血细胞比容测定讲.ppt
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1、 血细胞比容测定一、概念 血细胞比容(血细胞比容(Hematocrit,HCT或或packed cell volume,PCV)是指)是指一定容积血液中红细一定容积血液中红细胞在全血所占体积的百分比。胞在全血所占体积的百分比。二、检测原理(一)、温氏法(一)、温氏法 :将将EDTA-K2抗凝血在一定条件抗凝血在一定条件下离心沉淀,由此而测出其红细下离心沉淀,由此而测出其红细胞在全血中所占体积的百分比。胞在全血中所占体积的百分比。(二)、微量法(二)、微量法:是采用一次性使用的是采用一次性使用的经肝素化的干燥毛细玻璃管(每支经肝素化的干燥毛细玻璃管(每支含肝素含肝素2)直接采集末梢血,以相)直接
2、采集末梢血,以相对离心力对离心力1000g(1100012000r/min)离心离心5min,取出后,取出后用尺量取血液总长度和血细胞层的用尺量取血液总长度和血细胞层的长度,或用微量血细胞比容测定读长度,或用微量血细胞比容测定读数器报告结果。数器报告结果。(三)、血液分析仪法:目前绝大多(三)、血液分析仪法:目前绝大多数血液分析仪使用电阻抗法进行细数血液分析仪使用电阻抗法进行细胞计数和血细胞比容测定。其原理胞计数和血细胞比容测定。其原理是利用血浆是电的良导体,而相对是利用血浆是电的良导体,而相对血细胞是电的不良导体,当细胞通血细胞是电的不良导体,当细胞通过小孔时,形成相应大小的脉冲,过小孔时,
3、形成相应大小的脉冲,脉冲的多少即为血细胞的数目,脉脉冲的多少即为血细胞的数目,脉冲的高度代表血细胞的体积。冲的高度代表血细胞的体积。使用血液分析仪法的血细胞比容是由测定红细胞平均体积和红细胞计数两项指标后导出,即血细胞比容(HCT=红细胞平均体积X红细胞计数)(四)、相对离心力(四)、相对离心力 1、相相对对离离心心力力(RCF)g=1.118x10-5 x有效离心半径(有效离心半径(cm)x转速转速2/min 2、温氏法测定时以相对离心力、温氏法测定时以相对离心力2264g(即有效离心半径(即有效离心半径22.5cm,3000r/min)离心)离心30 min,读,读取红细胞层的高度。取红细
4、胞层的高度。3、微量法测定时以相对离心力、微量法测定时以相对离心力1000g(1100012000r/min)离心离心5 min,取出后用尺量取血液总,取出后用尺量取血液总长度和血细胞层的长度。长度和血细胞层的长度。三、检测方法及方法学评价(一)、检测方法检测方法 1、温温氏氏法法:压压积积容容量量管管长长11cm,内内经经2.5cm,管管上上刻刻有有0100mm刻刻度度的的平平底底管管,其其读读数数一一侧侧由由下下而而上上供供测测红红细细胞胞容容积积用用,另另一一侧侧由由上上而而下供红细胞沉降率测定用)下供红细胞沉降率测定用)2、微量法、微量法:按常法消毒、穿刺手指,按常法消毒、穿刺手指,将
5、血液经自然毛细现象进入特制的将血液经自然毛细现象进入特制的毛细玻管中(肝素),用套塞或橡毛细玻管中(肝素),用套塞或橡皮泥堵塞一端,放入专用离心机中,皮泥堵塞一端,放入专用离心机中,以以1100012000r/min高速离心高速离心5min。测量红细胞层和全层的长度,。测量红细胞层和全层的长度,计算比值,即为红细胞比积。计算比值,即为红细胞比积。(二)、方法学评价(二)、方法学评价1、温温氏氏法法:中中速速离离心心3000r/min,离离心心30min;离离心心沉沉淀淀过过程程中中不不能能完完全全排排除除红红细细胞胞间间残残留留的的血血浆浆,使使结结果果偏偏高高;所所用时间长、标本多,已属淘汰
