(7.2.1)--7.2.1荧光分析法.pdf
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1、生活中的荧光荧光的产生 物质的分子吸收了紫外和可见光区电磁辐射后,电子能跃迁至激发态,然后以发射辐射光的形式释放其能量,本身又恢复到基态,这个物质会在极短的时间内,发射出比照射光波长更长的光,这种光就称为荧光,具有这种特性的物质被称为荧光物质。荧光的激发与发射光谱激发光谱激发光谱:表示不同激发波长的辐射引起物质发射某一波长荧光所得的光谱。方法:固定发射光波长em,依次改变激发波长ex,测荧光强度F,以F-ex作图得荧光物质的激发光谱。发射光谱发射光谱:(荧光光谱)固定激发光波长ex,依次改变发射波长em,测荧光强度F,以F-em作图得荧光光谱。荧光分光光度计光源激发分光系统I0ex样品池发射分
2、光系统em检测器IF荧光分析法 基于荧光特殊的性质,通过分子荧光分光光度计可将荧光现象转换为荧光光谱,并根据荧光光谱能够实现对物质的定性和定量分析,所建立的分析方法,称之为荧光分析法。荧光分析法 先通过荧光分光光度计测得未添加待测目标物时溶液的荧光强度 F0,然后再加入待测目标物溶液(加入后目标物浓度为 C),并测得溶液的荧光强度为F。根据 Stern-Volmer 定律可以得出荧光强度 F 与待测目标物浓度 C 存在线性关系。0=1荧光分析法机理荧光检测机理荧光共振能量转移(FRET)分子内电荷转移(ICT)光致电子转移(PET)荧光共振能量转移(FRET)荧光共振能量转移(FRET)是荧光
3、传感器中能量供体和能量受体之间,通过偶极偶极耦合作用发生的能量转移过程。分子内电荷转移(ICT)在基于 ICT 荧光传感器中,荧光基团分别连接了一个强的推电子基团和一个强的吸电子基团。体系被光激发后产生的电荷会从推电子基团向吸电子基团的转移。光致电子转移(PET)光致电子转移(PET)在客体不存在的情况下,识别基团在光的激发下可以将其处于最高能级的电子迁移到荧光基团上空出的低能级电子轨道上,荧光基团上被光激发的高能级电子无法回归原低能级轨道,这就造成荧光基团的荧光强度降低或消失。当客体存在时,客体与识别基团结合后束缚住了识别基团上的电子,从而抑制了 PET 过程,使荧光基团的荧光得到恢复。荧光分析法特点灵敏度高:紫外-可见分光光度法的检出限为10-5-10-7 g/ml,而荧光分析法的检出限可达到10-10 g/ml甚至10-12 g/ml。准确度高、选择性好;分析速度快、线性范围宽;操作方便、检测试样用量少。荧光分析法实例氨基钙钛矿量子点荧光检测四环素荧光分析图谱及Stern-Volmer方程拟合荧光检测机理分析
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- 7.2 荧光 分析
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