聚丙烯酰胺凝胶电泳.ppt
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1、 聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳Polyacrylamide Gel Electrophoresis,PAGE Li Li 一、一、PAG PAG 的的 组成组成 PAG是是 由由 丙丙 烯烯 酰酰 胺胺(acrylamide,Acr)单单体体和和N,N-亚亚甲甲双双丙丙烯烯酰酰胺胺(N,N,N,N-methylene bixacrylamide,Bis)交交联联剂剂通通过过自自由由基基聚聚合合而而成成的的一一种种多多孔孔三三维维网状结构。网状结构。Acr+Bis-多孔三维网状结构多孔三维网状结构 l(1)丙烯酰胺结构式(2)亚甲双丙烯酰胺)亚甲双丙烯酰胺 二、二、PAG PAG 的的
2、聚聚 合合 需要催化剂需要催化剂氧化还原系统作用,使氧化还原系统作用,使AcrAcr单体带有游离基,从而与单体带有游离基,从而与BisBis进行聚合。进行聚合。(一)化学聚合:(一)化学聚合:AP-TEMED系统系统 过硫酸胺过硫酸胺(NHNH4 4)2 2S S2 2O O8 8(Ammonium Ammonium persulfatepersulfate,APAP)作为催化剂,四甲基乙二作为催化剂,四甲基乙二胺胺(TEMEDTEMED)为加速剂。为加速剂。APAP在在水水溶溶液液中中能能产产生生游游离离基基SOSO4 42-2-,使使丙丙烯烯酰酰胺胺单单体体的的双双键键打打开开,活活化化形
3、形成成自自由由基基丙丙烯烯酰酰胺胺,然然后后游游离离AcrAcr和和BisBis作作用用就就能能聚聚合合形形成凝胶。成凝胶。TEMEDTEMED的游离碱基能促进的游离碱基能促进APAP的形成的形成SOSO4 42-2-。注意:注意:TEMEDTEMED量量多多少少都都会会影影响响催催化化作作用用,须须在在碱碱性条件下聚合性条件下聚合 分分子子氧氧存存在在,聚聚合合不不完完全全,须须去去除除分分子子氧,隔绝氧氧,隔绝氧 升升高高温温度度能能提提高高聚聚合合,降降低低温温度度能能延延迟迟聚合聚合 (二)光聚合:核黄素(二)光聚合:核黄素-TEMED系统系统核核黄黄素素(riboflavinribo
4、flavin)在在光光照照下下(可可见见光光或或紫紫外外光光)分分解解,其其黄黄素素部部分分被被还还原原成成无无色色型型,但但在在有有氧氧条条件件下下无无色色型型又又被被氧氧化化成成带带有有游游离离基的黄素,其也能使基的黄素,其也能使AcrAcr和和BisBis聚合形成凝胶。聚合形成凝胶。注意:注意:分分离离胶胶的的合合成成一一般般采采用用化化学学聚聚合合。因因为为若若用用光光聚聚合合,凝凝胶胶的的孔孔径径受受光光照照强强度度与与时时间间的的影影响响,导导致致孔孔径径大大小小不不同同,从从而而影影响响蛋蛋白白质质的的分离。分离。三、三、PAGPAG的浓度与孔径的关系的浓度与孔径的关系 PAGP
5、AG孔孔径径的的大大小小主主要要由由AcrAcr和和BisBis这这两两种种单单体体的的浓浓度度决决定定。可可以以根根据据要要分分离离物物质质分分子子的的大小,选择合适的单体浓度。大小,选择合适的单体浓度。AcrAcr/BisBis:2040 2040 完全透明且有弹性;完全透明且有弹性;10 10 很脆,易碎,不透明;很脆,易碎,不透明;100 100 糊状不成形,易破碎。糊状不成形,易破碎。凝胶总浓度凝胶总浓度T T100ml100ml凝胶溶液中含有凝胶溶液中含有AcrAcr和和 Bis Bis的总克数。的总克数。T=T=(a+ba+b)/m/m100%100%T T越大,凝胶孔径越小,适
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- 聚丙烯酰胺 凝胶电泳
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