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1、精选优质文档-倾情为你奉上1. Fluo-3 AM (钙离子荧光探针)原理 Fluo-3 AM是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。Fluo-3 AM的荧光非常弱,进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成Fluo-3,从而被滞留在细胞内,和细胞内游离的钙离子结合,结合钙离子后可以产生较强的荧光。生理意义 细胞内钙离子增多是细胞损伤的结果,因此此探针能表征细胞损伤程度激发波长506nm 发射波长 526nm (绿色)备注 推荐使用2. Mag-fura-2 AM(钙离子荧光探针)原理Fura-2 AM是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。Fura-2?AM进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成Fura-2,从而被
2、滞留在细胞内。Fura-2可以和钙离子结合,结合钙离子后在330-350nm激发光下可以产生较强的荧光,而在380nm激发光下则会导致荧光减弱。这样就可以使用340nm和380nm这两个荧光的比值来检测细胞内的钙离子浓度,可以消除不同细胞样品间荧光探针装载效率的差异,荧光探针的渗漏,细胞厚度差异等一些误差因素。生理意义 细胞内钙离子增多是细胞损伤的结果,因此此探针能表征细胞损伤程度激发波长为340nm和380nm 发射波长 510nm (蓝色)备注 仪器滤光片不适用 3 Fluo-4-AM (钙离子荧光探针)原理Fluo 4 是一种将Fluo 3结构中的Cl替换成F的钙荧光探针。由于将Cl替换
3、成了电子吸引力更强的F,它的最大激发波长会向短波长处偏离10 nm左右。所以用氩激光器激发时,Fluo 4的荧光强度比Fluo 3强1倍。由于Fluo 4与钙离子的亲和力和Fluo 3近似,所以使用上和Fluo 3也基本相同生理意义 细胞内钙离子增多是细胞损伤的结果,因此此探针能表征细胞损伤程度激发波长494nm 发射波长516nm (绿色)备注 用激光器激发时荧光强度强,因此不推荐4. DCFH-DA (活性氧荧光探针)原理DCFH-DA本身没有荧光,可以自由穿过细胞膜,进入细胞内后,被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜,从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以
4、氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。生理意义 检测细胞内活性氧表征细胞损伤程度激发波长485nm 发射波长 520nm (绿色)备注 推荐使用5. DHR 123 (活性氧荧光探针) 原理 本身无荧光, 在超氧化酶存在时可被过氧化氢 (H2O2)氧化, 转变成发射绿色荧光的罗丹明123 (Rhodamine 123), 因此广泛应用于检测细胞内活性氧(ROS), 如过氧化物, 次氯酸和过氧亚硝基阴离子等。生理意义 检测细胞内活性氧表征细胞损伤程度激发波长507nm 发射波长 529nm (绿色)备注 氧化后成罗丹明123,荧光强度可能受到线粒体膜电位的影响6. RhodamineI23 (
5、线粒体膜电位荧光探针)原理 细胞膜通透的阴离子绿色荧光染料, 能够迅速被活线粒体摄取, 而无细胞毒性。 生理意义 标记线粒体膜电位激发波长488nm 发射波长515 575nm (绿色)生理意义 检测线粒体膜电位备注 正在使用7. Hoechst 33342 (DNA荧光探针)原理 Hoechst 33342是一种可对DNA 染色的细胞核染色试剂,常用于细胞凋亡检测。Hoechst染料可透过细胞膜在聚AT序列的富集区域的小沟处与DNA结合并对DNA染色而发出强烈的蓝色荧光。生理意义 标记双链DNA激发波长355nm 发射波长465nm (蓝色)备注 正在使用8. FDA 原理 FDA可透过细胞
6、膜并作为荧光素积蓄在活细胞内。生理意义 反映细胞膜完整性和细胞活力激发波长495nm 发射波长520nm (绿色)备注 正在使用9. PI (DNA荧光探针)原理 它不能透过完整的细胞膜,但能透过凋亡中晚期的细胞和死细胞的膜而将细胞核染红,与细胞核中的DNA结合的PI发出的荧光,与未结合的PI相比,强度会增强20-30倍。生理意义 检测死细胞及凋亡晚期细胞激发波长530nm 发射波长615nm (红色)备注 尝试过,但效果不好10. EB (核酸荧光探针)原理 EB,不能透过细胞完整的细胞膜。溴化乙锭含有一个可以嵌入DNA堆积碱基之间的一个三环平面基团。它与DNA的结合几乎没有碱基序列特异性。
