植物组织培养第一章实验室的设计于基本操作.ppt
![资源得分’ title=](/images/score_1.gif)
![资源得分’ title=](/images/score_1.gif)
![资源得分’ title=](/images/score_1.gif)
![资源得分’ title=](/images/score_1.gif)
![资源得分’ title=](/images/score_05.gif)
《植物组织培养第一章实验室的设计于基本操作.ppt》由会员分享,可在线阅读,更多相关《植物组织培养第一章实验室的设计于基本操作.ppt(64页珍藏版)》请在得力文库 - 分享文档赚钱的网站上搜索。
1、第一章第一章实验室设计与基本操作实验室设计与基本操作陈传红陈传红 制作制作 2007/5本章内容提要:本章内容提要:一、实验室及其基本设备一、实验室及其基本设备 二、基本操作二、基本操作 三、培养基及其配制三、培养基及其配制四、培养条件的控制四、培养条件的控制陈传红陈传红 制作制作 2007/5一、实验室及基本设备一、实验室及基本设备植植物物组组织织培培养养实实验验室室一一般般可可划划分分为为四四部部分分:化化学学实实验验室室、无无菌菌操操作作室室、培培养养室室、鉴鉴定室、驯化移植室。定室、驯化移植室。陈传红陈传红 制作制作 2007/51 1、化学实验室(准备室)、化学实验室(准备室)为为培
2、培制制培培养养基基的的重重要要场场所所,一一般般宜宜大大不不宜宜小小,有有较较大的平面实验台;大的平面实验台;主主要要设设备备:精精密密天天平平(1/100001/10000、1/1001/100)、托托盘盘天天平平、pHpH计计、电电冰冰箱箱、干干燥燥箱箱、蒸蒸馏馏水水器器、高高压压消消毒毒锅、电炉和不锈钢锅等;锅、电炉和不锈钢锅等;玻玻璃璃仪仪器器:试试管管、烧烧杯杯、量量筒筒、容容量量瓶瓶、移移液液管管、滴管培养基分装器皿等;滴管培养基分装器皿等;清洗器具:清洗器具:洗涤液、各式洗瓶刷、塑料框等洗涤液、各式洗瓶刷、塑料框等。陈传红陈传红 制作制作 2007/5培养培养 容器容器陈传红陈传
3、红 制作制作 2007/5立式高压蒸汽灭菌锅立式高压蒸汽灭菌锅卧式高压蒸汽灭菌锅卧式高压蒸汽灭菌锅陈传红陈传红 制作制作 2007/5pH计计陈传红陈传红 制作制作 2007/52 2、无菌操作室(接种室)、无菌操作室(接种室)实验室的无菌条件实验室的无菌条件组织培养成败的关键。组织培养成败的关键。是无菌操作的重要场所,面积宜小不宜是无菌操作的重要场所,面积宜小不宜大;大;墙墙壁壁光光滑滑平平整整,地地面面平平坦坦无无缝缝,室室外外有有缓缓冲冲室室,放放置置工工作作服服、拖拖鞋鞋和和帽帽子子,并并用用紫紫外外线线随随时时灭灭菌菌,以以减少杂菌进入无菌室;减少杂菌进入无菌室;主主要要设设备备:接
4、接种种解解剖剖器器械械(各各种种剪剪刀刀、各各种种镊镊子子、解解剖剖刀刀)、空空调调、紫紫外外线线灯灯、超超净净工工作作台台或或接接种种箱箱等。等。陈传红陈传红 制作制作 2007/5超静工作台超静工作台陈传红陈传红 制作制作 2007/5接种接种推车推车电热式电热式灭菌仪灭菌仪接种操作接种操作陈传红陈传红 制作制作 2007/5陈传红陈传红 制作制作 2007/53 3、培养室、培养室培培养养的的重重要要场场所所,尽尽量量安安排排在在楼楼层层较较高高处处,以以利利采采光光,减减少少尘尘埃埃和和杂杂菌菌污污染染;利利于于清清洁洁、干干燥燥和和保保温温隔热;隔热;尽量利用自然光照,最大限度地加大