6、之列。用时间长、标本多,已属淘汰之列。2、微量离心法:高速离心、微量离心法:高速离心11000-12000 r/min,离心,离心5min;离心;离心力较大,红细胞间残留的血浆量平力较大,红细胞间残留的血浆量平均较温氏法低均较温氏法低2%(约含(约含1%-3%残留血浆);标本用量小,操作简残留血浆);标本用量小,操作简便,现被便,现被WHO定为首选常规方法。定为首选常规方法。3、血液分析仪法:目前血液分析仪提供血液分析仪法:目前血液分析仪提供的参数中包括的参数中包括Hct测定,由于结果是仪器测定,由于结果是仪器测定数万个细胞体积产生的脉冲叠加后测定数万个细胞体积产生的脉冲叠加后换算而来的,避免
7、了血浆残留引起的误换算而来的,避免了血浆残留引起的误差。但应当注意患者红细胞增多、白细差。但应当注意患者红细胞增多、白细胞和血小板数量明显增多、患者血浆中胞和血小板数量明显增多、患者血浆中有异常蛋白质或血浆渗透压异常时,仪有异常蛋白质或血浆渗透压异常时,仪器法常会出现误差。器法常会出现误差。四、质量控制(一)、手工法:应注意以下因素(一)、手工法:应注意以下因素1、抗抗凝凝剂剂量量不不准准确确或或抗抗凝凝剂剂与与血血液液混匀不充分致血液凝固。混匀不充分致血液凝固。2、离离心心速速度度不不够够或或时时间间过过短短均均会会产产生误差。生误差。3、所所用用器器材材必必须须清清洁洁干干燥燥,避避免免溶
8、溶血血4、红红细细胞胞形形态态改改变变时时应应注注明明(如如大大红红细细胞胞、小小红红细细胞胞、椭椭圆圆形形红红细细胞胞、镰镰形形红红细细胞胞等等),变变形形性性减减低低的的红红细细胞胞可可使使血血浆浆残残留留量量增增加加6%。不不能能使用改变红细胞容积的抗凝剂。使用改变红细胞容积的抗凝剂。5、红红细细胞胞增增多多症症时时,血血细细胞胞比比容容明明显增加,血浆残留量亦会增加。显增加,血浆残留量亦会增加。6、避免血液稀释(静脉三通管抽血)、避免血液稀释(静脉三通管抽血)7、离心条件必须恒定。、离心条件必须恒定。(二)、血液分析仪法:(二)、血液分析仪法:1、避免溶血、避免溶血2、避免血液稀释(静
9、脉三通管抽血)、避免血液稀释(静脉三通管抽血)3、应应注注意意Hct与与红红细细胞胞计计数数和和红红细细胞胞平均体积测定值的相关性。平均体积测定值的相关性。五、参考值1、温氏法、温氏法 男男40%54%女女 37%47%2、微量法、微量法 男男38%48%女女36%47%3、血细胞分析仪、血细胞分析仪六、临床意义(一)、增高(一)、增高1、见于各种原因所致的血液浓缩,、见于各种原因所致的血液浓缩,如大量呕吐、大手术后、腹泻、失如大量呕吐、大手术后、腹泻、失血、大面积烧伤血、大面积烧伤2、真性红细胞增多症和继发性红细、真性红细胞增多症和继发性红细胞增多症胞增多症3、用于临床补液及输液量的依据、用