7、在高离子强度的饱和溶液中,大约每2.5个碱基插入一个溴化乙锭分子。当染料分子插入后,其平面基团与螺旋的轴线垂直并通过范德华力与上下碱基相互作用。这个基团的固定位置及其与碱基的密切接近,导致与DNA结合的染料呈现荧光,其荧光产率比游离溶液中染料有所增加。生理意义 检测死细胞激发波长545nm 发射波长605nm (红色)备注 有强致癌性,不推荐11. DAPI (DNA荧光探针)原理 DAPI可以穿透细胞膜与细胞核中的双链DNA结合而发挥标记的作用,产生比自身强20多倍的荧光,且对活细胞无毒副作用。和EB相比,对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下
8、的双链DNA染色。生理意义 标记凋亡和死细胞的DNA激发波长364nm 发射波长454nm (蓝色)备注 与Hoechst功能相近,可以尝试12. Calcein AM 原理 Calcein-AM由于在Calcein(钙黄绿素)的基础上加强了疏水性,因此能够轻易穿透活细胞膜。当其进入到细胞质后,酯酶会将其水解为Calcein(钙黄绿素)留在细胞内,发出强绿色荧光,且细胞毒性很低,适合用于活细胞染色。生理意义 检测细胞膜完整性激发波长494nm 发射波长517nm (绿色)备注 跟FDA功能类似,细胞毒性很低,可以长时间标记细胞,但价格比较贵13. BCECF-AM (pH荧光探针)原理 BCE
9、CF-AM是一种可以穿透细胞膜的荧光染料,BCECF-AM没有荧光,进入细胞后被细胞内的酯酶水解成BCECF,从而被滞留在细胞内。BCECF在适当的pH值情况下可以被激发形成绿色荧光。生理意义 检测细胞内pH激发波长490nm 发射波长526nm (绿色)备注 感觉意义不大14. Tubulin-Tracker Red (微管红色荧光探针)原理Tubulin-Tracker?Red探针为荧光染料Alexa Fluor 555标记的抗-Tubulin小鼠单克隆抗体(克隆号为DM1A),可以识别-Tubulin的425-450aa。可以用于人、小鼠、大鼠、牛、猪、豚鼠和禽类(avian)样品-Tu
10、bulin的检测。生理意义 标记细胞内微管激发波长555nm 发射波长565nm (红色)备注 红色荧光比较难拍,且价格较贵,作为筛选用可行性不大,可做机制研究用15. Lyso-Tracker Red (溶酶体红色荧光探针)原理 Lyso-Tracker Red为采用Molecular Probes公司的DND 99进行了荧光标记的带有弱碱性的荧光探针,可以选择性地滞留在偏酸性的溶酶体中,从而实现对于溶酶体的特异性荧光标记。中性红(Neutral?Red)和吖啶橙(Acridine Orange)也都可以对溶酶体进行荧光染色,但中性红和吖啶橙的染色缺乏特异性。生理意义 标记细胞溶酶体激发波长
11、577nm 发射波长590nm (红色)备注 红色荧光比较难拍,且价格较贵,作为筛选用可行性不大,可做机制研究用16. Golgi-Tracker Red (高尔基体红色荧光探针)原理? Golgi-Tracker?Red为采用Molecular?Probes公司的BODIPY?TR进行了荧光标记的C5-ceramide。Ceramide或其类似物可以选择性地和高尔基体结合,因此荧光标记的ceramide可以用作高尔基体特异性的荧光探针。生理意义 标记细胞高尔基体激发波长589nm 发射波长617nm (红色)备注 红色荧光比较难拍,且价格较贵,作为筛选用可行性不大,可做机制研究用17. ER
12、-Tracker Red (内质网红色荧光探针)原理 ER-Tracker Red为采用Molecular Probes公司的BODIPY TR进行了荧光标记的glibenclamide。Glibenclamide即glyburide,中文名为格列苯脲,是一种2型糖尿病治疗药物,可以结合主要定位在内质网上的sulphonylurea受体。因此荧光标记的glibenclamide就可以用作内质网特异性的荧光探针。ER-Tracker Red对于细胞的毒性极低。生理意义 标记细胞内质网激发波长587nm 发射波长615nm备注 红色荧光比较难拍,且价格较贵,作为筛选用可行性不大,可做机制研究用18
13、. Mito-Tracker Green (线粒体绿色荧光探针) (绿色)原理 Mito-Tracker?Green为采用Molecular?Probes公司的carbocyanine进行了荧光标记的一种Mito-Tracker,可以用作线粒体特异性的荧光探针。和rhodamine?123或JC-1相比,Mito-Tracker Green对于线粒体的染色不依赖于线粒体膜电位。生理意义 标记细胞线粒体激发波长490nm 发射波长516nm备注 与罗丹明123不完全相同,可以考虑一试19. DiI (细胞膜红色荧光探针)原理 最常用的细胞膜荧光探针之一,呈现橙红色荧光。DiI是一种亲脂性膜染料,进入细胞膜后可以侧向扩散逐渐使整个细胞的细胞膜被染色。DiI在进入细胞膜之前荧光非常弱,仅当进入到细胞膜后才可以被激发出很强的荧光。生理意义 标记细胞膜激发波长549nm 发射波长565nm (红色)备注 红色荧光比较难拍,且价格较贵,作为筛选用可行性不大,可做机制研究用专心-专注-专业
限制150内