微生物限度检验培养基质量控制讲稿.ppt
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1、微生物限度检验培养基质量控制第一页,讲稿共五十九页哦概念n细菌的生长繁殖需要一定的营养条件,为获细菌的生长繁殖需要一定的营养条件,为获取能力并维持其生长繁殖,细菌必须从外界取能力并维持其生长繁殖,细菌必须从外界吸取某些物质,包括水分、碳源、氮源、无吸取某些物质,包括水分、碳源、氮源、无机盐和生长因子。不同种类的细菌对营养的机盐和生长因子。不同种类的细菌对营养的要求也不同。要求也不同。第二页,讲稿共五十九页哦概念n培养基具有适合细菌生长需要的各种营养物培养基具有适合细菌生长需要的各种营养物质,包括微生物生长所需要的水分、碳源、质,包括微生物生长所需要的水分、碳源、氮源、无机盐及某些生长因子(维生
2、素、辅氮源、无机盐及某些生长因子(维生素、辅酶)等。酶)等。n除此以外,还具备待培养菌适宜生长的酸碱除此以外,还具备待培养菌适宜生长的酸碱度。度。n培养基是人工配制的微生物生活环境培养基是人工配制的微生物生活环境第三页,讲稿共五十九页哦分类主要用于增菌用于检测动力及保存菌种用于分离鉴定细菌第四页,讲稿共五十九页哦分类双糖铁培养基SS培养基普通琼脂培养基血液琼脂培养基 庖肉培养基第五页,讲稿共五十九页哦概 念n由于不同批次的蛋白胨、浸膏(粉)、琼脂、由于不同批次的蛋白胨、浸膏(粉)、琼脂、胆盐等成分的质量及酸碱度不同等,影响了胆盐等成分的质量及酸碱度不同等,影响了培养基质量的稳定性培养基质量的稳
3、定性。n适宜的培养基制备方法、储存条件和质量控适宜的培养基制备方法、储存条件和质量控制是提高优质培养基的保证制是提高优质培养基的保证第六页,讲稿共五十九页哦主要内容n培养基购置、贮存、制备、使用注意事项n培养基质量控制n常用菌株保存方法第七页,讲稿共五十九页哦一、培养基购置、贮存、制备、使用注意事项第八页,讲稿共五十九页哦 购置 n依据依据ISO/IEC17025ISO/IEC17025检测和校准实验室能力的通用要求检测和校准实验室能力的通用要求,对培养基的供应企业进行评价后选择合格的供应商;对培养基的供应企业进行评价后选择合格的供应商;n应选择产品市场信誉度高、有质量保证能力和服务保证能力应
4、选择产品市场信誉度高、有质量保证能力和服务保证能力的企业;的企业;n要求生产企业提供:培养基成分名称及产品编号、批号、使要求生产企业提供:培养基成分名称及产品编号、批号、使用前的用前的pHpH、储藏信息和有效期、性能评价和所用测试菌株、储藏信息和有效期、性能评价和所用测试菌株、技术数据清单、质控证书以及必要的安全技术数据清单、质控证书以及必要的安全/危害数据等材料。危害数据等材料。第九页,讲稿共五十九页哦验收n购买的培养基到货后,应有专人做好接受和验收工作,购买的培养基到货后,应有专人做好接受和验收工作,应仔细核对生产企业提供的资料、培养基名称、规格数应仔细核对生产企业提供的资料、培养基名称、
5、规格数量、外观特征、批号、保质期是否符合要求。量、外观特征、批号、保质期是否符合要求。n每批培养基到货物后都应对培养基的质量进行检测,每批培养基到货物后都应对培养基的质量进行检测,满足检测方法规定的要求后方可投入使用。满足检测方法规定的要求后方可投入使用。第十页,讲稿共五十九页哦培养基的储存培养基的储存 n干粉培养基应保存在阴凉干燥处,要避免阳光直射;干粉培养基应保存在阴凉干燥处,要避免阳光直射;未开瓶的培养基在室温下的最长保存未开瓶的培养基在室温下的最长保存2年,开瓶后的年,开瓶后的干粉培养基易吸湿,应注意防潮并在干粉培养基易吸湿,应注意防潮并在6个月内用完。个月内用完。应定期对储存中的培养
6、基进行常规检查,如容器密应定期对储存中的培养基进行常规检查,如容器密闭性复查、首次开封日期、内容物的感官检查,如闭性复查、首次开封日期、内容物的感官检查,如果培养基发生结块、颜色异常和其他变质迹象就不果培养基发生结块、颜色异常和其他变质迹象就不能再使用。能再使用。第十一页,讲稿共五十九页哦培养基的制备培养基的制备 n制备培养基用容器不得为铜锅或铁锅,以防有离子混入制备培养基用容器不得为铜锅或铁锅,以防有离子混入培养基中,影响微生物的生长。培养基中,影响微生物的生长。n所有容器在使用前都要根据不同的情况,经过一定的处所有容器在使用前都要根据不同的情况,经过一定的处理,洗刷干净。有的还要进行包装,
