不同环境温度下BLE对小鼠免疫机能的影响.docx
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1、不同环境温度下BLE对小鼠免疫机能的影响VIII目录目录摘 要IAbstractIV主要符号对照表VIII第1章 前言11.1 竹叶提取物11.1.1 竹叶提取物的化学成分及生物学活性11.1.2 竹叶提取物对免疫的影响研究进展11.2 冷应激21.2.1 冷应激的定义21.2.2 冷应激的研究进展31.2.3 冷应激对免疫的影响研究进展31.2.4 动物在低温环境下的食物选择41.2.5 大熊猫冬季食物选择及其影响因素41.3 实验目的和研究意义51.4 研究内容及技术路线51.4.1 研究内容51.4.2 技术路线6第2章 不同环境温度下灌注BLE小鼠脾脏病理学观察72.1 材料与方法72
2、.1.1 试验材料72.1.2 试验动物72.1.3 主要仪器及试剂72.2 试验方法72.2.1 脾脏病理组织学观察82.3 试验结果82.4 讨论11第3章 不同环境温度下灌注BLE小鼠血液常规指标和血清抗体含量检测123.1 材料与方法123.1.1 试验材料123.1.2 实验动物123.1.3 主要仪器与试剂123.2 试验方法123.2.1 血常规指标检测123.2.2 血清中免疫球蛋白含量检测123.3 数据分析123.4 试验结果133.4.1 血常规指标检测结果133.4.2 血清免疫球蛋白含量检测结果143.5 讨论173.5.1 不同环境温度下灌注BLE对小鼠血常规的影响
3、173.5.2 不同环境温度下灌注BLE对小鼠血清免疫球蛋白的影响18第 4 章 不同环境温度下灌注BLE小鼠血细胞亚群及细胞因子含量检测194.1 材料与方法194.1.1 试验材料194.1.2 实验动物194.1.3 主要仪器与试剂194.2 试验方法194.2.1 小鼠外周血淋巴细胞亚群含量检测194.2.2 外周血细胞因子含量检测204.3 数据处理204.4 结果204.4.1 外周血淋巴细胞亚群结果204.4.2 细胞因子结果214.5 讨论224.5.1 不同环境温度BLE对小鼠外周血淋巴细胞的影响224.5.2 不同环境温度BLE对小鼠外周血细胞因子的影响23第5章 不同环境
4、温度下BLE对小鼠脾脏细胞凋亡率和脾脏免疫细胞的的影响245.1 材料与方法245.1.1 试验材料245.1.2 实验动物245.1.3 主要仪器与试剂245.2 试验方法245.2.1 小鼠脾脏凋亡率检测方法245.2.2 小鼠脾脏免疫细胞亚群检测方法245.3 数据处理255.4 试验结果255.4.1 不同环境温度下小鼠脾脏细胞凋亡率255.4.2 不同环境温度下小鼠脾脏免疫细胞的含量255.5 讨论285.5.1 不同环境温度对小鼠脾脏细胞凋亡率的影响285.5.2 不同环境温度对小鼠脾脏免疫细胞亚群的影响28第6章 结论及有待于进一步研究的问题296.1 结论296.2 有待进一步
5、研究的问题29参考文献30致谢36关于学位论文原创性的声明37在学期间的科研情况38附件39摘要摘 要本研究以昆明小鼠为试验动物,以陕西佛坪国家级自然保护区巴山木竹叶提取物(Bamboo leaf extract of Bashania fargesii)为试验材料,按照不同温度、竹叶提取物不同灌注剂量,使用完全随机法,按照22因子设计,即温度(25、4)与灌胃剂量(0、340mg/kg)进行二水平因子设计,将240只小鼠分为4组(常温对照组:NT+CON;常温竹叶提取物组:NT+BLE;低温对照组:LT+CON;低温竹叶提取物组:LT+BLE),饲养28d,并于14d、28d两个时间点进行采
6、样。运用组织病理学、血常规检测、试剂盒、流式细胞术等方法,研究小鼠在脾脏病理组织形态、血常规指标、外周血免疫细胞亚群、外周血免疫细胞因子及免疫球蛋白、脾脏调亡率及脾脏免疫细胞亚群的动态变化。内容1 不同环境温度下灌注BLE小鼠脾脏病理学观察运用组织病理学方法,对小鼠脾脏进行病理学观察,结果如下: 14d NT+CON组和NT+BLE组小鼠脾脏组织结构正常,未见明显的病理学改变,LT+CON组和LT+BLE组脾窦扩张轻度淤血,且脾小体内细胞见较多空洞,空洞内核碎片较多;28d NT+CON组、NT+BLE组、LT+BLE组小鼠脾脏均未见明显的病理学改变,LT+CON组脾小体内细胞见较多空洞,空洞
7、内核碎片较多。内容2 不同环境温度下灌注BLE小鼠血液常规指标和血清抗体含量检测采用血细胞分析仪对小鼠血液常规指标进行检测,检测结果如下:温度对实验小鼠14d的WBC、14d和28d的PLT的影响达到显著水平(p0.05)。与NT相比,LT小鼠14d WBC数量显著降低(p=0.022),降低幅度为20.20%;与NT相比,LT小鼠14d和28d PLT降低也分别达到显著水平(p=0.022 & p=0.014),降低幅度分别为12.44%、14.08%。BLE灌注剂量对小鼠28d PLT数量的影响达到极显著(p=0.006),与CON组相比,BLE组PLT数量极显著降低(0.006),降低幅
