临床科研选题与科研设计.ppt
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1、临床科研选题与科研设计临床科研选题与科研设计(做科研型医生)做科研型医生)中国医学科学院基础医学研究所中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础医学院北京协和医学院基础医学院以几个案例作例子来阐述以几个案例作例子来阐述 Idea(新鲜)(创新点)(新鲜)(创新点)Design 如何如何(从哪几方面从哪几方面)来验证,它来验证,它们的逻辑关系们的逻辑关系 Methods(逻辑,内在联系)(逻辑,内在联系)新发新发SLE患者(创新点)患者(创新点)调节性调节性 T T细胞的细胞的研究研究(表面标志表面标志CD25与转录因子与转录因子Foxp3 的的表表达、细胞的抑制作用、其临床意义)达、细胞的
2、抑制作用、其临床意义)国外的国外的SLESLE患者绝大多数有激素或细胞毒患者绝大多数有激素或细胞毒药物治疗的经历药物治疗的经历案例一案例一 自身免疫应答靶抗原的的自身免疫应答靶抗原的的“暴露暴露”或形成(隐蔽抗原)或形成(隐蔽抗原)微生物感染激活自身反应性微生物感染激活自身反应性淋巴细胞(分子模拟)淋巴细胞(分子模拟)协同刺激分子的异位表达协同刺激分子的异位表达 多克隆淋巴细胞的非特异性多克隆淋巴细胞的非特异性活化(超抗原)活化(超抗原)免疫调节紊乱(包括免疫调节紊乱(包括调节性调节性T T细胞细胞数量减少或功能减弱)数量减少或功能减弱)其它其它自身免疫病发病的免疫学因素自身免疫病发病的免疫学
3、因素CD4+CD25+调节性调节性T细细胞(其抑制功能需胞(其抑制功能需Foxp3转录因子表达)转录因子表达)调节性调节性T细胞细胞案例一涉及的案例一涉及的3项研究项研究研究研究新发新发SLE患者周围血中患者周围血中CD4+T细胞的细胞的CD25与与FoxP3表达,及表达,及Glucocorticosteroid/cyclophosphamide治疗对治疗对CD25与与FoxP3 在在CD4+T细胞细胞表达表达的影响。的影响。研究对象为研究对象为24例新发活动期例新发活动期SLE患者患者、20例新发非活动期例新发非活动期SLE患者患者、21例例年龄性别相合的正常志愿者。分离周围血的单个核细胞,
4、用流式细胞仪检年龄性别相合的正常志愿者。分离周围血的单个核细胞,用流式细胞仪检测测CD4 T细胞细胞CD25与与FoxP3的表达。的表达。发现发现FoxP3在在新发新发SLE患者患者CD4+CD25+T 细胞的表达下降,在细胞的表达下降,在CD4+CD25-T 细胞细胞 的的表达增强。还检测了表达增强。还检测了Glucocorticosteroid与与cyclophosphamide治疗治疗对对FoxP3在在CD4+CD25+和和CD4+CD25-T 细胞表达细胞表达的影响的影响第第1项研究:项研究:Reduction of Foxp3 levels in CD4+CD25high T cel
5、ls in patients with new-onset systemic lupus erythematosus.Clin Exp Immunol.2008;153(2):182-7.研究研究新发新发SLE患者患者周围血周围血CD4+CD25-Foxp3+T细胞的临床意义细胞的临床意义检测检测1010例活动期、例活动期、1111例非活动期新发例非活动期新发 SLE患者、及患者、及1111例健康志愿者。例健康志愿者。用流式细胞仪分析用流式细胞仪分析Foxp3与与CD25在在CD4 T细胞的表达。分离细胞的表达。分离CD4+CD25+与与CD4+CD25-T细胞,检测它们对细胞,检测它们对T
6、T细胞增殖的影响。细胞增殖的影响。G检测检测CD4+CD25-T细胞与其他临床指标(如抗细胞与其他临床指标(如抗dsDNA、尿蛋白、血、尿蛋白、血清清C3水平、水平、SLEDAI)的相关性)的相关性这个故事并不复杂,内容较简单,文内仅这个故事并不复杂,内容较简单,文内仅2 2张图与张图与1 1个表格。但创新点个表格。但创新点明显,文章发表于明显,文章发表于Ann Rheum Dis.2008;67(7):1037-40.Impact Ann Rheum Dis.2008;67(7):1037-40.Impact fector 7.188fector 7.188。第第2项研究:项研究:Clini
7、cal significance of increased CD4+CD25-Foxp3+T cells in patients with new-onset systemic lupus erythematosus 第第3项研究项研究:Are CD4+CD25 Foxp3+cells in untreated new-onset lupus patients regulatory T cells?Arthritis Res Ther 2009;11(5):R153研究新发研究新发SLE 患者周围血中的患者周围血中的CD4+CD25-Foxp3+T细胞与细胞与CD4+CD25+Foxp3+T细
