体内药物与毒物分析 (17).pdf
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1、免疫分析法(二)免疫分析法(二)酶免疫分析(EIA)酶免疫分析(EIA)是以酶作为标记物的免疫测定方法。该法与RIA的不同之处是用具有高效专一催化特性的标记酶代替了放射性同位素标记物。酶免疫分析将抗原抗体特异反应和酶的高效催化作用有机结合,具有灵敏度高、特异性强、无放射性污染、操作简单、快速、易于掌握和易推广普及。目前已广泛被用来测定体液中的药物和激素。在酶免疫分析法中,标记酶的选择非常重要,最常用的标记酶有:1、辣根过氧化物酶,约有50的EIA使用此酶 2、碱性磷酸酯酶3、6-磷酸葡萄糖脱氢酶4、-半乳糖苷酶5、苹果酸脱氢酶 酶免疫分析的测定最后都是通过酶与底物反应所产生的颜色深浅来进行定量
2、分析的,所以对应酶的底物选择也很重要。合适的底物应具备以下条件:无色、无毒能溶于水;化学性质稳定、不受光照的影响;转化率高,在酶催化下可产生大量的有色物质;显色产物的量在一定范围内与酶的浓度或活性成正比;应有终止酶反应的试剂。辣根过氧化物酶常用的底物有:邻苯二胺;5-氨基水杨酸;四甲基联苯胺及其硫酸盐。碱性磷酸酶常用的底物有:对硝基酚磷酸盐溶液;4-甲基伞酮基-磷酸盐。酶免疫测定法的灵敏度主要取决于酶标药物的酶活性和免疫活性,因此,酶标药物的制备成为酶免疫分析的1关键。酶标药物的制备可利用药物分子上的羟基、羧基、氨基、酚羟基等与标记酶分子上的氨基、羧基及其它基团相连接。酶免疫分析法按照是否需要
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