5、采光面积;尽量利用自然光照,最大限度地加大采光面积;主主要要设设备备:培培养养架架与与灯灯光光、配配电电板板、石石英英电电力力时时控控器器、空空调调机机、加加湿湿器器、控控温温仪仪、温温度度湿湿度度计计、最最高高最低温度计等。最低温度计等。陈传红陈传红 制作制作 2007/5培养架培养架试管苗培养试管苗培养陈传红陈传红 制作制作 2007/5培养室培养室陈传红陈传红 制作制作 2007/5牡丹山茶在增殖牡丹山茶在增殖蝴蝶兰试管苗开花情况金花茶滤金花茶滤纸桥液体纸桥液体培养生根培养生根非洲紫罗兰非洲紫罗兰壮苗生根壮苗生根陈传红陈传红 制作制作 2007/5各种材料各种材料的培养的培养陈传红陈传红
6、 制作制作 2007/54 4、鉴定室、鉴定室(细胞学观察室细胞学观察室)是观察和鉴定培养物的诱导、分化、遗是观察和鉴定培养物的诱导、分化、遗传物质转移的场所。传物质转移的场所。主要设备:主要设备:高倍显微镜、倒置显微镜、高倍显微镜、倒置显微镜、实体显微镜、恒温箱、以及做植物切片实体显微镜、恒温箱、以及做植物切片全套设备等。全套设备等。陈传红陈传红 制作制作 2007/55 5、驯化移植室(温室、大棚等)、驯化移植室(温室、大棚等)主要用于试管苗的移栽管理,以及实验主要用于试管苗的移栽管理,以及实验材料的准备。材料的准备。主要设备:主要设备:温室、大棚、荫棚、移植床、温室、大棚、荫棚、移植床、
7、钵、盆、各种基质、喷灌设施等。钵、盆、各种基质、喷灌设施等。陈传红陈传红 制作制作 2007/5移栽移栽苗床苗床陈传红陈传红 制作制作 2007/5二、基本操作二、基本操作1.洗涤洗涤2.灭灭菌菌植植物物组组织织培培养养中中最最致致命命的的危危害害是是污污染染,因因此,灭菌工作是极其重要的。此,灭菌工作是极其重要的。有有菌菌的的范范畴畴:凡凡是是暴暴露露在在(未未经经处处理理的的)空空气气中中的的物物体体,曾曾经经接接触触过过自自然然水水源源的的物物体体,至至少少它它的的表表面面,毫毫无无例例外外都都是是有有菌菌的的。它它的的内内部部在在未未经经证证实实之之前前,也应以有菌物休看待。也应以有菌
8、物休看待。无无菌菌的的范范畴畴:经经过过高高温温灼灼烧烧或或蒸蒸煮煮过过后后的的物物体体,或或经经其其它它物物理理的的或或化化学学灭灭菌菌方方法法处处理理过过后后的的物物体体,是是无菌的。无菌的。陈传红陈传红 制作制作 2007/53、常用的灭菌方法、常用的灭菌方法物物理理方方法法:干干热热(烘烘烤烤和和灼灼烧烧)、湿湿热热(蒸蒸煮煮或或加加压压蒸蒸煮煮)、射射线线处处理理、超超声声超超、微微波波处处理理、过过滤滤后后的的流流体体(空空气气、溶溶液液)、离离心心沉沉淀淀、清清洗洗和和大大量量无无菌水冲洗技术措施。菌水冲洗技术措施。化化学学方方法法:灭灭菌菌剂剂-升升汞汞、福福尔尔马马林林、双双