8、度为16.20%。与NT相比,LT小鼠Lymph、Gran数量均降低,但未达到显著性水平。与CON组相比,BLE组小鼠Lymph、Gran数量均上升,但未达到显著性水平。采用ELISA试剂盒对血清抗体进行检测,检测结果如下:温度影响实验小鼠28d IgA,与NT相比,LT小鼠IgA显著降低(p0.001),降低幅度为35.05%,与NT相比,LT小鼠IgG显著降低(p=0.001),降低幅度为16.87%;灌注BLE剂量影响小鼠28d IgA,与CON相比,BLE组28d IgA含量显著降低(p0.001),降低幅度为44.58%。温度和灌注BLE对小鼠14d IgA,14d IgG存在交互作
9、用(p=0.022 & p0.05),与CON组相比,BLE组CD3+CD4+、CD3+CD8+含量均上升,但未达到显著性水平(p0.05)。采用流式细胞术对外周血细胞因子含量进行检测,结果如下:温度对14d、28d时外周血IFN-含量的影响显著或极显著(p=0.007 & p=0.045)与NT组相比,LT组小鼠14d、28d时外周血IFN-含量极显著或显著上升(p=0.007 & p=0.045),上升幅度分别为98.90%、74.42%;BLE剂量对14d、28d IL-17A含量的影响显著(p0.05),与CON组相比,BLE组小鼠14d、28d时IL-17A含量均显著降低(p=0.0
10、27 & p=0.021),降低幅度分别为23.90%、32.22%;温度与BLE剂量对14d时14d时FOXP3含量的影响极显著(p0.01),与NT组相比,LT组小鼠14d时FOXP3含量极显著上升(p=0.009),上升幅度为32.48%,与CON组相比,BLE组小鼠14d时FOXP3含量极显著下降(p=0.001),下降幅度为35.61%;BLE剂量对28d时FOXP3含量的影响显著(p=0.015),与CON组相比,BLE组小鼠28d时FOXP3含量显著下降(p=0.015),下降幅度为67.69%。内容4 不同环境温度下灌注BLE小鼠脾脏细胞凋亡率和脾脏免疫细胞的变化含量采用流式细
11、胞术对小鼠脾脏细胞凋亡率进行检测,结果如下:BLE灌注剂量对小鼠14d、28d时脾脏细胞总调亡率的影响显著或极显著(p=0.001 & p=0.016),与CON组相比, BLE组脾脏凋亡率在14d时极显著下降(p=0.001),下降幅度为58.21 %,在28d时显著下降(p=0.016),下降幅度为33.1%。与NT组相比,LT组小鼠14d时脾脏调亡率上升,上升幅度为51.89%,28d脾脏调亡率上升,上升幅度为10.51%。小鼠脾脏免疫细胞亚群结果如下:温度对小鼠14d、28d时脾脏CD3+含量具有极显著或显著影响(p=0.008 & p=0.029),与NT组相比,LT组小鼠14d、2
12、8d时脾脏CD3+含量极显著降低或显著降低(p=0.008 & p=0.029),降低幅度分别为20.05%、14.85%;温度对小鼠14d、28d时脾脏CD4+含量均具有极显著影响(p=0.01 & p=0.001),与NT组相比,LT组小鼠14d、28d时脾脏CD4+含量极显著降低(p=0.008 & p=0.029),降低幅度分别为27.04%、25.77%;BLE剂量对小鼠14d脾脏CD4+/ CD8+的影响显著(p=0.029),与CON组相比,BLE组小鼠14d脾脏CD4+/ CD8+显著上升(p=0.029),上升幅度为36.32%;温度对28d时CD4+/ CD8+的影响极显著
13、(p=0.001),与NT组相比,LT组小鼠28d时CD4+/ CD8+极显著降低(p=0.001),降低幅度为28.87%;温度和BLE剂量对28d时小鼠脾脏CD4+/ CD8+温度和剂量存在交互作用(p=0.004),对28d时CD4+/ CD8+几组数据进行简单效应检验,发现,低温对不同给药处理下CD4+/ CD8+的值具有极显著影响(p=0.007),BLE对不同温度处理下CD4+/ CD8+的值具有显著影响(p=0.037。)关键词:低温;小鼠;竹叶提取物;免疫机理;免疫细胞;细胞因子 AbstractAbstractIn this study, Kunming mice were
14、used as test animals, and bamboo leaf extract of Bashania fargesii in Foping National Nature Reserve in Shaanxi was used as the test material. According to different temperatures and different infusion doses of bamboo leaf extract Completely random method, according to 2 2 factor design, namely temp
