细胞生物学综合性实验.ppt
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1、细胞生物学综合性实验辽宁师范大学生命科学学院辽宁师范大学生命科学学院辽宁师范大学生命科学学院辽宁师范大学生命科学学院那那那那 杰杰杰杰动物骨髓细胞染色体标本的制备及动物骨髓细胞染色体标本的制备及NOR的观察的观察 骨髓细胞具有丰富的细胞骨髓细胞具有丰富的细胞质和高度分裂能力,可直接观质和高度分裂能力,可直接观察到分裂细胞,是研究动物细察到分裂细胞,是研究动物细胞遗传学的好材料。胞遗传学的好材料。细胞生物学综合性实验细胞生物学综合性实验实验目的实验目的n掌握动物骨髓细胞染色体标本的制备技掌握动物骨髓细胞染色体标本的制备技术术n观察染色体的数目以及形态特征观察染色体的数目以及形态特征n熟悉银染法显
2、示动物细胞熟悉银染法显示动物细胞NOR的原理和的原理和方法,并了解方法,并了解NOR在细胞中分布情况在细胞中分布情况实验原理实验原理n经秋水仙素处理后,分裂的骨髓细胞被阻断在有丝分经秋水仙素处理后,分裂的骨髓细胞被阻断在有丝分裂中期,再经离心、低渗、固定、滴片等步骤,便可裂中期,再经离心、低渗、固定、滴片等步骤,便可制作出理想的染色体标本。制作出理想的染色体标本。n银染法可以显示中期染色体上的核仁组织区银染法可以显示中期染色体上的核仁组织区(NOR)。当)。当NOR在间期转录时,产生一种与转录在间期转录时,产生一种与转录活动有关的酸性蛋白,此蛋白可保留至中期并能将染活动有关的酸性蛋白,此蛋白可
3、保留至中期并能将染液中的银离子还原为金属银而显现为黑色。所以银染液中的银离子还原为金属银而显现为黑色。所以银染法可在中期染色体上显示具有转录活性的法可在中期染色体上显示具有转录活性的NOR数目。数目。而且,染色的深黑程度,还可以反应出基因的活性高而且,染色的深黑程度,还可以反应出基因的活性高低。低。实验材料实验材料n小白鼠或青蛙小白鼠或青蛙实验仪器、用具实验仪器、用具n天平天平n离心机离心机n温箱(或水浴锅)温箱(或水浴锅)n显微镜显微镜n酒精灯酒精灯n注射器(注射器(1ml)n解剖盘解剖盘n解剖剪解剖剪n刀片刀片n离心管离心管n吸管吸管n烧杯烧杯n冰冻载玻片冰冻载玻片试剂试剂1nCarnoy
4、固定液(现用现配)固定液(现用现配)甲醇:冰醋酸甲醇:冰醋酸=3:1n生理盐水生理盐水n0.1%秋水仙素溶液秋水仙素溶液用生理盐水配制用生理盐水配制n1/15 mol/L磷酸缓冲液(磷酸缓冲液(pH7.4)nGiemsa染液染液试剂试剂2n50%硝酸银溶液n氨银溶液:4g硝酸银溶于5ml蒸馏水,再加入5ml浓氨水n3%甲醛溶液:3ml36%甲醛液,加蒸馏水97ml,用4g无水醋酸钠调节pH7,4保存。使用前用甲酸调pH4.5动物染色体制备方法和步骤动物染色体制备方法和步骤n秋水仙素处理秋水仙素处理实验前实验前34h,按动物每克体重,按动物每克体重24g的的剂量,腹腔注射秋水仙素量,腹腔注射秋水
5、仙素n收集骨髓收集骨髓细胞胞处死死动物后,立即取出股骨,用刀片剔掉物后,立即取出股骨,用刀片剔掉肌肉,切开股骨两端,用吸有生理肌肉,切开股骨两端,用吸有生理盐水的水的注射器插入股骨的上端,冲出骨髓注射器插入股骨的上端,冲出骨髓细胞至胞至离心管中,直至股骨离心管中,直至股骨变白色白色为止。止。将收集的骨髓将收集的骨髓细胞于胞于1000rpm离心离心10min动物染色体制备方法和步骤动物染色体制备方法和步骤n低渗处理低渗处理离心后加入离心后加入600ul蒸馏水,用吸管轻轻吹蒸馏水,用吸管轻轻吹打成细胞悬液,置打成细胞悬液,置37低渗低渗20min20minn固定固定沿管壁逐滴加入固定液沿管壁逐滴加
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