乙肝病毒的检测讲稿.ppt
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1、第一页,讲稿共二十六页哦1,Hepatitis B virion(Dane particle)2,secreted filament3,secreted sphere6第二页,讲稿共二十六页哦 HBV是嗜肝脱氧核糖核酸病毒科的哺乳动物属的一员。 HBV阳性的血清中有三种病毒颗粒.大球形颗粒,完整的HBV颗粒直径为42nm,又名Dane颗粒,分为包膜与核心的两部分,外衣壳及包膜含有表面抗原,衣壳内为核心结构,有核心抗原,核心抗原下面藏有e抗原。第三页,讲稿共二十六页哦 .小球形颗粒,阳性血清中最多的颗粒,主要为表面抗原,不含核酸及成分,为不完整的 .管形颗粒,实际上是一串小球形颗粒聚合在一起的,
2、也含有表面抗原第四页,讲稿共二十六页哦5生物化学检测生物化学检测1HBV血清标志物的检测血清标志物的检测2HBV 分子生物学诊断分子生物学诊断3HBV临床药物疗效检测临床药物疗效检测4HBVHBV感染的实验室检查感染的实验室检查第五页,讲稿共二十六页哦 主要指标: ALT, AST, ASTm, 血清白蛋白,血清胆红素, 胆碱酯酶, 甲胎蛋白, 凝血酶原时间(PT)及部分凝血因子;6第六页,讲稿共二十六页哦 方法学方法学 ELISA:灵敏性高,成本低,适用于普通病人筛查;胶体金免疫层析法胶体金免疫层析法(金标法金标法):简便易行,可用于急诊病人快速检测; 化学发光法定量检测:化学发光法定量检测
3、:价格昂贵,可用于HBVMs为临界值的病人的确证;可间接反映宿主HBV的复制水平,在评价抗病毒治疗的病毒学应答、疗效和判断预后方面有重要意义。 新增检测指标新增检测指标PreS1、PreS2及其相应抗体 对乙肝两对半认识对乙肝两对半认识72. HBV HBV 血清标志物检测血清标志物检测第七页,讲稿共二十六页哦8PreS1PreS1检测的临床价值检测的临床价值前S1蛋白主要存在于Dane颗粒和管型颗粒上,在HBV感染宿主细胞 过程及在病毒复制和刺激机体产生免疫反应中起重要作用;前S1抗原与HBeAg之间有高度相关性,并可区别因变异种及其他原因造成的乙肝病毒e抗原(HBeAg)假阴性,可作为HB
4、eAg假阴性补充,从而准确反映患者体内病毒复制情况;可作为HBV感染及复制的标注,与其它血清标志物联合检测,相互补充。Back第八页,讲稿共二十六页哦 乙型肝炎的两对半乙型肝炎的两对半1.乙肝病毒表面抗原(HBsAg)和表面抗体(HBsAb), 2.e抗原(HBeAg)和e抗体(HBeAb),3.核心抗原(HBcAg)和核心抗体(HBcAb)这三对 乙肝病毒的抗原和抗体。由于HBcAg主要存在于受感染的肝细胞及乙肝病毒颗粒的核心内,一般血清中较难检测到,只有用特殊的方法处理后才能查到,所以通常只能检测到HBcAb,也就是说这第三对通常只能检测到半对,所以称之为两对半。两对半是乙肝病毒最常用的血
5、清学标记。 第九页,讲稿共二十六页哦第十页,讲稿共二十六页哦第十一页,讲稿共二十六页哦第十二页,讲稿共二十六页哦13大三阳大三阳小三阳小三阳第十三页,讲稿共二十六页哦14 HBV DNA 定量检测定量检测 病毒复制水平最可靠,最直接的证据,与传染性和疾病进展密切相关; 主要用于HBV感染的判断,治疗适应症的选择及抗病毒疗效的判断。 HBV基因分型基因分型 基因分型的必要性; 基因分型的主要方法; HBV耐药突变的检测耐药突变的检测3.HBV 3.HBV 分子生物学诊断分子生物学诊断第十四页,讲稿共二十六页哦病毒基因突变病毒基因突变疾病进展疾病进展临床表现临床表现对干扰素应答对干扰素应答耐药变异
6、耐药变异生化学改善生化学改善HBeAg血清学转换血清学转换HBV DNA清除清除急性乙型肝炎急性乙型肝炎慢性乙型肝炎慢性乙型肝炎肝硬化肝硬化 (LC)肝细胞癌肝细胞癌 (HCC)15HBV基因型基因型/基因亚型基因亚型第十五页,讲稿共二十六页哦分型方法分型方法优缺点优缺点序列测定法序列测定法最直接,最可信,是最直接,最可信,是HBV基因分型的金标准,但繁琐费时而且基因分型的金标准,但繁琐费时而且价格昂贵,混合型检测能力差,不适于大样本检测。价格昂贵,混合型检测能力差,不适于大样本检测。 聚合酶链反应聚合酶链反应-限制性片段长限制性片段长度多态性分析法度多态性分析法 (PCR-RFLP)较测序法
7、简便,适于大样本检测,但由于需要进行酶切,所以较测序法简便,适于大样本检测,但由于需要进行酶切,所以操作仍较为繁琐,成本较高,并存在酶切不彻底等问题。操作仍较为繁琐,成本较高,并存在酶切不彻底等问题。 pre-S2单克隆抗体酶联免疫单克隆抗体酶联免疫测定测定 (mAbs EIA法法)简单、快速,已商品化,适于大样本检测,但检测费用较高并简单、快速,已商品化,适于大样本检测,但检测费用较高并不能有效鉴别有些混合型感染和不能有效鉴别有些混合型感染和HBsAg低表达及某些表位表达低表达及某些表位表达不充分的标本。不充分的标本。分子探针杂交法分子探针杂交法简单、快速,对混合型检测非常敏感,已商品化,适
8、于大样本简单、快速,对混合型检测非常敏感,已商品化,适于大样本检测,但检测费用较高而且灵敏度和特异度还有待提高。检测,但检测费用较高而且灵敏度和特异度还有待提高。型特异性引物型特异性引物PCR法法简单、快速,成本低,具有较高的灵敏度,适于流行病学研究简单、快速,成本低,具有较高的灵敏度,适于流行病学研究和临床大样本检测。但特异度还有待提高。和临床大样本检测。但特异度还有待提高。常用常用HBV基因分型方法比较基因分型方法比较16第十六页,讲稿共二十六页哦1.乙肝病毒DNA 定量往往被描述成为判断乙肝传染性大小、病情严重程度以及治疗效果的“金指标”,其实这些认识都是片面的。乙肝病毒DNA 定量检测
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