BJS201713饮料、茶叶及相关制品中对乙酰氨基酚等59种化合物的测定.doc
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1、 1 附件 1饮料、茶叶及相关制品中对乙酰氨基酚等 59 种化合物的测定BJS 2017131 范围本方法规定了食品中对乙酰氨基酚等 59 种化合物检测的制样和液相色谱-串联质谱测定方法。本方法适用于饮料、茶叶及相关制品等食品中 59 种化合物单个或多个化合物的定性测定,必要时可参考本方法测定添加成分含量。2 原理试样经甲醇或0.1%甲酸-甲醇超声提取,过滤后,上清液供高效液相色谱-串联质谱检测。3 试剂和材料除特殊注明外,所有试剂均为分析纯,水为符合 GB/T 6682 规定的一级水。3.1 试剂3.1.1 甲醇(CH3OH):色谱纯3.1.2 甲酸(HCOOH):色谱纯3.1.3 乙腈(C
2、H3CN):色谱纯3.1.4 甲酸铵(CHOONH4):色谱纯3.1.5 0.1%甲酸甲醇溶液:取甲酸 1 mL 用甲醇稀释至 1000 mL。3.1.6 5 mmol/L 甲酸铵溶液:称取甲酸铵(3.1.4)0.315g,加水溶解并定容至 1000mL。3.1.7 5 mmol/L 甲酸铵溶液(含 0.1%的甲酸):取甲酸 1mL,称取甲酸铵(3.1.4)0.315g,加水溶解并定容至 1000mL。3.1.8 0.1%甲酸乙腈:取甲酸 1mL,加乙腈稀释至 1000mL。3.2 标准品对乙酰氨基酚、氨基比林、保泰松、地西泮、罗通定、酮洛芬、甲芬那酸、氯唑沙宗、安替比林、异丙安替比林、非那西
3、丁、盐酸苯海拉明、磺胺甲恶唑、甲氧苄啶、氯苯那敏、阿司匹林、布洛芬、安乃近、曲安西龙、泼尼松龙、氢化可的松、泼尼松、可的松、甲基泼尼松龙、倍他米松、地塞米松、氟米松、倍氯米松、曲安奈德、氟氢缩松、曲安西龙双醋酸酯、泼尼松龙醋酸酯、氟米龙、氢化可的松醋酸酯、地夫可特、氟氢可的松醋酸酯、泼尼松醋酸酯、可的松醋酸酯、甲 2 基泼尼松龙醋酸酯、倍他米松醋酸酯、布地奈德、氢化可的松丁酸酯、地塞米松醋酸酯、氟米龙醋酸酯、氢化可的松戊酸酯、曲安奈德醋酸酯、氟轻松醋酸酯、二氟拉松双醋酸酯、倍他米松戊酸酯、泼尼卡酯、哈西奈德、阿氯米松双丙酸酯、安西奈德、氯倍他索丙酸酯、氟替卡松丙酸酯、莫米他松糠酸酯、倍他米松双
4、丙酸酯、倍氯米松双丙酸酯、氯倍他松丁酸酯。上述化合物的中文名称、英文名称、CAS 登录号、分子式、相对分子质量详见附录 A 中的表 A.1,纯度均98%。3.3 标准溶液配制3.3.1 标准储备液(400 g/mL):精密称取各化合物(除阿司匹林外)10 mg 分别于 25 mL 容量瓶中,用甲醇(3.1.1)溶解并稀释至刻度,配制成浓度为 400 g/mL 的标准储备液;精密称取阿司匹林 10 mg 于 25mL 容量瓶中,用 0.1%甲酸甲醇溶液(3.1.5)溶解并稀释至刻度,配制成浓度为 400 g/mL 的标准储备液。3.3.2 混合标准中间液 A(200 ng/mL):分别精密吸取氯
5、苯那敏、氨基比林、罗通定、甲氧苄啶、非那西丁、苯海拉明、异丙安替比林、氟米龙醋酸酯、安替比林、磺胺甲恶唑、甲基泼尼松龙、曲安奈德、曲安西龙双醋酸酯、布地奈德、曲安奈德醋酸酯、倍他米松戊酸酯、地西泮、保泰松、泼尼卡酯、氯倍他索丙酸酯、倍他米松双丙酸酯、倍氯米松双丙酸酯标准储备液(400 g/mL)(3.3.1)各 0.05 mL,置于同一 100 mL 容量瓶中,用甲醇(3.1.1)稀释并定容至刻度,摇匀,制成浓度为 200 ng/mL 的标准使用液。3.3.3 混合标准中间液 B(500 ng/mL):分别精密吸取泼尼松龙醋酸酯、氟轻松醋酸酯、二氟拉松双醋酸酯、安西奈德、阿氯米松双丙酸酯、氟替
6、卡松丙酸酯、莫米他松糠酸酯、氯倍他松丁酸酯、对乙酰氨基酚、泼尼松龙、可的松、倍他米松、地塞米松、氢化可的松丁酸酯、氢化可的松戊酸酯标准储备液(400 g/mL) (3.3.1)各 0.125 mL,置于同一 100 mL 容量瓶中,用甲醇(3.1.1)稀释并定容至刻度,制成浓度为 500 ng/mL 的标准使用溶液。3.3.4 混合标准中间液 C(1 g/mL):分别精密吸取泼尼松、氢化可的松、氟米松、倍氯米松、酮洛芬、氢化可的松醋酸酯、氟米龙、地夫可特、泼尼松醋酸酯、可的松醋酸酯、甲基泼尼松龙醋酸酯、倍他米松醋酸酯、地塞米松醋酸酯、甲芬那酸标准储备液(400g/mL) (3.3.1)各 0.
