AgilentHPLC1100工作站高级操作培训.ppt
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1、HPLC 1100 ChemStation高级操作高级操作培训培训授课教师授课教师 纪学海纪学海Saturday,October 22,20222021/9/269/26/20211HPLC 1100 Advance操作培训日程安排操作培训日程安排第一天第一天 上午:上午:1 课程简介及相互介绍课程简介及相互介绍 2 化学工作站各个工作界面介绍化学工作站各个工作界面介绍 3 完整方法的编辑、修改、存储及运行完整方法的编辑、修改、存储及运行 4 HPLC 1100 仪器配置及参数设置仪器配置及参数设置下午:下午:1 数据分析参数设置数据分析参数设置 2 色谱图的优化处理色谱图的优化处理 3 积分
2、事件及手动积分的选择和应用积分事件及手动积分的选择和应用 4 高级校正表的编辑和设置高级校正表的编辑和设置第二天第二天 上午:上午:1 报告格式的选择及设定报告格式的选择及设定 2 光谱的提取、光谱库的建立及检索光谱的提取、光谱库的建立及检索 3 色谱峰纯度检测色谱峰纯度检测 4 色谱条件的优化及色谱图的提取色谱条件的优化及色谱图的提取下午:下午:1 序列参数的设置以及统计功能的使用序列参数的设置以及统计功能的使用 2 批处理功能的设置及应用批处理功能的设置及应用2021/9/269/26/20212第三天第三天 上午:上午:1 个性化报告的设定与编辑个性化报告的设定与编辑 2 工作站故障诊断
3、功能的应用工作站故障诊断功能的应用 3 结业考试结业考试 结业午餐结业午餐 下午:下午:1 化学工作站的重新安装、配置及启动化学工作站的重新安装、配置及启动(选修选修)2 发结业证发结业证 3 自由练习、讨论自由练习、讨论2021/9/269/26/20213第一章第一章 化学工作站各个工作界面介绍化学工作站各个工作界面介绍2021/9/269/26/20214化学工作站各个工作界面的切换化学工作站各个工作界面的切换切换工作界面2021/9/269/26/20215化学工作站化学工作站Views菜单菜单Full menu/short menu切换切换显示当前日记本,察显示当前日记本,察看错误信
4、息等内容看错误信息等内容2021/9/269/26/20216化学工作站的化学工作站的Change Access Level功能功能如果要使用密码保护化学工作如果要使用密码保护化学工作站,请选中此选项。站,请选中此选项。2021/9/269/26/20217化学工作站化学工作站Scheduler的使用的使用使用时要注意保存,否则工作使用时要注意保存,否则工作站不予以执行。站不予以执行。2021/9/269/26/20218化学工作站化学工作站Scheduler的使用的使用Result栏中可以显示化学工作站执行栏中可以显示化学工作站执行Command的结果的结果2021/9/269/26/202
5、19选择在线信号选择在线信号从 View菜单,选择 Online Signals,单击 Change,在Edit Signal Plot窗口中选择要监控的信号。2021/9/269/26/202110在线信号显示在线信号显示2021/9/269/26/202111查看查看Logbook从View菜单选择Logbook,单击Current Logbook显示当前Logbook内容。2021/9/269/26/202112方法的概念方法的概念:方法是一个参数集,它包括分析一个样品所需要 的所有参数。方法文件名方法文件名:xxx.m。方法的组成方法的组成:l方法信息(Method informati
6、on)l仪器参数及采集参数(Instrument/Acquisition)l数据分析参数(Data Analysis)l运行时间表(Run Time Checklist)第二章第二章 方法编辑、保存方法编辑、保存2021/9/269/26/202113使用 Edit Entire Method 编辑一个完整的方法编辑一个完整的方法编辑一个完整的方法单击图标,也可以开始编辑一个完整的方法。2021/9/269/26/202114选择所要编辑的内容选择所要编辑的内容2021/9/269/26/202115方法信息方法信息(Method Information)2021/9/269/26/20211
