免疫学检测技术及其研究进展,免疫学论文.docx
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1、免疫学检测技术及其研究进展,免疫学论文内容摘要:免疫检测技术是一种以抗原抗体特异性辨别和结合为原理对样品中特定的目的物进行定性定量测定的分析方式方法, 其在临床医学、当代生命科学、食品科学、生态学等领域发挥着重要作用。本文主要综述最近几年应用比拟广泛的免疫学检测方式方法及其研究近况。 本文关键词语:免疫学检测,酶标记,荧光素标记,放射免疫 1 免疫荧光技术 免疫荧光技术就是指用荧光色素对目的物标记后, 再对其进行定性定量检测的一种实验技术8。其基本原理就是抗体和抗原发生特异性结合后, 使用荧光显微镜对待测物进行观察和鉴别。其基本操作步骤是先制备荧光标记物 (荧光抗体或抗原) , 即在已经知道的
2、抗体或者抗原上标记上相应的荧光素, 再将这种荧光标记物 (荧光抗体或抗原) 注入到细胞内部作为探针, 当它们进入细胞后即可和细胞内相应的抗原或抗体发生特异性结合, 此时使用荧光显微镜来观察标本能否能发出荧光, 以此来对细胞内相应的抗体或者抗原进行定位和检测6。 在临床应用中免疫荧光技术的作用方式主要有两种, 一种是放射免疫分析法, 另一种是时间分辨免疫荧光分析法。竞争反响是放射免疫分析技术的主要利用原理, 这种检测方式方法曾被人以为是 最具发展潜力的免疫检测技术 9。时间分辨免疫荧光分析法能够对同位素和酶进行标记。另外, 其在试验中所需试剂的存放时间较长, 所需的实验材料制作起来比拟简单, 因
3、而有人将它称为 免疫检测技术中的新成果 10。 随着免疫荧光技术应用范围的不断扩大, 其在免疫学、当代分子生物学、环境科学等领域都有所牵涉11。另外, 免疫荧光技术也在微生物学领域发挥着一定的作用, 有人12已经用免疫荧光技术快速检测葡萄球菌、沙门氏菌、李斯特氏菌等细菌。 2 免疫层析技术 (胶体金免疫层析技术) 免疫层析技术是免疫学上用于检测分析的一种色谱分析方式方法。其利用的是抗原-抗体特异性吸附的原理, 该技术操作简单, 能够在较短的时间内对待测物进行检测。当前在免疫层析技术中, 使用比拟好的有胶体金免疫层析技术13。 胶体金免疫层析技术是一种将层析分析技术、胶体金标记技术、免疫检测技术
4、三者相结合的固相标记免疫检测技术, 其也是将抗原抗体反响和胶体金标记技术有机结合的一种应用形式, 它是借助毛细作用使得以条带状固定在膜上的特异性抗原或抗体发生泳动, 同时使得层析条带上针对待测物的受体 (如抗体或抗原) 与样品中的待测物发生高亲和性、高特异性的免疫反响, 层析反响经过中免疫复合物被截留或者富集在层析条的检测带区域, 最后通过着色标记物或者利用酶促反响快速、直观地检测出待检物质。 胶体金免疫检测技术广泛应用于核酸、杀虫剂、蛋白质、激素、药物和毒素等的检测。如Boyle T14利用胶体金免疫检测技术评价酸奶、巧克力、婴儿配方奶粉、冰淇淋中的葡萄球菌中的肠毒素。 3 酶联免疫吸附技术
5、 酶联免疫吸附技术 (ELISA) 是把酶的高效催化作用与抗原抗体的特异性反响有机结合起来的一种新型的免疫检测技术, 该方式方法既能够检测抗体, 可以以检测抗原15。其基本原理就是先用酶标记抗体, 再进行抗原抗体反响, 最后酶通过分解底物而显色, 根据颜色的深浅来判定待检测的抗原和抗体的含量。ELISA主要有两大类:传统ELISA方式方法和新型ELISA方式方法16。传统ELSIA法有:间接ELISA (I-ELISA) 、固相竞争ELSIA (SC-ELISA) 、间接夹心ELISA (IS-ELISA) 等。新型ELISA法有:单克隆抗体ELISA ( (Mc AbELISA) 17、PT
6、-PCR ELISA、Dot-ELISA18等。 ELISA法具有操作简单、稳定性好、特异性高、可大批量检测样品等优点, 因其检测成本较低, 故比拟合适现场检测, 尤其适用于食品中微量过敏原的检测。吴序栎等人就曾利用双抗体夹心法ELISA以其最低检出限:40ng/ml检测出了食品中虾过敏原蛋白成分19。但是ELISA法也有其一定的局限性, 如抗体制备难、无法进行多残留检测、对构造类的化合物存在一定的穿插反响20, 另外实验结果也会出现假阳性。 4 电化学免疫传感器 电化学免疫传感器7是免疫传感器中种类最多、研究最早、也比拟成熟的一种检测技术。它是将电化学技术与免疫检测技术相结合, 用电化学信号
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