铁皮石斛组培技术.doc
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1、-!铁皮石斛的组织培养研究专业班级: 姓 名: 学 号: 课 程: 植物组织培养 目 录摘 要3Abstract4前言51.培养基51.1配方51.2配制(以1000ml幼株的生根壮苗培养基为例)61.3灭菌72.转接82.1转接前准备82.2转接82.3培养93.炼苗93.1炼苗目的93.2炼苗方法94.移栽104.1基质选择104.2移栽技术要求105.结论与分析11参考文献13摘 要 铁皮石斛(Dendrobium officinale)是兰科(Orchidaceae)石斛属(DendrobiumSw)多年生草本植物。铁皮石斛为石斛之极品,它因表皮呈铁绿色而得名。铁皮石斛是传统名贵中药材
2、,有生津益胃、清热养阴和清咽利嗓等功效,主要药用成分石斛多糖是一种免疫调节剂。铁皮石斛蒴果成熟时易开裂,且种子粒径小,自然繁殖率低。为了保护和有效利用铁皮石斛,通过组织培养技术大量快速繁殖铁皮石斛组培苗显得尤为重要。关键词:铁皮石斛 组织培养 移栽 培养基 转接 快速繁殖 AbstractDendrobium orchid Dendrobium is a perennial herb. It is the ultimate in DendrobiumSw,named for its ferric green epidermis.As a rare traditional Chinese her
3、bal medicine,it contributes to dry dampness and strengthen the spleen,clear away lung-heat ,nourish yin ,clear away heat ,and so on.The main medicinal components of Dendrobium polysaccharide is a kind of immune modulators.When mature,its capsule cracks,in which seeds are in small particle size and h
4、ave a low rate of natural reproduction.In order to protect and utilize the Dendrobium orchid Dendrobium ,it is particularly important to establish a rapid propagation by the tissue culture technique .key words:Dendrobium orchid Dendrobium tissue culture culture medium adapter rapid propagation 前言 多年
5、生草本,具有气生根。茎直立丛生、高30-50cm,肉质稍扁,有节、有槽沟,黄绿色。单叶互生,叶片革质,无柄,狭长椭圆形或近披针形,叶鞘抱茎。总状花序腋生,每个花序有花2-3朵,白色,先端淡紫红色。铁皮石斛为兰科石斛属多年生草本植物。作为我国传统的名贵中药,具有重要的药用价值。由于长期过度采挖,加之本身繁殖率低,导致其野生资源急剧减少,日趋濒危,现已被列为国家重点保护植物,成为国家重点保护的药材品种。 试验结果表明,MS、N6和B5等3种基本培养基对铁皮石斛芽诱导和增殖的效果, B5要优于其他基本培养基;在激素浓度配中,铁皮石斛原球茎在6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L中,增殖系数最大
6、;天然附加物对铁皮石斛增殖的影响差异很大,实际应用中宜选用香蕉汁为添加剂;在B5+蔗糖30g/L+香蕉汁100mg/L+琼脂5.8g/L基本培养基中,加入的NAA对铁皮石斛芽的生根以1.0mg/L处理的效果最好,但考虑到NAA价格较贵,且在浓度范围为0.2-1.0之间对生根的影响差异不明显,在实际应用中以选用0.2mg/L的NAA为好;生成的小苗经过炼苗后,在铺有一层苔藓的含有75锯末+20泥炭土+5碎磁片的基质上能够良好的生长。1.培养基1.1配方根据不同阶段,培养基配方有所差异。如表1-1表1-1 各种培养基配方不同阶段培养基备注愈伤组织(原球茎)的诱导MS+2.0mg/L6-BA+3%蔗
7、糖+0.8%琼脂pH=5.8原球茎的增殖MS+20%马铃薯+3%蔗糖+0.8%琼脂pH =5.8原球茎的分化MS+20%马铃薯+2.0mg/LNAA+3%蔗糖+0.8%琼脂pH=5.8幼株的生根壮苗MS+10%香蕉+2.0mg/LNAA+3%蔗糖+0.8%琼脂pH=5.4-5.61.2配制(以1000ml幼株的生根壮苗培养基为例)配方:10%香蕉(w/w)+MS +3%蔗糖(w/w)+0.8%琼脂(w/w)+2.0mg/L NAA1)量取800ml蒸馏水于洁净的大烧杯中,加热至沸腾;2)准确称量100g香蕉果肉,切成碎片状,并倒入上述烧杯中,加热煮沸5min,其间搅拌使之充分溶解;3)按照大量
8、、微量、Fe2+盐、有机、有机顺序,量取MS各种母液于盛有50ml蒸馏水的烧杯,混合均匀;4)将2)和3)的溶液混合,然后加入30g蔗糖,并移取2ml NAA(0.1mg/ml),混合均匀;5)加热至沸腾,加入8g琼脂并煮沸5min,其间不断搅拌使之充分溶解;6)冷却至505时,调pH至5.45.6。分装于培养瓶内,33.3ml/瓶。培养基附加物:(1)天然添加物 在基本培养基中加人香蕉汁、马铃薯汁、绿豆芽汁、苹果汁仁、椰子乳等能促进铁皮石斛幼苗的生长和根系的发育,香蕉汁的促进作用最为显著。(2)炭源 铁皮石斛在生根培养时加入活性炭有利于试管苗的生长,能使根系长得更加粗壮闭。唐桂香等认为在培养
9、基中添加活性炭有助于提高试管苗的成活率,但对苗的根数和根长影响小。注意事项溶解香蕉的蒸馏水尽可能多,以确保香蕉各种成分完全溶解;各种母液混合时,要按照大量、微量、Fe2+盐、有机、有机的顺序;煮沸时,小心溶液溢出;分装时不要污染培养瓶瓶口。1.3灭菌1.3.1培养基灭菌1)检查灭菌锅的水位、电源、排气阀、排气管、安全阀以及压力表,确保灭菌锅各指标和功能的正常,以防事故发生;2)把带灭菌的培养基装入锅内,盖上锅盖,对称而均匀地扭紧螺丝;3)打开电源和排气阀,调节电压至220V;4)待排气阀排除水蒸气30s1min后,关闭排气阀;5)当温度上升到121后,调节电压至135V,保持20min;6)关
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