10、于临床补液及输液量的依据(二)、减低(二)、减低1、见见于于各各种种贫贫血血。红红细细胞胞减减少少,红红细细胞胞比比积积随随之之减减少少,但但不不同同原原因因的的贫贫血血,红红细细胞胞体体积积大大小小不不同同,两两者者减减低低不不一一定定平平行行,故故临临床床常常用用计计算算红红细细胞胞平平均均容容积积、红红细细胞胞平平均均血血红红蛋蛋白白含含量量和和红红细细胞胞平平均均血血红红蛋蛋白白浓浓度,有助于贫血的鉴别与分类。度,有助于贫血的鉴别与分类。2、可用作计算可用作计算MCV、MCHC的基础的基础数据,是影响全血粘度的决定因素数据,是影响全血粘度的决定因素之一(之一(例血液粘度增高致休克)例血
11、液粘度增高致休克)。3、大量饮水、大量饮水 红细胞平均指数一、红细胞平均指数包括:一、红细胞平均指数包括:1、红细胞平均容积(红细胞平均容积(mean corpuscular volume,MCV),),指每个红细胞平均体积的大小,以指每个红细胞平均体积的大小,以飞升(飞升(fl)为单位;)为单位;2、红细胞平均血红蛋白含量(红细胞平均血红蛋白含量(mean corpuscular hemoglobin MCH),指每个红细胞内平均所含),指每个红细胞内平均所含血红蛋白量,以皮克(血红蛋白量,以皮克(pg)为单位;)为单位;3、红红细细胞胞平平均均血血红红蛋蛋白白浓浓度度(mean corpu
12、scular hemoglobin concentration,MCHC),指指平平均均每每升升红红细细胞胞中中所所含含血血红红蛋蛋白白浓浓度度(g/L)。)。二、检测原理 对对同同一一抗抗凝凝血血标标本本同同时时计计数数红红细细胞胞、测测定定血血红红蛋蛋白白和和血血细细胞胞比比容容,由由此此可进一步计算出红细胞可进一步计算出红细胞3个平均指数。个平均指数。1、MCV(fl)=每每升升血血液液中中红红细细胞胞体体积积/每升血液中红细胞数每升血液中红细胞数=Hct/RBC 例例:红红细细胞胞为为3.50*1012/L,红红细细胞比容胞比容0.36则:则:MCV=0.36/3.50*1012/L=
13、103 fl2、MCH(pg)=每每升升血血液液中中血血红红蛋蛋白白含含量量/每升血液中红细胞个数每升血液中红细胞个数=HB/RBC 例例:红红细细胞胞为为3.50*1012/L,血血红红蛋蛋白白为为120 g/L,则:,则:MCH=120g/L/3.50*1012/L=34.20 pg3、MCHC(g/L)=每每升升血血液液中中血血红红蛋蛋白白含含量量/每每升升血血液液中中红红细细胞胞体体积积=HB/Hct 例例:血血红红蛋蛋白白为为120 g/L,血血细细胞胞比容为比容为0.36,则:,则:MCHC=120 g/L/0.36=333 g/L三、方法学评价1、MCV 仪仪器器法法CV1%,手
14、手工工法法CV值值在在10%左左右右。许许多多血血液液分分析析仪仪设设定定的的MCV值值最最大大域域值值是是360fl,因因此此可可能能包包含含红红细细胞胞团团块块,当当红红细细胞胞凝凝集集如如冷冷凝凝集集综综合合征征可可引引起起MCV假假性性增增高高;严严重重的的高高血血糖糖症症(葡葡萄萄糖糖高高于于33.3mmol/L)可可引引起起红红细细胞胞肿胀,使肿胀,使MCV假性增高。假性增高。2、MCH 高高脂脂血血症症或或白白细细胞胞增增多多症症因因血血浆浆浊浊度度增增加加而而使使MCH假假性性增增高高,手手工工法法测测定定可可先先离离心心以以消消除除浊浊度度,测测定定结结果果可可以以得得到到纠