7、经过灭菌等准备就理,洗刷干净。有的还要进行包装,经过灭菌等准备就绪后,才能使用。绪后,才能使用。n容器的大小需大于复水后培养基总体积的容器的大小需大于复水后培养基总体积的2倍以上,倍以上,避免在加热溶解过程中,培养基溢出。避免在加热溶解过程中,培养基溢出。第十二页,讲稿共五十九页哦培养基的制备培养基的制备 n培养基制备用水中不能含有任何抑制或影响培养基制备用水中不能含有任何抑制或影响微生物生长的物质。微生物生长的物质。n使用蒸馏水或与其同质的水。使用蒸馏水或与其同质的水。n最好不使用离子交换器生产的去离子水。最好不使用离子交换器生产的去离子水。第十三页,讲稿共五十九页哦培养基的制备培养基的制备
8、 n每次制备培养基均应有记录,包括培养基名每次制备培养基均应有记录,包括培养基名称,配方及其来源,和各种成份的牌号,最称,配方及其来源,和各种成份的牌号,最终终pH值、消毒的温度和时间制备的日期和值、消毒的温度和时间制备的日期和制备者等,记录复制复制一份,原记录保存制备者等,记录复制复制一份,原记录保存备查,复制记录随制好的培养基一同存放、备查,复制记录随制好的培养基一同存放、以防发生混乱。以防发生混乱。第十四页,讲稿共五十九页哦培养基的制备培养基的制备 n培养基的各种成分必须精确称取并要注意防止错乱,培养基的各种成分必须精确称取并要注意防止错乱,最好一次完成,不要中断。可将配方置于傍侧,每最
9、好一次完成,不要中断。可将配方置于傍侧,每称完一种成分即在配方面军做出记号,并将所需称称完一种成分即在配方面军做出记号,并将所需称取的药品一次取齐,置于左侧,每种称取完毕后,取的药品一次取齐,置于左侧,每种称取完毕后,即移放于右侧。完全称取完毕后,还应进行一次检即移放于右侧。完全称取完毕后,还应进行一次检查。查。n培养基所用化学药品均应是化学纯的培养基所用化学药品均应是化学纯的 第十五页,讲稿共五十九页哦培养基的制备培养基的制备 n在培养基分装灭菌前,各成分应溶解均匀。在培养基分装灭菌前,各成分应溶解均匀。n在锅中溶化时、可先用温水加热并随时扰动、以防焦化、如发现在锅中溶化时、可先用温水加热并
10、随时扰动、以防焦化、如发现有焦化现象、该培养基即不能使用,应重新制备。待大部分固体有焦化现象、该培养基即不能使用,应重新制备。待大部分固体成分溶化后,再用较小火力使所有成分完全溶化,迄至煮沸。如成分溶化后,再用较小火力使所有成分完全溶化,迄至煮沸。如为琼脂溶化,用另一部分水溶化其它成分,然后将两溶液充分混为琼脂溶化,用另一部分水溶化其它成分,然后将两溶液充分混合。在加热溶化过程中,因蒸发而丢失的水分,最后必须加以补合。在加热溶化过程中,因蒸发而丢失的水分,最后必须加以补足。足。第十六页,讲稿共五十九页哦培养基的制备培养基的制备n因培养基在加热消毒过程中、pH会有所变化,培养基各成分完全溶解后,
11、应进行PH的初步调正。例如,牛肉浸液约可降低pH0.2,而肠浸液pH却会有显著的升高。因此,对这个步骤,操作者应随时注意探索经验、以期能掌握培养基的最终PH,保证培养基的质量。n一般灭菌前比最终pH高0.2-0.3。n 用1mol/L Na0H或 lmol/LHCL调整。第十七页,讲稿共五十九页哦培养基的灭菌培养基的灭菌 n已配制好的培养基必须立即灭菌,避免微生物生长繁殖而消已配制好的培养基必须立即灭菌,避免微生物生长繁殖而消耗养分,改变培养基的酸碱度。耗养分,改变培养基的酸碱度。n高温可破坏培养基的营养成分,还会使琼脂的凝胶强度下降,因高温可破坏培养基的营养成分,还会使琼脂的凝胶强度下降,因
12、此必须严格控制灭菌温度和时间,并且不可重复灭菌。此必须严格控制灭菌温度和时间,并且不可重复灭菌。n高压蒸汽灭菌锅的压力表等要定期进行检定,并定期采用生物指示高压蒸汽灭菌锅的压力表等要定期进行检定,并定期采用生物指示菌法或化学变色纸片对灭菌效果进行验证。菌法或化学变色纸片对灭菌效果进行验证。第十八页,讲稿共五十九页哦培养基的灭菌培养基的灭菌 n灭菌以后培养基应该迅速冷却至所需温度,避免长时间灭菌以后培养基应该迅速冷却至所需温度,避免长时间保存在灭菌锅内,造成过度灭菌,影响培养基的营养成保存在灭菌锅内,造成过度灭菌,影响培养基的营养成分或选择性效果。分或选择性效果。n每批培养基制备好以后,应仔细检
