人端粒酶逆转录酶启动子调控腺病毒介导胸苷激酶基因治疗人膀胱癌的动物实验研究.pdf
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1、1058 中国肿瘤临床 2007年第34卷第18崩人端粒酶逆转录酶启动子调控腺病毒介导胸苷激酶基因治疗人膀胱癌的动物实验研究摘要 目的:探讨带有人端柱酶逆转录酶(hTElit)启动子驱动单纯疱疹病毒胸腺嘧啶激酶(HSVtk)基因的重组腺病毒AdhTERT-HSvtk结合无毒的环氧鸟苷(GCV)对人膀胱癌的治疗作用。方法:建立人膀胱癌细胞株253JBALBC裸小鼠移植癞模型,采用AdhTERT-Hsv一出裸鼠尾静脉注射照度注射GCV活疗并观察结果。通过常规藕理切片观察肿痛破坏情况厦安垒性;通过1LNEl染色进一步观察肿瘤的凋亡情况免疫组化法测定增值细胞核抗原(PCNA)。结果:AdhTERT-H
2、SVtkGCV治疗蛆,显示出明显的肿瘤抑制作用其肿瘤体积、重量显著低于各对照组(P005),抑瘤率明显。AdhTERTHSVikGCV治疗蛆凋亡指数高于其它各组而增殖指数却明显低于其它各组。结论:AdhTERTHSVtkGCV系统对裸鼠移植瘤的生长有明显抑制作用,可以靶向性转凡人膀胱癌细胞,治疗糟果显芋,关键词 膀胱肿瘤 单纯疤疹病毒胸腺喀啶激酶基因 腺病毒人端粒酶逆转录酶启动子Animal Research using the Adenovirus-mediated HSVTK,GCVSuicide Gene System Controlled bythe hTERT Promoter in
3、 Human Bladder CancerLian Wmffeng Lin Xian野ang Zhang Swing et alDepartment of Urology,Baoding No3 Hospital,BaodingAbstract 0bjective:To investigate the efficacy of replicationdeficient adenovirus carrying theHSVTK gene under the control of the human telomerasc reverse transcriptase(hTERT)promoter an
4、dgatmiclovir(GCV)in a mouse xenograft model of bladder cancerMethods:We established the modelof human bladder cancer cell line 253J xen091afts in BALBC nude mice and administered peritonealinjections of GCV and tail vein injections of Adh。IERTHSVtkResults:The AdhTERTHSVtkGCV system more effectivelv
5、suppressed tumor growth in nude miceThe tanlor volume and weightwere obviously smaller compared to the control groupThe apoptosis index of the AdhTERTHSVtUGCV group was obviously higher than any other90upbut the proliferation index of the AdhTERTHSV-tkGCV group was lower than in the otherm-oupsConcl
6、usion:The AdtffERTHSVtkGCVsystem suppresses the gqowth of human bladder cancer in vivoThe HSVTKGCV suicide gene syslemcoutrolled by the hTERT ptvmoter can be used to treat hnman bladder canceland the effect issignificantKey words Bladder ileOplasm Carcinoma HSV-TK geneAdenovirus hTERTHSVtkGCV系统在肿瘤自杀
7、基因治疗中的研究最为广泛1人端粒酶逆转录酶(Hllman Telom通讯作者:连文峰medlwfsina cornerase Revelserraascriptase,hTERT)是维持端粒酶活性所必需的催化亚单位,它的表达调控在转录水万方数据2007年第34巷第18期 人端粒酶逆转录酶启动子调控腺病毒舟导胸苷激酶基因治疗人膀耽癌的动物窭验研究 1059平上利州hTERT启动子来凋控病毒携带的目的基因,理论上可使病毒选择性在端粒酶阳性的肿瘤细胞中表达目的基因。因此可以靶向性杀伤肿瘤细胞。我们建立了BALBC裸鼠膀胱癌细胞的移植瘤模型,采用尾静脉注射AdhTERTHSVtk,结合腹腔注射GCV对
8、AdhTERTHSVtkGCV的体内抗肿瘤效果进行初步探讨。1材料与方法11材料复制缺陷型重组腺病毒AdhTERTHSVtk由河北医科大学第二医院泌尿外科王亚轩等构建提供“1:人膀胱癌细胞株253J南上海东方肝胆外科医院钱其军博士惠赠;BALBC裸鼠;5,-6周龄,共28只,雌性重量18229购自中国医学科学院动物培育中心。GCV购于湖北科益药业有限公司,培养液RPMll640、舍10灭活胎牛fl【清(FBS)均购自美国GIBCO公亡d。12方法121膀胱癌裸鼠皮下移植瘤模型建立、分组及治疗方法体外培养人膀胱癌细胞株253J,取对数生长期细胞,用025的胰酶消化,离心后收集细胞,调整细胞悬液浓
9、度为2x10,细胞ml,在裸鼠右前肢皮下接种O2ml。观察小鼠肿瘤生长情况,当肿瘤生长至直径约为6mm和(或)体积为100mm3时,经统计学检验裸鼠间肿瘤体积无统计学意义(挎O05),后分组试验。肿瘤体积计算按公式:(体积=长径短径2x0523 6)。对荷瘤裸鼠进行随机分组,选用瘤体大小一致的裸鼠28只,分为4组,每组7只。1)AdhTERTHSVtkGCV治疗组:于第1、3、5、7、9天每只裸鼠尾静脉内注射浓缩病毒液AdhTERTHSVtk(510。pfu)01ml。第2天腹腔注射GCV lOOmg(kgd)15d。2)Ad_hTERTHSVtk治疗组:在裸鼠尾静脉注射Ad-hTERTHSV
10、tk(5x109pfu)0,1ml,第2天腹腔注射PBS 100山15d。3)GCV治疗组:在裸鼠尾静脉内注射PBS 1001xl,腹腔注射GCV 100rag(kgd)x15d。4)对照组:裸鼠尾静脉内每天仅注射PBS 100肛1。l 22观察指标 1)AdhTERTHSVtkGCV治疗肿瘤的疗效观察。肿瘤生长抑制的观察:自注射药物开始。每7天用圆规和游标卡尺测量肿瘤犬小,计算肿瘤的体积描绘肿瘤的生长曲线,共观察6周。按公式:(1-治疗组体积对照组体积)x100,计算肿瘤生长抑制率。观察期结束后采用颈椎脱臼法处死裸鼠,取对照组和治疗组的肿瘤组织称重。Ad-hTERT-HSV-tkGCV治疗后
11、,观察裸鼠存活期。2)肿瘤细胞病理学观察及细胞凋亡。取肿瘤组织及心、肝、肾等重要脏器经HE染色后在400高倍镜F仔细对比观察。应用TUNEL法检测细胞凋亡。用图像分析系统测定10个400高倍镜下记数每个视野内阳性细胞占100个肿瘤细胞的比例取其平均值作为捅亡率3)免疫组化染色检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。采用免疫组化染色法检测,核染色为深棕色为1)CNA表达阳性细胞,400高倍镜下记数每个视野内阳性细胞占100个肿瘤细胞的比例,连续观察lO个视野,取其平均值作为PCNA增殖指数(PI)。13统计学方法对实验中所获得的各种数据均采用均数4-标准差表示,各组数据之由j比较采用单因素方差分析
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