15、纠正正。仪仪器器法法CV为为0.6%1.2%,手手工工法法CV值值在在10%左右。左右。3、MCHC 这这个个值值和和血血红红蛋蛋白白的的溶溶解解度度有有关关,血血红红蛋蛋白白浓浓度度高高于于该该值值可可能能会会产产生生结结晶晶。此此外外,手手工工法法MCHC的的测测定定受受到到Hct(血血浆浆残残留留或或出出现现异异常常红红细细胞胞)和和Hb(高高脂脂蛋蛋白白血血症症、白白细细胞胞增增多多症症)的的影影响响。仪仪器法器法CV为为1%1.5%,四、质量控制1、手手工工法法 由由于于红红细细胞胞3个个平平均均指指数数都都是是间间接接算算出出的的,因因此此,做做红红细细胞胞计计数数、血血红红蛋蛋白
16、白测测定定、血血细细胞胞比比容容的的测测定定必必须须用用同同一一份份抗抗凝凝血血标标本本,且且所所测测定定的的数数据据必必须须准准确确,否否则则误误差很大。差很大。2、血血液液分分析析仪仪法法 必必须须注注意意红红细细胞胞3个个平平均均指指数数之之间间与与红红细细胞胞计计数数、血血红红蛋蛋白白、血血细细胞胞比比容容测测定定3个个检检测测指指标标之之间间的的相相互互关关联联性性。必必须须注注意意不不能溶血。能溶血。五、参考值1、手工法:、手工法:MCV80-92fl;MCH27-31pg;MCHC320-360g/L;2、仪器法:、仪器法:MCV80-100fl;MCH27-34pg;MCHC3
17、20-360g/L;六、贫血的红细胞形态学分类贫贫血血分分类类 MCV MCH MCHC 贫贫 血血正正细细胞胞性性贫贫血血 正正常常 正正常常 正正常常 再再障、急性失血性障、急性失血性 贫血、某些溶贫贫血、某些溶贫大大细细胞胞性性贫贫血血 增增高高 增增高高 正正常常 各各种种造血物质缺乏造血物质缺乏 或利用不良的贫血或利用不良的贫血 巨幼细胞性贫血巨幼细胞性贫血单单纯纯小小细细胞胞贫贫血血 减减低低 减减低低 正正常常 慢慢性性感染、慢性肝感染、慢性肝 肾疾病性贫血肾疾病性贫血小小细细胞胞低低色色素素贫贫血血 减减低低 减减低低 减减低低 缺缺铁铁性性贫贫血及铁利血及铁利 用不良贫血、用
18、不良贫血、慢性失血性贫血、地中海贫血慢性失血性贫血、地中海贫血 红细胞直径和厚度测定一、一、器材及使用器材及使用(一)、器材器材1、接接目目测测微微器器:这这是是一一圆圆形形玻玻片片,正正中中刻刻有有50或或100等等分分格格,每每小小格格相相当当于于多多少少微微米米,必必须须根根据据当当时时所所用用显显微微镜镜镜镜筒筒长长度度以以及及目目镜镜、物物镜镜的放大倍数而改变。的放大倍数而改变。2、镜台测微器:这是用以校正接目、镜台测微器:这是用以校正接目测微器,外观与载玻片相似,正中测微器,外观与载玻片相似,正中有一圆形盖片封有标准尺,总长为有一圆形盖片封有标准尺,总长为1mm,分为,分为100等
19、分,因此每格为等分,因此每格为10u um。(二)校正(二)校正 1、接目测微器的校正:、接目测微器的校正:(1)将将接接目目测测微微器器放放在在接接目目镜镜内内,镜镜台台测测微微器器放放在在镜镜台台上上,用用低低倍倍镜镜找找到到标标准准尺尺,并并移移至至视视野野中中央央,换换用用测测量量所所用用物物镜镜,校校正正目目镜镜测测微微器器,测测量量红红细细胞胞直直径径则则换换油镜。油镜。(2)移动载物台,使镜台测微器标)移动载物台,使镜台测微器标准尺与目镜测微器的刻度平行,使准尺与目镜测微器的刻度平行,使左侧线与零重合,然后观察刻度与左侧线与零重合,然后观察刻度与标准尺右侧的重合线,分别记录其标准
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