水产品中硝基呋喃类代谢物的快速检测 胶体金免疫层析法.docx
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1、附件5水产品中硝基呋喃类代谢物的快速检测胶体金免疫层析法(KJ201705)1 范围本方法规定了水产品中硝基呋喃类代谢物快速检测方法。本方法适用鱼肉、虾肉、蟹肉等水产品中呋喃唑酮代谢物(AOZ)、呋喃它酮代谢物(AMOZ)、呋喃西林代谢物(SEM)、呋喃妥因代谢物(AHD)的快速测定。2 原理样品中硝基呋喃类代谢物经衍生处理后,其衍生物与胶体金标记的特异性抗体结合,抑制抗体和检测卡/试纸条中检测线(T线)上硝基呋喃类代谢物-BSA偶联物的免疫反应,从而导致检测线颜色深浅的变化。通过检测线与控制线(C线)颜色深浅比较,对样品中硝基呋喃类代谢物进行定性判定。3 试剂和材料除另有规定外,本方法所用试
2、剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的二级水。3.1 试剂3.1.1 盐酸。3.1.2 三水合磷酸氢二钾。3.1.3 氢氧化钠。3.1.4 甲醇。3.1.5 乙醇。3.1.6 乙腈。3.1.7 邻硝基苯甲醛。3.1.8 三羟甲基氨基甲烷。3.1.9 乙酸乙酯。3.1.10 正己烷。3.1.11 邻硝基苯甲醛溶液(10mmol/L):准确称取0.150g邻硝基苯甲醛,用甲醇(3.1.4)溶解并定容至100mL。3.1.12 磷酸氢二钾溶液(0.1mol/L):准确称取22.822g三水合磷酸氢二钾(3.1.2),用水溶解并定容至1000mL。3.1.13 氢氧化钠溶液(1mol/L):准确称
3、39.996g氢氧化钠(3.1.3),用水溶解并稀释至1000mL。3.1.14 盐酸溶液(1mol/L):取10mL盐酸(3.1.1)加入到110mL水中。3.1.15 三羟甲基氨基甲烷溶液(10mmol/L):准确称取1.211g三羟甲基氨基甲烷(3.1.8),溶于80mL水中,加入盐酸(约42mL)调pH至8.0后用水定容至1L。3.2 参考物质3.2.1 硝基呋喃类代谢物参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见表1,纯度99%。表1 硝基呋喃类代谢物参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量中文名称英文名称CAS登录号分子式相对分子量3-氨基
4、-2-恶唑烷酮3-anmino-2-oxazolidinone,AOZ80-65-9C3H6N2O2102.095-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮5-morpholine-methyl-3-amino-2-oxazolidinone,AMOZ43056-63-9C8H15N3O3201.221-氨基-2-乙内酰脲盐酸盐1-Aminohydantoinhydrochloride,AHD2827-56-7C3H5N3O2HCl151.55氨基脲盐酸盐semicarbazidhydrochloride,SEM563-41-7NH2CONHNH2HCl111.53注:或等同可溯源物质。3.3 标准溶
5、液的配制3.3.1 标准储备液:分别准确称取适量参考物质(精确至0.0001g),用乙腈溶解,配制成100mg/L的标准储备液。-20冷冻避光保存,有效期12个月。3.3.2 混合中间标准溶液:准确移取标准储备液(3.3.1)各1mL于100mL容量瓶中,用乙腈定容至刻度,配制成浓度为1mg/L的混合中间标准溶液。4冷藏避光保存,有效期3个月。3.3.3 混合标准工作溶液:准确移取0.1mL混合中间标准溶液(3.3.2)于10mL容量瓶中,用乙腈定容至刻度,配制成浓度为0.01mg/L的混合标准工作溶液。4冷藏避光保存,有效期1个月。3.4 材料3.4.1 AOZ试剂盒(含胶体金试纸条或检测卡
6、及配套的试剂)。3.4.2 AMOZ试剂盒(含胶体金试纸条或检测卡及配套的试剂)。3.4.3 SEM试剂盒(含胶体金试纸条或检测卡及配套的试剂)。3.4.4 AHD试剂盒(含胶体金试纸条或检测卡及配套的试剂)。3.4.5 固相萃取柱(强阴离子交换型):规格1mL,填装量为60mg。4 仪器和设备4.1 电子天平:感量分别为0.1g和0.0001g。4.2 均质器。4.3 水浴箱。4.4 离心机。4.5 氮吹仪或空气吹干仪。4.6 移液枪:10L,100L,1000L,5000L。4.7 涡旋振荡仪。4.8 胶体金读数仪(可选)。4.9 固相萃取装置(可选)。4.10 环境条件:温度15-35,
7、湿度80%。5 分析步骤5.1 试样制备按照方法要求,称取一定量具有代表性样品可食部分(注:甲壳类,试样制备时须去除头部),用于后续实验。5.2 试样提取和净化称取适量的匀浆样品(以试剂盒操作说明书要求来定,精确至0.01g)于50mL离心管。5.2.1 方法一(液液萃取法)称取2g0.05g均质组织样品于50mL离心管中,依次加入4mL去离子水、5mL1mol/L盐酸(3.1.14)和0.2mL10mmol/L邻硝基苯甲醛溶液(3.1.11),充分振荡3min;将上述离心管在60水浴下孵育60min;依次加入5mL0.1mol/L磷酸氢二钾溶液(3.1.12),0.4mL1mol/L氢氧化钠
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