第一节 高效液相色谱法概述.pdf
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1、高效液相色谱(HPLC) High Performance Liquid Chromatograchy HPLC发展简史 1906年,茨维特(Tswett) 首次提出“色谱法”和 色 谱图; 1940年,Martin和Synge提出 了气液分配色谱的完整理论; 60年代中后期,引入气相色 谱理论,采用高效固定相、 高灵敏度检测器,发展成现 代液相色谱法。 M. S. Tswett 碳酸钙 色谱带 溶剂 HPLC的定义和特点 液相色谱法是指流动相为液体的色谱技术。 HPLC的特点 高压: 150 350 atm 高速: 一般都小于1h 高效: 30000塔板/米 高灵敏度:10-9 10-11g
2、级 应用范围广:只要试样能制成溶液就可测量, 不需要气化,不受试样挥发性的限制。 经典LC与HPLC比较 经典LCHPLC 柱之内径15 cm0.4 cm 色谱柱长度50100 cm1550 cm 填充材料粒度150200 m 410 m 使用压力110 atm50200 atm 分离时间0.5 h天10 min HPLC与GC的比较 高效液相色谱气相色谱 流动相 可选用不同极性的液体可选用不同极性的液体 选择余地大选择余地大 对分离影响大对分离影响大 对组分没有亲和力的惰对组分没有亲和力的惰 性气体,对分离选择性性气体,对分离选择性 几乎无影响几乎无影响 分 析 对 象 高沸点、热稳定性差、高沸点、热稳定性差、 相对分子量大的物质,相对分子量大的物质, 占有机物总数占有机物总数 75%80% 气体和沸点较低,热稳气体和沸点较低,热稳 定性好,相对分子量定性好,相对分子量400 以以下的化合物,约占有下的化合物,约占有 机物总数机物总数15%20% 色谱柱 温度 通常为室温通常为室温一般较高一般较高 HPLC的局限性 1. 成本高、环境污染、梯度洗脱操作复杂。 2. 缺少灵敏度高的通用型检测器 3. 复杂样品分离,缺少总理论塔板数达数十万的 色谱柱。 微型化液相色谱、 超高效液相色谱(UPLC)
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