氨基酸自动分析仪对乳制品中羟脯氨酸的测定方法研究.pdf
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1、现代食品科技 Modern Food Science and Technology 2008,Vol.24,No.7 719 氨基酸自动分析仪对乳制品中羟脯氨酸的 测定方法研究 氨基酸自动分析仪对乳制品中羟脯氨酸的 测定方法研究 曾暖茜1,王洪健1,周兴起2,冯志强1(1.广东省食品质量监督检验站,广东 广州 510308)(2.广东省食品工业公共实验室,广东 广州 510308)摘要:本文用氨基酸自动分析仪测定乳制品中羟脯氨酸的含量,研究了样品预处理方法和仪器色谱分离条件,测得样品中羟脯氨酸的含量,可作为乳粉中是否添加动物胶原水解蛋白的依据,此方法灵敏度高,具有较好的准确度和重现性,添加标准
2、的回收率为94.9%105%。关键词:羟脯氨酸;氨基酸自动分析仪;动物胶原水解蛋白 中图分类号:TS207.3;文献标识码:A;文章篇号:1673-9078(2008)07-0719-03 Determination of Hydroxyproline in Dairy Products by Amino Acid Autoanalyzer ZENG Nuan-xi1,WANG Hong-jian1,ZHOU Xing-qi2,FENG Zhi-qiang1(1.Guangdong Food Quality Supervision and Inspection Station,Guangzho
3、u 510308,China)(2.Guangdong Provincial Public Laboratory of Food Industry,Guangzhou 510308,China)Abstract:The separation and analysis of hydroxyproline in milk powder and hydrolyzed animal protein were researched by amino-acid analyzer.The method was convenient,accurate and practical,with the recove
4、ry rate being 94.9%105%.Key words:Hydroxyproline;amino-acid autoanalyzer;hydrolyzed animal collagen proteins 羟脯氨酸(Hydroxyproline,Hyp)又名反式-4-羟基-L-脯氨酸,分子式为C5H9NO3,分子量131.13,是胶原蛋白所特有的氨基酸,在正常胶原蛋白中含量约13.4%1,在弹性蛋白中含量极少,而在其他蛋白中则不存在。胶原蛋白中含有大量的羟脯氨酸是这类蛋白特有的性质,由测定羟脯氨酸的质量浓度再乘以相应的系数就可以得到胶原蛋白的含量2。动物胶原水解蛋白是一种廉价蛋白原
5、料,是将牛皮及其制品下脚料等成分粗加工后制成的水解蛋白质,某些非法厂家在乳粉中掺入廉价的水解动物蛋白来冒充或替代乳蛋白质,提高乳中蛋白的质量分数,降低成本。掺加动物胶原水解蛋白不但会影响乳的口感和风味,改变牛乳的溶解度,因其氨基酸的组成不合理,且不易消化,所以营养价值低下,导致人体吸收利用率降低,会严重影响消费者的健康状况3。羟脯氨酸的测定方法包括比色法4、氨基酸自动分析仪法5、HPLC法6、电泳法等,比色法特异性、灵敏度、准确性都较差,测量结果也容易受多种因素影 收稿日期:2008-06-16 作者简介:曾暖茜(1981-),硕士,研究方向为食品检验 响,HPLC法需要柱前衍生,反应操作复杂
6、,而氨基酸分析仪法中羟脯氨酸与茚三酮反应后生成黄色产物,在仪器的第二通道波长440 nm有最大吸收,且保留时间不与其他氨基酸重迭,氨基酸自动分析仪法更加快速、准确、自动化程度和灵敏度高,本文利用日立835-50型氨基酸自动分析仪,对氨基酸直接进行分析,研究了各种样品中羟脯氨酸含量的测定分析,并对方法进行了验证,获得了满意的分析结果。1 实验部分 1.1 仪器与试剂 氨基酸自动分析仪:日立835-50型高效氨基酸自动分析仪,连有自动数据处理机和记录仪、自动进样装置、梯度洗脱系统等;电热恒温干燥箱 1 mg/ml 羟脯氨酸标准溶液;6 mol/L 盐酸;茚三酮显色剂:将 26.67 g 茚三酮溶于
7、 1000 mL 乙二醇甲醚中,加入 333.33 mL 醋酸缓冲液,再加入 2.3 mL三氯化钛,低温保存。1.2 色谱条件 分离柱:26 mm i.d.150 mm 不锈钢柱;交换树脂现代食品科技 Modern Food Science and Technology 2008,Vol.24,No.7 720 型号:No.2619(日本公司生产的氨基酸分析专用树脂);柱温:53;泵流速:0.225 mL/min;泵压力:8.8 MPa;进样体积:50 L。1.3 样品的处理 取含蛋白20 mg的各种样品于水解管中,加12 mL的6 mol/L盐酸,滴入几滴苯酚,充氮后封管,置于110烘箱中保
8、持22 h,冷却后经滤纸过滤到50 mL容量瓶中,用超纯水反复冲洗水解管及滤纸,最后定容至刻度。取1 mL的样液于蒸发皿中在蒸气浴上蒸干,加超纯水重复三次,残留物用0.02mol/L HCl定容至10 ml,0.45 m 滤膜过滤,备用上机7。2 结果与讨论 2.1 标准曲线绘制 精确吸取羟脯氨酸标准溶液0 mL、0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL、2.5mL、3.0 mL分别加入到100 mL容量瓶中,用水稀释到刻度,进氨基酸分析仪分析,以峰面积和浓度绘制标准曲线如图1。由图1可知:线性回归方程y=39583x+61633;相关系数:R20.9993。在羟脯氨酸质量浓度为
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