CTAB法提取细菌DNA(9页).doc
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1、-【目的和要求】1. 学会CTAB法提取细菌总DNA。2. 掌握DNA的琼脂糖凝胶电泳法。【实验原理】DNA在生物体内是与蛋白质形成复合物的形式存在的,因此提取出脱氧核糖核蛋白复合物后,必须将其中蛋白质去除。CTAB(溴代十六烷基三甲胺)是一种去污剂,它能与核酸形成复合物,在高盐溶液中可溶并且稳定存在,若降低盐浓度,CTAB与核酸的复合物会沉淀出来,而大部分蛋白和多糖仍溶于溶液中。DNA的电泳原理与蛋白质的电泳原理基本相同。DNA分子在高于其等电点的pH溶液中带负电荷,在电场中向正极移动。由于DNA分子或DNA片断的分子量差别,电泳后呈现迁移位置的差异。【实验试剂和器材】(一)试剂:菌株(E.
2、coli);蛋白酶K(20mg/ml);琼脂糖;标准DNA水解液1. 10%SDS2酚/氯仿/异戊醇(1/1/1)3. 异丙醇;70%乙醇4LB培养基:蛋白胨10g, 酵母粉5g, NaCl 10g加蒸馏水至1升,然后灭菌备用。5TE缓冲液:10mM Tris HCl, 0.1mM EDTA (pH8.0)。6 CTAB/NaCl溶液(5% w/v):5g CTAB 溶于100ml 0.5M NaCl溶液中,需要加热到65使之溶解,然后室温保存。7TAE缓冲液(50) (pH8.0):每升溶液中含有242g Tris, 57.1ml 冰乙酸,100ml 0.5mol/L EDTA。电泳时稀释成
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