食品检验检疫学4食品检验检疫新技术幻灯片课件.ppt
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1、第四章第四章 食品检验检疫新技术食品检验检疫新技术 第一节第一节 免疫学检测技术免疫学检测技术1.1.基本概念基本概念抗原:凡能刺激机体产生抗体和致敏淋巴细胞,抗原:凡能刺激机体产生抗体和致敏淋巴细胞,并能与之结合引起特异性免疫反应的物质称并能与之结合引起特异性免疫反应的物质称为抗原。为抗原。抗体:在抗原刺激下产生的,并能与之特异性抗体:在抗原刺激下产生的,并能与之特异性结合的免疫球蛋白。结合的免疫球蛋白。血清学试验:抗原抗体在体外发生的特异性结血清学试验:抗原抗体在体外发生的特异性结合反应、抗原抗体的反应一般都要用血清,合反应、抗原抗体的反应一般都要用血清,故称为血清学试验或血清学反应。故称
2、为血清学试验或血清学反应。精品文档免免疫疫学学检检测测方方法法的的原原理理:是是借借助助抗抗原原和和抗抗体体在在体体外外特特异异性性结结合合后后出出现现的的各各种种现现象象,对对标本中的抗原或抗体进行定量或定性的检测。标本中的抗原或抗体进行定量或定性的检测。精品文档可以作为抗原进行检测的物质分为以下四可以作为抗原进行检测的物质分为以下四类:类:各种微生物及其大分子产物;各种微生物及其大分子产物;生物体内各种大分子物质;生物体内各种大分子物质;人和动物细胞的表面分子;人和动物细胞的表面分子;各种半抗原物质。各种半抗原物质。精品文档酶酶联联免免疫疫吸吸附附试试验验是是在在免免疫疫酶酶技技术术的的基
3、基础础上上发发展展起起来来的的一一种种新新型型的的免免疫疫测测定定技技术术,其其基基本本原原理理是是抗抗体体(抗抗原原)与与酶酶结结合合后后,仍仍能能和和相相应应的的抗抗原原(抗抗体体)发发生生特特异异性性反反应应,将将待待检检测测样样品品事事先先吸吸附附在在固固相相载载体体表表面面称称为为包包被被;加加入入酶酶标标抗抗体体(抗抗原原),酶酶标标抗抗体体(抗抗原原),与与吸吸附附在在固固相相载载体体上上的的相相应应的的抗抗原原(抗抗体体)发发生生特特异异性性反反应应,形形成成酶酶标标记记的的免免疫疫复复合合物物,不不能能被被缓缓冲冲液液洗洗掉掉;当当加加入入酶酶的的底底物物时时,底底物物发发生
4、生化化学学反反应应,呈呈现现颜颜色色变变化化,颜颜色色的的深深浅浅与与待待测测抗抗原原或或抗抗体体的的量量相相关关,借借助助分分光光光光度度计计的的吸吸光光度度计计算算抗抗原原(抗抗体体)的的量量,也可用肉眼定性观察。也可用肉眼定性观察。精品文档抗抗原原抗抗体体的的特特异异性性和和敏敏感感性性,使使得得食食品品在在未未经经分分离离提提取取的的条条件件下下,即即可可进进行行定定量量和和定定性性分分析析,而而一一般般的的化化学学分分析析都都需需要要经经过过分分离离提提取取等等复复杂杂过过程程。近近年年来来,该该项项技技术术主主要要用用于于细细菌菌及及毒毒素素、真真菌菌及及毒毒素素、病病毒毒和和寄寄
5、生生虫虫的的检检测测;用用于于蛋蛋白白质质、激激素素、其其他他生生理理活活性性物物质质、兽兽药药残残留留、农农药药残残留留、抗抗生生素素等等的的检检测。测。精品文档第二节第二节 核酸提取方法与探针技术核酸提取方法与探针技术样品增菌后的核酸提取方法:样品增菌后的核酸提取方法:热裂解法热裂解法反复冻融法反复冻融法酶裂解法酶裂解法微波法微波法化学裂解法化学裂解法超声破碎法超声破碎法精品文档样品无需增菌的核酸提取方法:样品无需增菌的核酸提取方法:IMSIMS法(免疫磁珠法)法(免疫磁珠法)FTAFTA滤膜吸附法滤膜吸附法精品文档病毒核酸的提取:病毒核酸的提取:异异硫硫氰氰酸酸胍胍-SiO2-SiO2法
6、法:异异硫硫氰氰酸酸胍胍可可以以裂裂解解细细胞胞壁壁,并并灭灭活活核核酸酸酶酶,释释放放出出来来的的核核酸酸被被经经处处理理的的SiO2SiO2所所吸吸附附,从而达到纯化目的。从而达到纯化目的。Glycine-PEG-Tri-reagent-poly(dT)Glycine-PEG-Tri-reagent-poly(dT)法法:通通过过调调节节PHPH和和PEGPEG沉淀核酸,再用沉淀核酸,再用poly(dT)poly(dT)纯化核酸。纯化核酸。精品文档探针的标记物分类:探针的标记物分类:放射性同位素放射性同位素非放射性标记物:是通过酶促反应将特定的非放射性标记物:是通过酶促反应将特定的底物转变
7、为声色物质或化学发光物而达到放大底物转变为声色物质或化学发光物而达到放大信号的目的。常用的标记物金属、荧光染料、信号的目的。常用的标记物金属、荧光染料、地高辛、生物素和酶等,可通过酶促反应、光地高辛、生物素和酶等,可通过酶促反应、光促反应或化学修饰等方法标记到核酸分子上。促反应或化学修饰等方法标记到核酸分子上。探针技术探针技术精品文档探针的标记方法:探针的标记方法:缺口平移法缺口平移法随机引物法随机引物法末端标记法末端标记法PCRPCR标记法标记法精品文档第三节第三节 PCR PCR检测技术检测技术PCRPCR即聚合酶链反应的简称。即聚合酶链反应的简称。PCR PCR是在体外是在体外模拟模拟D
8、NADNA复制的过程,在体外合适的条件下以复制的过程,在体外合适的条件下以单链单链DNADNA为模板,以人工设计和合成的寡核苷为模板,以人工设计和合成的寡核苷酸为引物,利用热稳定的酸为引物,利用热稳定的DNADNA聚合酶延聚合酶延5-35-3方向渗入单核苷酸来特异性的扩增方向渗入单核苷酸来特异性的扩增DNADNA片段的片段的技术。整个反应过程通常由技术。整个反应过程通常由20-4020-40个个PCRPCR循环组循环组成,每个循环由变性、退火、延伸三个步骤组成,每个循环由变性、退火、延伸三个步骤组成。成。精品文档PCRPCR的种类:的种类:(1 1)多重)多重PCRPCR(2 2)免疫)免疫P
9、CRPCR(3 3)PCR-SSCP PCR-SSCP分析技术分析技术(4 4)实时荧光定量)实时荧光定量PCRPCR(5 5)反转录)反转录PCRPCR(6 6)不对称)不对称PCRPCR(7 7)反向)反向PCRPCR精品文档PCRPCR检测技术的应用:检测技术的应用:(1 1)检测产单核细胞李斯特菌)检测产单核细胞李斯特菌(2 2)检测金黄色葡萄球菌)检测金黄色葡萄球菌(3 3)检测沙门氏菌)检测沙门氏菌(4 4)检测致泻大肠杆菌)检测致泻大肠杆菌精品文档第四节第四节 基因芯片技术基因芯片技术基因芯片又称基因芯片又称DNADNA微阵列,是指由按微阵列,是指由按照预定位置固定在固相载体上很
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