9、氧氧水水、来来苏苏尔尔、高高锰锰酸酸钾钾、漂漂白白粉粉、次次氯氯酸酸钾钾、抗抗菌菌剂剂、洒精等。洒精等。要根据工作中的不同材料和不同目的适当选用。要根据工作中的不同材料和不同目的适当选用。陈传红陈传红 制作制作 2007/5(1 1)培养基的灭菌)培养基的灭菌培养基高培养基高压蒸汽蒸汽灭菌所必需的最少菌所必需的最少时间容器的体积容器的体积(ml)最少时间最少时间(121、min)205015751502025050025100030150035200040陈传红陈传红 制作制作 2007/5(2)(2)不耐热的物质将采用过滤灭菌不耐热的物质将采用过滤灭菌一一些些生生长长因因子子,如如:生生长长
10、素素(IAAIAA)、赤赤霉霉素素(GAGA3 3)、玉玉米米素素(ZTZT)、脱脱落落酸酸(ABAABA)、尿尿素素和某些维生素和某些维生素是不耐热的,不能用高压灭菌处理。是不耐热的,不能用高压灭菌处理。通常采用过滤灭菌的方法。通常采用过滤灭菌的方法。防细菌滤膜其孔径尺寸小于或等于防细菌滤膜其孔径尺寸小于或等于0.450.45微米。微米。陈传红陈传红 制作制作 2007/5无菌过滤器无菌过滤器陈传红陈传红 制作制作 2007/5(3 3)干热灭菌法)干热灭菌法玻璃器皿及耐热用具等,可采用干热灭菌。玻璃器皿及耐热用具等,可采用干热灭菌。是是利利用用烘烘箱箱加加热热到到150150,40min4
11、0min,或或120 120,120min120min,来杀灭微生物。来杀灭微生物。由由于于这这一一方方法法能能源源消消耗耗大大,费费时时间间,这这一一方方法法并并不常用,尽量用高压灭菌来取代它。不常用,尽量用高压灭菌来取代它。陈传红陈传红 制作制作 2007/5(4 4)灼烧灭菌)灼烧灭菌无菌操作的器械主要有解剖刀、镊子、剪刀等;无菌操作的器械主要有解剖刀、镊子、剪刀等;先先将将它它们们放放入入9595的的洒洒精精中中,用用前前取取出出在在洒洒精精灯灯上上灼烧灭菌,后放于灭过菌的支架上,凉后立即用;灼烧灭菌,后放于灭过菌的支架上,凉后立即用;通常刀和镊子等都是两把轮流用;通常刀和镊子等都是两
12、把轮流用;一一般般使使用用7070洒洒精精的的,但但在在实实践践中中我我认认为为使使用用9595比比7070的效果要好。的效果要好。此外瓶口、棉塞、包口纸也常用此法灭菌。此外瓶口、棉塞、包口纸也常用此法灭菌。陈传红陈传红 制作制作 2007/5(5 5)布制品采用高压灭菌)布制品采用高压灭菌布布制制品品:如如布布(线线)手手套套、帽帽子子、套套袖袖、工作服、口罩等。工作服、口罩等。方方法法:洗洗净净、凉凉干干,用用牛牛皮皮纸纸包包好好,放放入高压锅中灭菌即可。入高压锅中灭菌即可。陈传红陈传红 制作制作 2007/5(6 6)植物材料的表面灭菌)植物材料的表面灭菌外外植植体体(explantex
13、plant):用用作作组组织织培培养养的的材材料料,即即在在原原生生长长部部位位取取得得并并转转移移到到人人工工培培养养基基上上生生长长的的组组织切段;简单地讲就是接种的植物材料。织切段;简单地讲就是接种的植物材料。外植体的选择原则:外植体的选择原则:优良的种质;优良的种质;健壮的植株;健壮的植株;外植体大小;外植体大小;外植体的时期;外植体的时期;细胞培养材料。细胞培养材料。接接种种(inoculateinoculate):把把处处理理过过的的材材料料经经无无菌菌操操作作手续放置到培养基上的过程。手续放置到培养基上的过程。陈传红陈传红 制作制作 2007/5 外植体表面灭菌过程外植体表面灭菌
