从钙超载角度探讨通脉养心丸心肌保护作用的机制_钙超载对心肌影响.docx
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1、从钙超载角度探讨通脉养心丸心肌保护作用的机制_钙超载对心肌影响 摘要:目的从抑制钙超载的角度探讨通脉养心丸抗细胞凋亡爱护心肌的作用机制。方法采纳大鼠心肌细胞原代培育方法获得正常心肌细胞并建立缺氧损伤细胞模型,采纳FLIPR Calcium 4 试剂盒检测药物对胞浆内钙离子浓度改变的影响;Annexin V/PI双染法检测心肌细胞总凋亡率。结果缺氧损伤组心肌细胞胞浆内钙离子浓度显著上升(P2+i in cultured hypoxia cardiomyocytes,and explore the mechanism of myocardial protection.MethodsPrimaril
2、y cultured neonate rat cardiomyocytes were used to establish the hypoxia models.Ca2+i of cardiomyocytes loaded by Fluo-4 was analyzed by Multiskan Ascent immediately.The apoptosis percentage of cardiomyocytes was measured by Annexin V/PI flow cytometry.ResultsCalcium in hypoxia cardiac myocytes inju
3、ry group was significantly higher. Calcium in TYP group were significantly lower than that in hypoxic injury group(P2培育箱(THERMO,FORMA3111型,美国);37 94%N2-5%CO2-1% O2培育箱(THERMO,FORMA3131型,美国);倒置相差显微镜(LEICA DMIL,德国);台式高速低温离心机(Biofuge primo R,美国);多功能读板机(Multiskan Ascent,THERMO LABSYSTEMS,美国);流式细胞仪(FACS,美
4、国)。 1.4含药血清的制备将50只Wistar 大鼠随机分为空白比照组及通脉养心丸1 g/kg、2 g/kg、4 g/kg、8 g/kg(日给药量)剂量组,连续给药3 d,于末次给药1 h后腹主动脉取血,56 水浴孵育30 min灭活补体,3 000 r/min离心15 min后取血清,无菌条件下过滤分装入冻存管中,-20 保存备用。 1.5心肌细胞原代培育及缺氧损伤模型制备心肌细胞原代培育参照文献方法1加以改良。取1 d3 d龄 Wistar大鼠经75%酒精消毒30 s,将心室肌剪成(12) mm3的组织块培育。收集未贴壁的细胞悬液并调整细胞浓度至5105/mL,接种于培育板中,于5%CO
5、2培育箱中培育48 h后换液。前3 d用0.1 mmol/L 5,-溴脱氧尿苷(Brdu)以抑制非心肌细胞生长。 分组及缺氧损伤模型,取稳定生长的单层心肌细胞,用无血清DMEM/F12培育液培育48 h,使细胞生长同步化,并将细胞分为6组:正常比照组、缺氧损伤组及通脉养心丸1 g/kg、2 g/kg、4 g/kg、8 g/kg剂量组。采纳MODEL3131型三气培育箱,94%N2、5%CO2、1%O2条件下缺氧孵育24 h,正常比照组于原条件下培育。 1.6检测指标 MTT比色法测定心肌细胞活力,并应用分析软件对心肌细胞浆钙离子浓度百分率与心肌细胞凋亡率进行相关性考察与回来分析,论证二者是否具
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