荧光定量PCR技术原理与结果分析教学内容.ppt
《荧光定量PCR技术原理与结果分析教学内容.ppt》由会员分享,可在线阅读,更多相关《荧光定量PCR技术原理与结果分析教学内容.ppt(19页珍藏版)》请在得力文库 - 分享文档赚钱的网站上搜索。
1、荧光定量PCR技术原理与结果分析二、优越性v特异性荧光定量PCR具有引物和探针的双重特异性,故与传统的PCR相比,特异性大为提高。v敏感性荧光定量PCR的敏感度通常达E2拷贝/ml,对数期分析,线性范围很宽,为0-E11拷贝/ml。一般来讲临床标本中病原体的数目为0-E10/拷贝,在此范围内荧光定量PCR定量较为准确,标本不需稀释。v重复性荧光定量PCR结果相当稳定,因为域值设置在指数扩增期.在此阶段,各反应组分浓度相对稳定,没有副作用,CT与荧光信号的对数呈线性关系。与终点法相比CT值能更稳定,更精确地反映起始模板的拷贝数。v自动化无PCR后续操作步骤,降低产物污染的风险性。三、应用v用于核
2、酸的定量如RNA、DNA的定量v用于核酸定性分析如SNP分析,基因型分析,RNA变异分析,溶解曲线分析等。四、定量方法定量方法v1.标准曲线法的绝对定量v2.标准曲线法的相对定量v3.比较CT法的相对定量五、荧光材料荧光材料v荧光探针和荧光染料vSYBRgreenIv水解探针TaqManv分子信标v杂交探针SYBRgreenI未结合的SYBR green I水解探针TaqMan荧光素淬灭剂 与目标序列互补FAMTETJOEHEXVIC TAMRA DABCYL 探针与目标序列配对时,发生荧光共振能量转移(FRET)光光能量转移Taq游离的探针荧光基团 淬灭剂 延伸时,Taq酶水解探针,使报告荧
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 荧光 定量 PCR 技术 原理 结果 分析 教学内容
限制150内