2022年人用狂犬病疫苗 .pdf
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1、人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)Renyong Kuangquanbing Yimiao(Dishushen Xibao) Rabies Vaccine For Human Use (PHK Cell) 本品系用狂犬病病毒固定毒接种原代地鼠肾细胞,经培养、收获病毒液、灭活病毒、 浓缩、纯化,加入适宜的稳定剂后制成,用于预防狂犬病。1 基本要求生产和检定用设施、原材料及辅料、水、器具、动物等应符合凡例 有关要求。2 制造2.1 生产用细胞生产用细胞为原代地鼠肾细胞或连续传代不超过5 代的地鼠肾细胞。2.1.1 细胞管理及检定应符合 生物制品生产和检定用动物细胞基质制备及检定规程规定。2.1.2 细胞
2、制备选用 1214 日龄地鼠,无菌取肾,剪碎,经胰蛋白酶消化,分散细胞,接种培养瓶,用适宜的培养液进行培养。来源于同一批地鼠、同一容器消化制备的地鼠肾细胞为一个细胞消化批。源自同一批地鼠、于同一天制备的多个细胞消化批为一个细胞批。2.2 毒种2.2.1 名称生产用毒种为狂犬病病毒固定毒aG株或其他经地鼠细胞适应的狂犬病病毒固定毒株。2.2.2 种子批的建立应符合 生物制品生产和检定用菌毒种管理规程规定。原始种子批为2aG1,主种子批应不超过4aG。毒种在地鼠肾原代细胞和豚鼠脑内交替传代制备工作种子批,在地鼠肾原代细胞的传代应不超过第6 代,即不超过10aG;在豚鼠脑内传代应不超过第5 代,即
3、10aG5。2.2.3 种子批的检定主种子批应进行以下全面检定,工作种子批应至少进行2.2.3.1-2.2.3.5 项检定。2.2.3.1 鉴别试验用小鼠脑内中和试验鉴定毒种的特异性。将毒种作10 倍系列稀释,取适宜稀释度病毒液与等量狂犬病病毒特异性免疫血清混合,同时设立正常血清对照组,试验组与对照组的每个稀释度分别接种11-13g 小鼠 6 只, 每只脑内接种0.03ml, 观察 14 天,中和指数应不低于 500。2.2.3.2 病毒滴定取毒种作10 倍系列稀释,每个稀释度脑内接种体重为11-13g 小鼠至少6 只,每只脑内接种 0.03ml, 观察 14 天,病毒滴度应不低于8.0 Lg
4、LD50/ml。2.2.3.3 无菌检查依法检查(附录XII A) ,应符合规定。2.2.3.4 支原体检查依法检查(附录XII B) ,应符合规定。2.2.3.5 病毒外源因子检查依法检查(附录XII C) ,应符合规定。2.2.3.6 免疫原性检查名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 1 页,共 4 页 - - - - - - - - - 用主种子批毒种制备灭活疫苗,腹腔注射体重为12-14g 小鼠,每只0.5ml。7 天后重复接种 1 次作为试验组,未经免疫小鼠做对照
5、组。第一次免疫后的第14 天,试验组和对照组分别用 10 倍系列稀释的CVS病毒脑腔攻击,每只 0.03ml,每个稀释度10 只小鼠。保护指数应不低于100。2.2.4 毒种保存冻干毒种应置-60以下保存。2.3 原液2.3.1 细胞制备同 2.1.2 项。2.3.2 培养液培养液为含适量灭能新生牛血清的乳蛋白水解物、MEM、199 或其他适宜培养液。新生牛血清的质量应符合规定(附录XIII D) 。2.3.3 对照细胞外源因子检查依法检查(附录XII C ) ,应符合规定。2.3.4 病毒接种和培养当细胞培养成致密单层后,毒种按0.010.1 MOI 接种(同一工作种子批应按同一MOI接种)
6、 ,置适宜温度下培养一定时间后,弃去培养液,用无菌PBS或其他适宜洗液冲洗去除牛血清,加入适量维持液,置33-35继续培养适当时间。2.3.5 病毒收获经培养适宜时间收获病毒液,即为病毒单次收获液。根据细胞生长情况,可换以维持液进行多次病毒收获。 同一细胞批的同一次病毒收获液经检定合格后可合并为单次病毒收获液;236 单次病毒收获液检定按 3.1 项进行。237 单次病毒收获液保存于 2-8C 保存不超过30 天。238 病毒灭活病毒收获液中按1:4000 的比例加入甲醛溶液(应在规定的蛋白浓度范围内进行病毒灭活) ,置适宜温度、在一定时间内灭活病毒。病毒灭活到期后,每个灭活容器应立即取样,分
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