牛隐孢子虫的检测多重聚合酶链反应法地方标准标准编制说明.docx
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1、牛隐抱子虫的检测多重聚合酶链反响法地方标准标准编制说明一、工程的来源和目的隐抱子虫病是一种由隐抱子虫引起的、呈世界性分布的人畜共患 寄生虫病。隐抱子虫主要引起幼龄动物的消化道和呼吸道疾病,导致 其生产性能下降或死亡。对人而言,隐抱子虫主要引起儿童和免疫抑 制病人的腹泻,在艾滋病(AIDS)病人和儿童中感染率分别高达48. 0% 和17. 5%,是艾滋病病人的重要致死因素之一。该病已被列为世界最 常见的腹泻疾病之一。牛隐抱子虫主要通过饲料、饮水等经口传播给 动物,通过牛乳、饮水、蔬菜等食物经口传播给人,常引起爆发性流 行。国内流行病学调查发现,我国奶牛隐抱子虫病的病原体多为微小 隐抱子虫(C p
2、arvum)和安氏隐抱子虫(C andersoni,局部为 混合感染。微小隐抱子虫(经常感染新生犊牛、婴儿和其他幼龄动物 的肠道,导致腹泻和脱水等病症。安氏隐泡子虫感染奶牛后可以引起 奶牛产奶量下降,体质量减轻,是影响奶牛业开展的重要致病因素之 一,亦有少数人体感染病例。我省作为养牛大省,运用分子生物学手 段对在隐抱子虫进行检测方面的研究报道基本是空白,本规程旨在建 立一种能同时快速检测牛隐抱子虫的多重PCR方法,在推广先进的隐 抱子虫病原检测技术,保障我区绿色养牛产业开展和食品安全等方面 具有重要意义。本标准仅涉及与牛相关的隐抱子虫。聚合酶链反响(Polymerase Chain React
3、ion, PCR)是近年开展 起来的一种分子生物学诊断技术,能在数小时内快速检测出痕量的病 原核酸。它具有传统病原别离鉴定和血清学方法所无法比较的特异、 敏感和快速等优势。在兴旺国家,PCR已作为有效的病原检测手段得 到了广泛应用。世界动物卫生组织(OIE)也将PCR方法列为多种动 物病原最为可靠的检测方法之一。多重PCR技术一次反响可以检测多 个基因,比单一 PCR技术更为方便、快捷、经济,减轻了工作量。隐抱子虫形体小,对恶劣环境有较强的抵抗力,无特异性染色, 光学显微镜下缺乏明显特征,少量卵囊足以使人感染,因此建立特 异性强、敏感性高、快速、简捷的多重PCR检测方法是当前隐抱子虫 病防治和
4、流行病学调查工作迫切需要解决的问题之一。为此,省质量技术监督局下达文件关于下达20年XX第十二批 省地方标准制定(制订)工程计划通知(X质监函20XX884号) 附件的编写任务通知,将牛隐抱子虫的检测一多重聚合酶链反响法 省地方标准的编制任务落实到省兽医研究所,接到任务后,省兽医研 究所结合近几年的科研情况和人员情况,成立了以XXX为组长,XXX 等同志为成员的标准编制课题组,负责标准的起草工作。本操作程序 是在充分参考文献资料及实验和生产应用验证的基础上,制订出适合 于临床快速诊断牛微小隐抱子虫和安氏隐抱子虫的检测标准。二、工作概况(一)在检测方法研制方面的工作情况省兽医研究所自20XX年开
5、展国家公益性行业(农业)专项“边 境地区动物疫病预防控制技术体系研究”工程研究以来,在牛隐抱子 虫相关研究上取得了以下研究成果:在省进行牛隐抱子虫流行病学调查,掌握了牛隐狗子虫感染 种类、感染率、宿主易感年龄、感染季节等流行病学资料。 隐抱子虫DNA模板的快速提取:将传统的隐抱子虫DNA提取 方法如冻融法、超声粉碎法、液氮研磨法等与利用粪便基因组DNA提 取试剂盒提取方法做比较,发现粪便基因组DNA提取试剂盒方法简便 快速,易于操作。 安氏隐抱子虫的快速检测:基于ITS-1基因建立的安氏隐泡子 虫快速PCR检测方法,最低检出卵囊量与经典的巢式PCR方法相差无几, 敏感性相似,只需一次扩增即可获
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