14、过程为了得到无菌材料,植物组织必须先进行消毒。为了得到无菌材料,植物组织必须先进行消毒。消消毒毒试试剂剂的的选选择择及及处处理理时时间间要要依依材材料料对对试试剂剂的的敏敏感性而定。感性而定。可用酒精棉对组织进行表面消毒。可用酒精棉对组织进行表面消毒。选材选材 刷洗、冲洗刷洗、冲洗 用用洗洗衣衣粉粉水水或或肥肥皂皂水水浸洗(搅动)浸洗(搅动)自自来来水水冲冲洗洗 7070酒酒精精浸浸泡泡30306060秒振荡秒振荡 0.1 0.1升汞升汞3 31010分钟分钟 无菌水冲先无菌水冲先3 35 5次次 接种接种陈传红陈传红 制作制作 2007/5 常用表面灭菌剂使用浓度及效果比较表常用表面灭菌剂使
15、用浓度及效果比较表灭菌剂灭菌剂使用浓度使用浓度持续时间持续时间去除的难易去除的难易效果效果()(min)次氯酸钙次氯酸钙910530易易很好很好次氯酸钠次氯酸钠2.530520易易很好很好过氧化氢过氧化氢1012515最易最易好好溴溴水水12210易易很好很好硝酸银硝酸银12530较难较难好好氯化汞氯化汞0.11215较难较难最好最好抗菌素抗菌素450ppm3060中中比较好比较好陈传红陈传红 制作制作 2007/5三、培养基及其配制三、培养基及其配制1 1、培养基的种类及其组成、培养基的种类及其组成培培养养基基(Medium):植植物物组组织织培培养养离离体体材材料料赖赖以生存的以生存的“土
16、壤土壤”,是外植体生长的营养物质。,是外植体生长的营养物质。培养基种类:培养基种类:基本培养基、完全培养基。基本培养基、完全培养基。基本培养基组分:基本培养基组分:大大量量元元素素、微微量量元元素素,维维生生素素和和氨氨基基酸酸,糖糖和和水。水。陈传红陈传红 制作制作 2007/5基基本本培培养养基基最最常常用用的的有有十十几几种种,如如:MSMS,改改良良MSMS,WhiteWhite,改改 良良 WhiteWhite,NitschNitsch,MTMT,N N6 6,B B5 5,NTNT,BlaydesBlaydes等。等。完完全全培培养养基基:在在基基本本培培养养基基上上根根据据不不同
17、同要要求求附附加加一一些些植物生长调节物质以及其它的一些有机附加产物。植物生长调节物质以及其它的一些有机附加产物。根据物理性质分为:根据物理性质分为:固体和液体培养基固体和液体培养基,固固体体培培养养基基是是在在液液体体培培养养基基基基础础上上添添加加有有凝凝固固剂剂所所致致的。的。陈传红陈传红 制作制作 2007/52 2、培养基四种母液培养基四种母液(1 1)大量元素)大量元素:其其浓浓度度大大于于0.5m 0.5m mol/Lmol/L的的植植物物必必须须需需元元素素。他他们们占占植植物物体体干干重重的的百百分分之之几几十十至至万万分分之之几几。如如:氧氧、碳、氢、氮、钾、磷、镁、硫、钙
18、。碳、氢、氮、钾、磷、镁、硫、钙。(2 2)微微量量元元素素:其其浓浓度度小小于于0.5m 0.5m mol/Lmol/L的的植植物物所所需需的元素。如:硼、锰、锌、钼、铜、钴、铁、氯等。的元素。如:硼、锰、锌、钼、铜、钴、铁、氯等。(3 3)铁铁盐盐:用用FeSOFeSO4 47H7H2 2O O与与EDTAEDTA(乙乙二二胺胺四四乙乙酸酸二二钠)配成的鳌合铁。钠)配成的鳌合铁。陈传红陈传红 制作制作 2007/5(4 4)有机成分)有机成分 维维生生素素:硫硫胺胺素素(VB1VB1)、吡吡哆哆醇醇(VB6VB6)、烟烟酸酸(VB3VB3)、泛泛 酸酸 钙钙(VB5VB5)、生生 物物 素
