血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)测定(赖氏法).doc
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1、精品文档,仅供学习与交流,如有侵权请联系网站删除授课对象:06级检验1-5班 课 时:2学时血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)测定(赖氏法)目 标:1.掌握赖氏法测血清ALT的原理及注意事项 2.掌握试剂的配制熟练地制作标准曲线 3.规范地进行ALT测定 4.了解血清ALT测定的临床意义实验用品:配制试剂用的各种器皿(烧杯、容量瓶、电炉、分析天平等)、37水浴箱、 721型风光光度计、坐标纸等 原理:丙氨酸和-酮戊二酸在血ALT的作用下生成丙酮酸及谷氨酸,在酶反应达到规定时间时,加入2.4-二硝基苯肼-盐酸溶液以终止反应。生成的丙酮酸与入2.4-二硝基苯肼作用,生成丙酮酸入2.4二硝基苯腙,苯腙在
2、碱性条件下显红棕色。根据显色之深浅,求得血清中丙氨酸氨基转移酶活力。试剂:1. 0.1molPH7.4磷酸盐缓冲液 称取磷酸氢二钠(Na2HPO4 AR)11.928g,磷酸二氢钾(KH2PO4 AR)2.176g,加少量蒸馏水溶解并稀释至1000mL。2. ALP基质液 称取DL丙氨酸CHCH(NH)COOH1.79g,-酮戊二酸COOH(COCOOH)29.2mg于烧杯中,加入0.1mol/L PH7.4磷酸盐缓冲液80mL,煮沸溶解后待冷,用摩尔NaOH溶液调节PH至7.4(约加入0.5ml),再用0.1mol/LPH7.4磷酸盐缓冲液稀释至100mL,混匀,加氯仿数滴,置冰箱保存数周。
3、31mmol/L2.4-二硝基苯肼溶液 称取2.4-二硝基苯肼(NO)CHNHNH AR19.8mg,用10mol/L HC110mL溶解,然后加蒸馏水至100mL,置棕色瓶内,冰箱保存。40.4mol/L NaOH溶液。52mmol/L丙酮酸标准液 精确称取丙酮酸钠CHCOCOONa AR22.0mg于100mL容量瓶中,加0.1mol/L PH7.4磷酸盐缓冲液至刻度。此液应新鲜配制,不得久放。操作:血清ALT测定步骤(赖氏法)加入物(mL)RB血清0.10.1ALP基质液0.5混匀,置37oC水浴30min2.4-二硝基苯肼0.50.5ALP基质液0.5混匀,置37oC水浴20min0.
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