PCR基因扩增实验室的规范化设置.pdf
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1、PCR 基因扩增实验室的标准化设置为防止污染,必须严格遵循临床基因扩增检验实验室设置标准设置临床基因扩增检验实验室。 临床基因扩增检验实验室四个隔开的工作区域中每一区域都须有专用的仪器设备。各区域都必须有明确的标记,以防止设备物品如加样器或试剂等从其各自的区域内移出从而造成不同的工作区域间设备物品发生混淆。进入各个工作区域必须严格遵循单一方向顺序,即只能从试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区简称扩增区至产物分析区,防止发生交叉污染。在不同的工作区域应使用不同颜色或有明显区别标志的工作服,以便于鉴别。此外,当工作者离开工作区时,不得将各区特定的工作服带出。 清洁方法不当也是污
2、染发生的一个主要原因,因此实验室的清洁应按试剂贮存和准备区至扩增产物分析区的方向进行。不同的实验区域应有其各自的清洁用具以防止交叉污染。一试剂贮存和准备区下述操作在该区进行:贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。贮存试剂和用于标本制备的材料应直接运送至试剂贮存和准备区,不能经过产物分析区。在打开含有反应混合液的离心管或试管前,应将其快速离心数秒。试剂原材料必须贮存在本区内,并在本区内制备成所需的贮存试剂。当贮存试剂溶液经检查可用后,应将其分装贮存备用,防止由于经常打开反应管吸液而造成污染。含反应混合液的离心管或试管在冰冻前都应快速离心数秒。大多数用于扩增的试剂都应冰冻贮存。为防止因单
3、次反应取液而频繁的冻融主贮存试剂,应分装冰冻贮存试剂溶液。贮存试剂的分装体积根据通常在实验室内一次测定所需的扩增反应数来决定。主反应混合液的组成成份尤其是聚合酶的适用性和稳定性通过预试验来检查,评价结果必须有书面报告。对于热启动技术在第一个高温变性步骤后加入酶,聚合酶也可不包含在主反应混合液中。在整个本区的实验操作过程中,操作者必须戴手套,并经常更换。此外,操作中使用一次性帽子也是一个有效地防止污染的措施。 严禁用嘴吸取液体,加样器和吸头等必须经高压处理。工作结束后必须立即对工作区进行清洁。本工作区的实验台外表应可耐受诸如次氯酸钠的化学物质的消毒清洁作用。实验台外表的紫外照射应方便有效。由于紫
4、外照射的距离和能量对去污染的效果非常关键,因此可使用可移动紫外灯254nm 波长,在工作完成后调至实验台上 6090cm 内照射。由于扩增产物仅几百 bp,对紫外线损伤不敏感,因此紫外照射扩增片段必须延长照射时间,最好是照射过夜。实验室及其设备的使用必须有日常记录。二标本制备区下述操作在该区进行:临床标本的保存,核酸RNA、DNA提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定 RNA 时 cDNA 的合成。 要正确使用加样器。由于在加样操作中可能会发生气溶胶所致的污染,所以应防止在本区内不必要的走动。可通过在本区内设立正压条件防止从邻近区进入本区的气溶胶污染。为防止样本间的交叉污染,加入待测核酸后,必须
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