ELISA(双抗体夹心法)—检测HBsAg(5页).doc
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1、-ELISA(双抗体夹心法)检测HBsAg摘要:以已知抗体(抗HBs)包被载体,然后将含有抗原的待检标本加入,共同孵育后,抗原结合于包被抗体上,再加入酶标记特异抗体(酶标抗HBs),酶标抗体连接到抗原上,最后加入底物溶液,根据颜色反应来判定抗原含量。 【材料】HBsAg试剂盒,本试剂盒含: 1、包被抗-HBs反应条 1瓶 2、酶结合物 1瓶 3、HBsAg阳性对照 1瓶 4、HBsAg阴性对照 1瓶 5、洗涤液:用前每瓶作1:20稀释 1瓶 6、显色剂(相关专题以已知抗体(抗HBs)包被,然后将含有的待检标本加入,共同孵育后,结合于包被抗体上,再加入酶标记特异抗体(酶标抗HBs),酶标抗体连接
2、到抗原上,最后加入底物溶液,根据颜色反应来判定抗原含量。【材料】HBsAg试剂盒,本试剂盒含:1、包被抗-HBs反应条1瓶2、酶结合物1瓶3、HBsAg阳性对照1瓶4、HBsAg阴性对照1瓶5、洗涤液:用前每瓶作1:20稀释1瓶6、显色剂(TMB)A1瓶7、显色剂(TMB)B1瓶8、终止液1瓶【方法】1、加入待测标本每孔0.05ml,并设HBsAg阳性对照2孔,HBsAg阴性对照2孔,空白对照1孔,然后加入酶结合物每孔1滴(0.05ml、空白对照孔不加),充分混匀后置37孵育30分钟。2、洗板:弃去反应条孔内液体、拍干、用洗涤液注满每孔,弃去拍干,反复五次后拍干。3、显色剂:先加显色剂A每孔1
3、滴(0.05ml),然后再加显色剂B每孔1滴(0.05ml),混匀,37孵育10分钟。4、每孔加终止液1滴(0.05ml),混匀。【结果】比色法:波长450nm,先用空白孔校零点,然后读取各孔光密度值。样品OD值/阴性对照平均OD值 2.1判断为阳性,否则为阴性。备注:阴性对照平均OD值低于0.05作0.05计算,高于0.05按实际OD值计算。阳性对照OD值0.8,实验结果有效。【注意事项】1、试剂盒置28保存。2、使用前试剂应摇匀,并弃去12滴后垂直滴加。3、从冷藏环境中取出试剂盒内全部瓶装试剂及待测标本所需微孔条,置室温平衡30分钟后再行测试,余者应及时封存于冰箱中以备后用。4、待测标本不可用NaN3防腐。5、不同批号试剂请勿通用。6、结果判断须在10分钟内完成。7、若浓缩洗涤液出现结晶时,请置37至溶解。第 5 页-
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