7、6包括:流量(Flow),流动相组成(Solvents),停止采集时间(Stop Time),后运行时间(Post Time),梯度编程(Timetable),压力限制设定(Pressure Limits)等泵的操作参数泵的操作参数2021/9/269/26/202117标准自动进样器参数标准自动进样器参数2021/9/269/26/202118标准进样过程原理示意图标准进样过程原理示意图Metering device6-port valveSampling unitFrom pumpTo columnTo waste准备位置准备位置抓取样品瓶抓取样品瓶吸取样品吸取样品进样和运行位置进样和运行
8、位置2021/9/269/26/202119标准自动进样器的程序进样标准自动进样器的程序进样2021/9/269/26/202120Wellplate自动进样器参数自动进样器参数2021/9/269/26/202121l控温范围:低于室温1080l两个单独的加热区 l安装切换阀可以进行柱切换l可以容纳30 cm长色谱柱l安装柱识别可以自动记录进样次数柱温箱参数设置柱温箱参数设置2021/9/269/26/202122l可以选择存储 5 个信号l信号波长范围 191-949 nml可变狭缝:1,2,4,8,16 nml可以时间编程l可以保存数张或所有光谱DAD检测器检测器参数设置参数设置2021
9、/9/269/26/202123DAD参数优化参数优化Step and Slit:Agilent 1100 DAD 狭缝宽度可以程序变化,变化步径1,2,4,8,16nm。如果样品浓度较高,而需要精细的光谱结构,建议使用1或2nm的狭缝宽度。如果样品浓度较稀,建议使用8或16nm宽度狭缝。采集样品的谱带宽度至少要与狭缝宽度一采集样品的谱带宽度至少要与狭缝宽度一样样。Peak Width:增加响应时间(峰宽)可以增加组成色谱信号中每个数据点的采集次数。因为检测器的噪音与采集次数平方根成反比,所以增加响应时间可以降低噪音。但增加响应时间(峰宽)会降低定量分析的重复性。一般对于精确的定量分析,一个色
10、谱峰要求采集20个数据点。设置峰宽的经验:设置峰宽等于实际色谱峰的最窄峰宽。2021/9/269/26/202124Sample Signal and Reference Signal:设置样品吸收波长与参比波长遵从下列规则:设置样品吸收波长与参比波长遵从下列规则:样品吸收波长选择在样品的最大吸收波长,而且在此吸收波长下没有流动相吸收的干扰。选择样品信号的谱带宽度应覆盖样品吸收谱带的半峰宽(假设样品吸收谱带为高斯峰)。参比吸收谱带应选择在尽量靠近样品吸收谱带,而且在此区域没有或尽量低的吸收强度。参比峰谱带宽度要大于或等于样品谱带宽度。注意:增加样品谱带宽度,会降低样品的吸收强度,但会降低噪音。
11、选择合适的参比吸收波长可以减小梯度洗脱过程中的基线漂移。Peak Supression(峰抑制)峰抑制):DAD检测器一个非常有趣的功能是进行峰抑制。例如有两个样品没有分开,共同洗检测器一个非常有趣的功能是进行峰抑制。例如有两个样品没有分开,共同洗脱出来,可以设置某一个样品的等吸收波长为参比波长,则被设为参比峰的样品被脱出来,可以设置某一个样品的等吸收波长为参比波长,则被设为参比峰的样品被抑制,而另一个样品峰被分离。不过,此样品峰的吸收强度要损失抑制,而另一个样品峰被分离。不过,此样品峰的吸收强度要损失1030。2021/9/269/26/202125VWD检测器参数设置检测器参数设置2021
12、/9/269/26/202126选择在方法中要执行的项目可以选择保存GLP数据可以将方法和数据保存在一起运行时间表运行时间表(Run Time Checklist)2021/9/269/26/202127从Method菜单选择Save Method/Save Method as或从存贮方法工具图标存贮方法。存储方法存储方法单击本图标可以保存方法,务必注意不要发生方法覆盖、丢失2021/9/269/26/202128要分析单个样品,先从RunControl菜单选择 Sample Info.,输入样品信息输入样品信息。样品信息包括:操作者姓名(Operator Name),存盘数据文件(Data
