皮肤刺激皮内试验.ppt
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1、刺激试验,刺激是不涉及免疫学机制的一次、多次或持续与试验材料接触所引起的局部炎症反应。,皮肤刺激试验,评价材料在试验条件下产生皮肤刺激反应的潜在性。 家兔为首选,预期无反应,可直接使用3家兔。,试验材料与仪器,天平 精度 0.01或0.1g 供试品称量用 精度 0.1或1mg 试剂称量用 精度 50g 试验用兔称量用 兔固定装置、手术剪刀、推子、游标卡尺、称量瓶、吸管、移液管、包扎带、医用纱布、烧杯、压力蒸汽灭菌器。,试剂与器具灭菌,试剂 75%(V/V)乙醇、0.9氯化钠注射液或其它规定的浸提介质。 器具灭菌 与供试品接触的所有器具应采用可靠的方法灭菌,置压力蒸汽灭菌器内121恒温20分钟,
2、或置电热干燥箱内160干烤2h。,试验动物 应使用清洁级健康、初成年的、未使用过的试验用(新西兰)兔,雌雄兼用, 同一品系,同一饲养条件,体重应不低于2kg。,试验用兔的抓取固定方法 试验用兔比较驯服不会咬人,但脚爪较尖应避免兔抓伤。进行刺激试验时,只需将兔抓牢或按住即可,抓兔的方法是用右手把两耳轻轻地拿在手心,抓住颈后部的皮厚处,提取兔,然后用左手托住臀部,使兔的体重大部分落在左手上,不能单提两耳、捉拿四肢、提抓腰部和背部。,预试验 试验材料应使用1只动物进行初试。如动物出现清晰红斑或水肿时,不必再进行其他试验。 如试验动物没有出现清晰的红斑或水肿反应时,应至少再选用2只动物进行试验。,试
3、验 步 骤,动物准备 试验前一天, 将试验用兔人工固定或固定到固定装置上,然后把背部脊柱两侧的被毛用手术剪粗剪后再用推子小心的把被毛去除干净(约10cm15cm区域),作为试验和观察部位。去毛过程应确保动物皮肤健康无损伤。,试验方法,试验前用75的(V/V)乙醇擦拭背部去毛区域,等变干后根据供试品的不同性状选用不同的方法进行操作。,粉剂或液体样品 取0.5g或0.5mL的试验材料,直接涂抹到剃毛皮肤部位。粉剂使用前用少量的水制成糊状,有利于涂抹。 用25mm25mm透气性好的敷料敷贴涂抹样品的皮肤部位, 然后敷料外层用纱布包裹,再用半封闭性包扎带固定敷料和纱布4h以上。接触期结束后依次取下包扎
4、带、纱布及敷料, 对接触部位进行标记,用温水清洗并擦干。,固体样品 研成粉末,试验材料可用水充分湿化以保证与皮肤良好的接触性。 用25mm25mm的透气性好的敷料块覆盖材料接触部位, 然后敷料外层用纱布包裹,再用半封闭性包扎带固定敷料和纱布4h以上,依次取下包扎带、纱布及敷料, 对接触部位进行标记,用温水清洗并擦干。,药包材: 铝质软胶管:取试样5 支,向每支加入标示容量的0.9氯化钠注射液,振荡5分钟后,合并提取液备用。 一般材料:取平整部位表面积600cm2剪碎,加入氯化钠注射液100mL,70放置24小时后取出冷却备用。,0.9氯化钠注射液及其浸提液 将浸提液滴到25mm25mm的4层纱
5、布块上(每块约0.5mL), 按下图所示部位敷贴于动物背部两侧。将滴有0.9氯化钠注射液的纱布块敷贴在对照接触部位。 然后敷料外层用纱布包裹,再用半封闭性包扎带固定敷料和纱布4h以上,依次取下包扎带、纱布及敷料, 对接触部位进行标记,用温水清洗并擦干。,去毛的背部区域,对照部位,供试品部位,供试品部位,对照部位,头部,尾部,结果观察 在除去敷贴物后1h、24h、48h和72h记录各接触部位情况。如存在持久性损伤有必要延长观察时间, 以评价这种损伤的可逆性或不可逆性,但延长期不必超过14d。 按下表规定的分类系统, 描述每一接触部位在每一规定时间内皮肤红斑和水肿反应情况并评分, 记录结果以出具试
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