8、胞表面表达的分子及分泌的细胞因子有何不同,细胞表面表达的分子及分泌的细胞因子有何不同,及及 CD4+CD25-Foxp3+T细胞细胞有否抑制。有否抑制。检测检测22例新发例新发SLE 患者。用流式细胞仪分析比较患者。用流式细胞仪分析比较CD4+CD25-Foxp3+细细胞与胞与CD4+CD25+Foxp3+T细胞表面标志子表达及细胞因子表达的差异。细胞表面标志子表达及细胞因子表达的差异。检测检测CD4+CD25+Foxp3+T细胞对细胞对T细胞增殖有否调节作用。细胞增殖有否调节作用。新发新发SLE患者其它免疫细胞有什么特患者其它免疫细胞有什么特点点 新发其它自身免疫病免疫细胞有什么新发其它自身
9、免疫病免疫细胞有什么特点特点 新发其它自身免疫病新发其它自身免疫病其它免疫学指标其它免疫学指标有什么特点有什么特点从案例一能得到的启发从案例一能得到的启发案例二案例二新型抗流感药新型抗流感药DAS181的研发的研发A型流感病毒的生活周期型流感病毒的生活周期已批准上市的抗流感药物已批准上市的抗流感药物 M2离子通道阻滞剂离子通道阻滞剂 盐酸金刚乙胺(盐酸金刚乙胺(1993年美国年美国FDA批准上市)批准上市)金刚烷胺(金刚烷胺(1966 FDA年批准为预防药,年批准为预防药,1976年确认其为治疗药)年确认其为治疗药)神经胺酸酶(神经胺酸酶(NA)抑制剂)抑制剂 达菲(达菲(1999年美国年美国
10、FDA批准上市)批准上市)扎那米韦(扎那米韦(1999年年5月首先在澳大利亚获准上市)月首先在澳大利亚获准上市)除了毒副作用外,除了毒副作用外,主要的问题是流感病毒产生抗药性,主要的问题是流感病毒产生抗药性,因为病毒基因突变因为病毒基因突变研发中的抗流感药物研发中的抗流感药物流感病毒的流感病毒的NA与与HA相互作用相互作用感染靶细胞感染靶细胞 Neu5Ac (2,3)-Gal与与Neu5Ac (2,6)-Gal分子就分子就是流感病毒的受体。人流感病毒主要识别是流感病毒的受体。人流感病毒主要识别(2,6)-Gal唾液酸,禽唾液酸,禽流感病毒与马流感病毒主要识别流感病毒与马流感病毒主要识别(2,3
11、)-Gal唾液酸。流感病毒的唾液酸。流感病毒的HA与细胞表面含与细胞表面含(2,3)-Gal或或/和和(2,6)-Gal唾液酸的糖蛋白相结合。唾液酸的糖蛋白相结合。人人呼吸道上皮细胞的唾液酸主要是呼吸道上皮细胞的唾液酸主要是(2,6)-Gal型,但也型,但也有有(2,3)-Gal型,所以型,所以禽禽流感病毒也能感染人,尽管感流感病毒也能感染人,尽管感染效率不高。染效率不高。NA的作用是破坏的作用是破坏HA的受体。它酶切的受体。它酶切呼吸道黏膜上诸如呼吸道黏膜上诸如mucin等潜在抑制性分子的唾等潜在抑制性分子的唾液酸,从而使之灭活,促进病毒在呼吸道传播液酸,从而使之灭活,促进病毒在呼吸道传播;
12、酶切病毒感染细胞表面的唾液酸,促进子代病毒酶切病毒感染细胞表面的唾液酸,促进子代病毒释出,以助于病毒传播。释出,以助于病毒传播。HA的受体结合作用和的受体结合作用和NA的受体破坏作用相互相成,维持平衡,于病的受体破坏作用相互相成,维持平衡,于病毒复制和传播十分重要。毒复制和传播十分重要。呼吸道上皮细胞呼吸道上皮细胞唾液酸唾液酸流感病毒流感病毒 HANA 以往有报道,以往有报道,体外实验中唾液体外实验中唾液酸酶能有效阻止酸酶能有效阻止流感病毒感染细流感病毒感染细胞。胞。因此学者欲因此学者欲研制一种融合蛋研制一种融合蛋白,由唾液酸酶白,由唾液酸酶与能锚定于人呼与能锚定于人呼吸道上皮细胞的吸道上皮细
13、胞的蛋白组成蛋白组成。DAS181的分子模式的分子模式 报道已从微生物和真核细胞分离出报道已从微生物和真核细胞分离出15种底种底物特异性和酶动力学各异的唾液酸酶。从中物特异性和酶动力学各异的唾液酸酶。从中选择选择A.viscosus唾液酸酶的催化功能域。其理唾液酸酶的催化功能域。其理由为:底物特异性广;催化活性最大;人免由为:底物特异性广;催化活性最大;人免疫系统对其耐受,因为人正常口腔和胃肠道疫系统对其耐受,因为人正常口腔和胃肠道细菌也产生此唾液酸酶。细菌也产生此唾液酸酶。DAS181抗流感病毒作用的研究(细胞、抗流感病毒作用的研究(细胞、小鼠与雪貂模型)小鼠与雪貂模型)DAS181的创新点
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- 临床 科研 选题 设计
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