19、素(VHVH)、钴钴 胺胺 素素(VB12VB12)、叶叶酸酸(VBcVBc)、抗抗坏坏血血酸酸(VCVC)等等等等,用用量量一一般般为为0.10.11.0mg/l1.0mg/l。是是以以各各种种辅辅酶酶的的形形式式参参与与多多项项代代谢谢活活动动,对对生生长长、分分化化等有很好的促进作用。等有很好的促进作用。氨氨基基酸酸:甘甘氨氨酸酸、精精氨氨酸酸、谷谷氨氨酸酸、谷谷酰酰氨氨、门门冬冬氨酸、门冬酰氨、丙氨酸等。氨酸、门冬酰氨、丙氨酸等。常常用用水水解解酪酪蛋蛋白白和和水水解解乳乳蛋蛋白白,它它们们是是含含有有约约2020种种氨氨基基酸的混合物,用量在酸的混合物,用量在10101000mg/l
20、1000mg/l之间。之间。陈传红陈传红 制作制作 2007/5肌肌醇醇(环环已已六六醇醇):它它在在糖糖的的互互相相转转化化中中起起作作用用。在在适适当当的的情情况况下下使使用用,能能促促进进愈愈伤伤组组织织生生长长、胚胚状状体体和和芽芽的的形形成成。用用量量为为5050100mg/l100mg/l。腺腺嘌嘌呤呤及及其其硫硫酸酸盐盐:可可促促进进芽芽的的形形成成和生长,难出芽的植物可试用。和生长,难出芽的植物可试用。其其它它附附加加产产物物:椰椰乳乳、香香蕉蕉、麦麦芽芽提提取取物物、酵酵母母提提取取物物、马马铃铃薯薯块块等等,它它们们对对培培养养的的某某些些植植物物的的器器官官、组组织织或或
21、细细胞胞有有一一定定的的促促进进生长的效应。生长的效应。陈传红陈传红 制作制作 2007/5(5 5)其他其他糖糖:糖糖作作为为碳碳源源,为为细细胞胞提提供供合合成成新新化化合合物物的的碳碳骨骨架架,为为细细胞胞的的呼呼吸吸代代谢谢提提供供底底物物与与能能源源,还还用用于于维持一定的渗透势。维持一定的渗透势。常用的碳源:常用的碳源:蔗糖,葡萄糖和果糖蔗糖,葡萄糖和果糖也较常用。也较常用。糖的用量一般为糖的用量一般为2 25 5。琼脂:琼脂:在固体培养时琼脂是作为固化剂。在固体培养时琼脂是作为固化剂。用量一般在用量一般在 6 610 g/L 10 g/L 之间。之间。陈传红陈传红 制作制作 20
22、07/5生长素类生长素类主要生理作用:主要生理作用:促进细胞伸长生长和细胞分裂;促进细胞伸长生长和细胞分裂;诱导受伤组织形成愈伤组织;诱导受伤组织形成愈伤组织;促进生根促进生根;促进植物性别分化,使形成的雌花雌株较多促进植物性别分化,使形成的雌花雌株较多;防止落花、落果防止落花、落果;促进无籽果实的形成等等。促进无籽果实的形成等等。(6)植物生长调节物质)植物生长调节物质陈传红陈传红 制作制作 2007/5生长素类在组织培养中的作用生长素类在组织培养中的作用诱导愈伤组织;诱导愈伤组织;诱导根形成;诱导根形成;与细胞分裂素配合使用,诱导不定芽的分与细胞分裂素配合使用,诱导不定芽的分 化,侧芽的萌
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 植物 组织培养 第一章 实验室 设计 基本 操作
![提示](https://www.deliwenku.com/images/bang_tan.gif)
限制150内