13、查一遍,如发现每批培养基制备好以后,应仔细检查一遍,如发现破裂、水分浸入、色泽异常、棉塞被培养基沾染等、破裂、水分浸入、色泽异常、棉塞被培养基沾染等、均应挑出弃去。并测定其最终均应挑出弃去。并测定其最终pHpH。n将全部培养基放入将全部培养基放入361C361C恒温箱培养过夜,如发现恒温箱培养过夜,如发现有菌生长,即弃去。有菌生长,即弃去。第十九页,讲稿共五十九页哦培养基的储存培养基的储存n培养基应存放于冷暗处,最好能放于普通冰箱培养基应存放于冷暗处,最好能放于普通冰箱n放置时间一般不宜超过一周。放置时间一般不宜超过一周。n倾注的平板培养基不宜超过倾注的平板培养基不宜超过3 3天。如果保存时间
14、超过天。如果保存时间超过2 2天,应将其放入密封的塑料袋中保存。天,应将其放入密封的塑料袋中保存。n配好的肉汤类培养基如果保存时间超过配好的肉汤类培养基如果保存时间超过2 2周,应将其放周,应将其放在带有螺旋盖的试管或其它密闭的试管或容器中防止蒸在带有螺旋盖的试管或其它密闭的试管或容器中防止蒸发发第二十页,讲稿共五十九页哦培养基的使用培养基的使用n平板在接种使用时,表面必须无明显潮湿水珠。n对于冰箱保存的平板,应待温度回复至室温后再使用n用于沉降菌检测的所有平板必须经无菌试验后才可使用n固体培养基灭菌后再融化只允许一次。第二十一页,讲稿共五十九页哦培养基质量控制第二十二页,讲稿共五十九页哦n由
15、于不同批次的蛋白胨、浸膏(粉)、琼脂、由于不同批次的蛋白胨、浸膏(粉)、琼脂、胆盐等成分的质量及酸碱度不同等,影响了胆盐等成分的质量及酸碱度不同等,影响了培养基质量的稳定性培养基质量的稳定性。因此对购入的干培。因此对购入的干培养基开展质量检验验收是实验室室内质量控养基开展质量检验验收是实验室室内质量控制的重要内容之一制的重要内容之一。第二十三页,讲稿共五十九页哦现有培养基质控标准nWS/T 232 2003 商业性微生物培养基质量检定规程n卫生部卫监发(1993)7号文件 食品卫生微生物检验用干燥培养基生产质控和质量标准第二十四页,讲稿共五十九页哦质控参数n1.1.外外观:干粉色:干粉色泽、研
16、、研细度。度。2.2.溶解后培养溶解后培养基色基色泽、透明度、透明度、杂质、沉淀物、硬度(凝、沉淀物、硬度(凝胶胶强度);度);n3.3.灭菌后菌后pHpH值;n4.4.菌落形菌落形态、菌落大小(、菌落大小(直径直径););5.5.生生长率率第二十五页,讲稿共五十九页哦计数培养基判断结果计数培养基判断结果n干粉色泽均匀、研细度好,色泽符合要求干粉色泽均匀、研细度好,色泽符合要求n制备好的培养基有相应的颜色,一般的培养基应澄清、制备好的培养基有相应的颜色,一般的培养基应澄清、无浑浊、无沉淀。无浑浊、无沉淀。npHpH值符合、硬度适宜,划线不破、透明无沉淀物。值符合、硬度适宜,划线不破、透明无沉淀
17、物。菌落大小、形态与对照培养基一致。菌落大小、形态与对照培养基一致。第二十六页,讲稿共五十九页哦选择性培养基判断结果选择性培养基判断结果n检查项目:检查项目:n 促生长能力促生长能力n 抑制能力抑制能力n 指示能力指示能力第二十七页,讲稿共五十九页哦事例1n3批4号培养基质量控制第二十八页,讲稿共五十九页哦编编号号生生 产产 厂厂 家家批号批号1 市微生物培养基厂市微生物培养基厂0801242 试剂试剂有限公司有限公司0803153市疾病市疾病预预防控制中心防控制中心20070821生长率试验对照琼脂为:哥伦比亚琼脂,生长率试验对照琼脂为:哥伦比亚琼脂,由法国生物由法国生物-梅里埃公司提供,梅
18、里埃公司提供,梅里埃公司提供,梅里埃公司提供,有效期至有效期至有效期至有效期至20100404第二十九页,讲稿共五十九页哦质控采用菌株质控采用菌株生长率试验生长率试验生长率试验生长率试验:O1O1群霍乱弧菌小川型、群霍乱弧菌小川型、群霍乱弧菌小川型、群霍乱弧菌小川型、O1O1O1O1群霍乱弧菌稻叶群霍乱弧菌稻叶型、型、O139O139O139O139群霍乱弧菌群霍乱弧菌群霍乱弧菌群霍乱弧菌杂菌抑制试验:杂菌抑制试验:杂菌抑制试验:杂菌抑制试验:大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、变形杆菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、变形杆菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、变形杆菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、变形杆菌、金黄色葡
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