invitrogen trizolrna抽提说明书.doc
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1、RNA抽提全过程(TRIZOL)一, 准备工作1, 实验器具与材料:(1) 移液枪:1ml、200ul、10ul(2) 吸头:1ml、200ul、20ul(3) 吸头台:放置1ml吸头的一个,放置200ul和20ul的吸头一个(4) EP管1.5ml、100ul(5) 玻璃研磨器(6) 容量瓶:1000ml(7) 盐水瓶:100ml(8) 15ml塑料管一个(配75乙醇用)2, 实验器具的处理与准备(1) 塑料制品:(包括吸头、EP管等)将塑料制品逐个浸泡于1DEPC水中(必要时小枪头需要用吸管打入DEPC水)37过夜,然后送至高压3次,后在80烘烤箱中烘干(或置于37中8小时左右烘干),试验
2、前将枪头放入吸头台。或直接购买经DEPC处理的枪头和EP管,每盒大约30元,基本上试剂公司都可以购买。(2) 玻璃制品:(主要是玻璃研磨器)先泡酸过夜,冲洗干净后,在1DEPC水中泡8小时左右,37烘干,用蒙锡纸包裹送至干烤3次(或180度干烤)。(3) 金属制品:(镊子等)先洗干净,再送干烤3次。(不需要泡DEPC水)3, 试剂配制和准备:(1) DEPC水:泡实验器具的DEPC水的配制:1000ml双蒸水中加1mlDEPC,放在1000ml容量瓶中静置4小时后备用。配75乙醇的DEPC水的配制:100ml盐水瓶内装40ml双蒸水,加40ulDEPC,37过夜,送至高压。(2) 75乙醇(要
3、在抽提时现配):用无水乙醇和DEPC水配制(DEPC水:无水乙醇1:3),然后放于-20备用。(3) 异丙醇:放入棕色瓶(4) 氯仿:放入棕色瓶(5) Trizol:100ml/瓶 存放于4二, 抽提时注意事项:全程佩戴一次性手套和口罩,手套要勤换,避免戴上的一次性的手套接触可疑污染物。三, 抽提步骤1 匀浆化作用取约100mg鼠脑组织放于玻璃研磨器内,先加0.2ml的Trizol溶液,研磨组织后,倒入1.5mlEP管中,再在研磨器内加入0.8ml的Trizol溶液洗,后全部再倒入EP管中。颠倒混匀10下,室温静置5分钟。2 分离阶段每1mlTrizol中加0.2ml氯仿。盖紧样品管盖,用手用
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