13、File),样品参数(Sample Parameters)样品评述(comment)。然后运行方法然后运行方法(Run Method)。运行方法运行方法2021/9/269/26/202129用户图形友好界面用户图形友好界面(GUI)鼠标左键单击任一模块图标均可弹出快捷菜单鼠标左键单击任一模块图标均可弹出快捷菜单使用鼠标左键单击各个模块右下角图标均可对该模使用鼠标左键单击各个模块右下角图标均可对该模块进行控制:开、关或实现基线调零等功能。块进行控制:开、关或实现基线调零等功能。所有模块同时所有模块同时开、关控制开、关控制2021/9/269/26/202130用户图形友好界面用户图形友好界面各
14、个模块的控制各个模块的控制2021/9/269/26/202131用户图形界面用户图形界面溶剂瓶的填充量溶剂瓶的填充量2021/9/269/26/202132用户图形友好界面用户图形友好界面各种参数的显示各种参数的显示点击下拉菜单,可以分别显示各种所需的参数:点击下拉菜单,可以分别显示各种所需的参数:LC采集参数、数据分析参数等,且便于用户改动。采集参数、数据分析参数等,且便于用户改动。2021/9/269/26/202133Instrument菜单简介菜单简介设置各个模块的参数设置各个模块的参数开启、关闭整个系统开启、关闭整个系统查看仪器查看仪器Firmware及序列号及序列号查看、输入色谱
15、柱信息查看、输入色谱柱信息使用了使用了Wellplate自动进样器才自动进样器才出现该菜单出现该菜单对化学工作站进行仪器配置对化学工作站进行仪器配置2021/9/269/26/202134选择选择Instrument More Pump Auxiliary菜单,即菜单,即可弹出下图窗口。可弹出下图窗口。泵的辅助功能泵的辅助功能在该窗口可以设置泵在该窗口可以设置泵的最大升流速率、泵的最大升流速率、泵冲程大小以及设置溶冲程大小以及设置溶剂的压缩补偿因子。剂的压缩补偿因子。2021/9/269/26/202135自动进样器的扩展功能自动进样器的扩展功能2021/9/269/26/202136色谱柱信
16、息的输入色谱柱信息的输入2021/9/269/26/202137VWD停泵扫描采集光谱停泵扫描采集光谱使用VWD停泵扫描的功能,可以采集样品的吸收光谱,主要操作步骤如下:1.在Online工作站界面的View菜单下打开VWD Scans窗口;2.按照正常的进样方式采集样品色谱数据,并保证能够在 Online Signal窗口中观测到色谱信号;3.进样后,色谱图上出现基线时,扫描空白吸收光谱 在Instrument菜单下,选择More VWD中的Blank Scan4.色谱图上出现色谱峰时,扫描样品吸收光谱 在Instrument菜单下,选择More VWD中的Sample Scan 此时得到的
17、是自动扣除空白吸收后的样品吸收光谱。2021/9/269/26/202138可变波长检测器可变波长检测器VWD的停泵扫描功能的停泵扫描功能进进样样之之前前选选择择VWD Scans菜菜 单单,打打 开开VWD光谱扫描窗口光谱扫描窗口2021/9/269/26/202139可变波长检测器可变波长检测器VWD的停泵扫描功能的停泵扫描功能进进样样后后,流流动动相相流流经经流流通通池池,给给出出色色谱谱基基线线信信号号时时,点点击击More VWD菜菜单单中中的的Blank Scan,扫扫描描空空白白流流动动相的吸收光谱,如下图所示。相的吸收光谱,如下图所示。2021/9/269/26/202140可
18、变波长检测器可变波长检测器VWD的停泵扫描功能的停泵扫描功能扫描所得的流动相吸收光谱扫描所得的流动相吸收光谱2021/9/269/26/202141可变波长检测器可变波长检测器VWD的停泵扫描功能的停泵扫描功能出出现现色色谱谱峰峰时时,点点击击Sample Scan,扫扫描描样品峰的吸收光谱样品峰的吸收光谱2021/9/269/26/202142可变波长检测器可变波长检测器VWD的停泵扫描功能的停泵扫描功能光谱窗口中给出扣除流动相吸光谱窗口中给出扣除流动相吸收光谱后的样品峰吸收光谱收光谱后的样品峰吸收光谱2021/9/269/26/202143第三章第三章 谱图优化谱图优化本章内容:本章内容:
19、谱图调用空白谱图的扣除谱图优化谱图加标注谱图比较、处理2021/9/269/26/202144调用数据文件调用数据文件在Data Analysis界面,File菜单下选择Load Signal。扣除空白谱图2021/9/269/26/202145扣除空白谱图扣除空白谱图选择需要扣除的空白运行色谱文件2021/9/269/26/202146选择、规定一个方法中要进行调用、处理的信号Signal Details2021/9/269/26/202147使用 Signal Options.功能来优化色谱图的显示谱图优化谱图优化在Data Analysis界面下,Graphics菜单下选择Signal