15、erature (25 , 4 ) and intragastric dose (0, 340mg / kg) for two-level factor design, 240 mice were divided into 4 groups (normal temperature control group) : NT + CON; normal temperature bamboo leaf extract group: NT + BLE; low temperature control group: LT + CON; low temperature bamboo leaf extract
16、 group: LT + BLE), feeding for 28 days, and sampling at two time points, 14 days and 28 days . Using histopathology, routine blood tests, kits, flow cytometry and other methods to study the pathological morphology of the spleen in mice, routine blood indicators, peripheral blood immune cell subsets,
17、 peripheral blood immune cytokines and immunoglobulins, spleen Apoptosis rate and dynamic changes of spleen immune cell subsets.Content 1 Pathological observation of spleen of BLE mice perfused at different ambient temperatures Using histopathological methods, the spleen of the mice was pathological
18、ly observed. The results are as follows: 14d The spleen tissue structure of the mice in the NT + CON group and NT + BLE group was normal, and no obvious pathological changes were seen. Splenic sinus dilation in the BLE group was mildly congested, and there were more holes in the cells of the splenic
19、 body, and more hollow core fragments; 28d NT + CON group, NT + BLE group, LT + BLE group mice showed no obvious pathology Changes, LT + CON group spleen cells in the body see more hollow, hollow core fragments are more.Content 2 Routine blood index and serum antibody detection in BLE mice perfused
20、at different ambient temperatures Using blood cell analyzer to detect the routine indexes of mouse blood, the test results are as follows: the effect of temperature on the experimental mice 14 days WBC, 14 days and 28 days PLT reached a significant level (p 0.05). Compared with NT, the number of WBC
21、s in LT mice was significantly reduced at 14d (p = 0.022), a decrease of 20.20%; compared with NT, the reduction of PLT in 14d and 28d of LT mice also reached significant levels (p = 0.022 & p = 0.014), the reductions are 12.44% and 14.08% respectively. The effect of BLE perfusion dose on the 28d PL
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