义上的T2，而是循环次数，因此T2的实际值计算公式为：如本例中得到的值为68.365，则T2的实际值=68.37*（2D2O+P180）=68.37*（2D2O+P2）=68.37*（2*0.00105+20.80*10-6S）=151ms，注意单位换算，P180即为P2。 C的T1的测定：脉冲系列选择tlirpg。 十六、如何设置命令的自动排列？ （1）输入set命令→Adiministration，勾上Enable automatic command sppoling→ok （2）set→more preferences →status bar prefrences →change勾选需要显示的栏目→Apply→ok→最下方空白处右击并将Acquisition bar on/off关掉状态栏，关掉后再打开。 十七、如何建立宏命令的图标？ （1）输入edmac命令，edmc编辑宏命令，edmac+空格+宏命令名称→输入①efp②apk③.All④AbSN⑤ppf→点file工具栏保存→关闭 （2）在菜单栏（目标栏）点右键，选择Add user defined button →出现对话框①Add/modify a button with text label(文本)②Add/modify a button with an anicon（图标） （3）Abs:自动积分；AbSn基线调整。 十八、H-P相关谱 （1）new →Acetone，标准实验名称：hmbcgpnd（nd表示在采样过程中对C13不去偶） （2）更改参数：输入命令EDSP,将13C改为31P→Default→Save→Close。 （3）getprosol （4）更改采样参数①sw（f1）=400