20、Options.2021/9/269/26/202148谱图优化工具谱图优化工具谱图优化图标谱图显示方式化合物名称 保留时间显示标题显示轴单独/重叠显示基线打印窗口色谱图控制图标移动标注文字标注设置标注格式线形标注删除标注WMF图标注拷贝2021/9/269/26/202149选择:l字体和字型l字体大小l字体颜色、旋转角度等在色谱图上加标注在色谱图上加标注2021/9/269/26/202150lAdd AnnotationlDraw Line in WindowlMove AnnotationlDelete Annotation谱图处理工具谱图处理工具谱图处理工具谱图处理工具2021/9/
21、269/26/202151如何执行积分自动积分如何建立积分事件表如何使用积分事件表手动积分本章内容:本章内容:第四章第四章 积分优化积分优化2021/9/269/26/202152 增强积分方式可以提供增强积分方式可以提供:当基线波动时,基线的定位。使用初始峰高参数去除噪音峰。控制积分开始和结束的标识。在噪音中定位信号峰。使用二阶导数确定肩峰。增强积分方式增强积分方式2021/9/269/26/202153当调用信号时,可以通过Integrate after load选项自动积分。您也可以通过以下方式进行积分您也可以通过以下方式进行积分:从 Integration 菜单选择积分或自动积分选择积
22、分工具。运行一个包括数据分析的完整方法。如何执行积分如何执行积分2021/9/269/26/202154自动积分自动积分检查开始和结束区域,确定噪音。赋予初始Slope Sensitivity和Height Reject值.对第一次积分赋予一个临时峰宽值。设置Area Reject为0。执行测试性积分,有可能重复几次。基于较早洗脱出的色谱峰宽计算峰宽值。优化Slope Sensitivity和Height Reject。从初始的峰宽和噪音水平计算Area Reject。2021/9/269/26/202155积分事件积分事件初始值信号选项框高级基线选择2021/9/269/26/202156高
23、级基线高级基线2021/9/269/26/202157添加积分事件功能删除积分事件功能积分事件表积分事件表2021/9/269/26/202158积分任务对当前色谱图积分自动积分积分事件设置Baseline Now设置Baseline Hold设置拖尾切线撇去积分器开关设置斜率设置最小峰面积设置固定峰宽设置肩峰检测积分工具栏积分工具栏2021/9/269/26/202159Peak width:(半峰宽半峰宽)如果没有设置半峰宽的时间积分表,半峰宽在整个积分过程中自动变化,变化遵从0.75exiting peak+0.25current peak。Timed Events:(时间性积分事件时间
24、性积分事件)Area Sum ON or OFF:设定某一时间段内进行峰面积加和,加和后保 留时间被分配到第一个峰的保留时间上。Baseline All Valleys On or OFF:设定是否进行峰谷积分。2021/9/269/26/202160Baseline Hold ON or OFF:在Baseline Hold ON与Baseline Hold OFF两点间做水平基线。Baseline Now:在某一时刻点重新设置基线。Baseline Back:设置某一时刻点,从检测到的基线向此点做水平基线。2021/9/269/26/202161存贮积分事件到方法作为方法的一部分存贮积分参
25、数作为方法的一部分存贮积分参数保存方法2021/9/269/26/202162选择积分工具对目前色谱图进行积分自动积分积分事件手动积分画基线手动积分负峰手动积分切线撇去手动积分裂分峰手动积分去除峰手动积分工具手动积分工具2021/9/269/26/202163Draw BaselineNegative Peak(s)Tangent SkimSplit peaksDelete Peak(s)All Valleys手动积分手动积分2021/9/269/26/202164峰类型符号峰类型符号峰起止点符号 B 基线P 基线渗透 V 峰谷点H 水平基线 M 手动积分T 切线撇去其它符号 +参考峰I 内标
- 配套讲稿:
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