7、25 mL,置于同一 100 mL 容量瓶中,用甲醇(3.1.1)稀释并定容至刻度,摇匀,制成浓度为 1 g/mL 的标准使用溶液。3.3.5 混合标准中间液 D(5 g/mL):分别精密吸取氟氢可的松醋酸酯、曲安西龙、氟氢缩松、哈西奈德、安乃近、布洛芬、氯唑沙宗标准储备液(400 g/mL) (3.3.1)各 1.25 mL,置于同一100 mL 容量瓶中,用甲醇稀释并定容至刻度,摇匀,制成浓度为 5 g/mL 的标准使用溶液。精密吸取阿司匹林标准储备液(400g/mL) (3.3.1)1.25 mL,置于 100 mL 容量瓶中,用 0.1%甲酸甲醇溶液(3.1.5)稀释并定容至刻度,摇匀
8、,单独制成浓度为 5 g/mL 的标准使用溶液。3.3.6 混合标准工作溶液:分别准确吸取混合标准中间液 A(3.3.2) 、混合标准中间 B(3.3.3) 、 3 混合标准中间液 C(3.3.4)和混合标准中间液 D(3.3.5)适量,用甲醇(3.1.1)稀释,摇匀,作为系列标准工作溶液 S1S5,浓度依次为混合标准中间液 A 中各化合物 2 ng/mL、4 ng/mL、8 ng/mL、12 ng/ mL、20 ng/ mL;混合标准中间液 B 中各化合物 5 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL、30 ng/mL、50 ng/mL;混合标准中间液 C 中各化合物 10 ng/mL
9、、20 ng/mL、40 ng/mL、60 ng/mL、100 ng/mL 及混合标准中间液 D 中各化合物 50 ng/mL、100 ng/mL、200 ng/mL、300 ng/mL、500 ng/mL,临用新配或依仪器响应情况配制适当浓度的混合标准工作溶液。阿司匹林标准曲线需单独用 0.1%甲酸甲醇(3.1.5)溶液配制,浓度为 50 ng/mL、100 ng/mL、200 ng/mL、300 ng/mL、500 ng/mL。4 仪器和设备4.1 液相色谱-串联质谱法:配电喷雾离子源。4.2 分析天平:感量 0.01 mg 和 0.000 1 g。4.3 涡旋振荡器。4.4 超声仪。5
10、分析步骤5.1 试样的制备测定阿司匹林用样液:称取研磨后混匀的代用茶、茶叶或摇匀的液体饮料 1g(精确至0.0001g) ,置于 50 mL 量瓶中,加入 0.1%甲酸甲醇溶液(3.1.5)约 40 mL,涡旋 2 min,超声 30 min,放冷至室温,用 0.1%甲酸甲醇溶液定容至刻度,摇匀,过微孔滤膜(0.22m,尼龙膜) ,取滤液,根据实际浓度适当稀释至标准曲线线性范围内,供液相色谱-质谱联用仪分析。除不加试样外,均按试样同法操作,作为空白溶液。测定其他化合物用样液:称取研磨后混匀的代用茶、茶叶或摇匀的液体饮料 1g(精确至0.0001g) ,置于 50 mL 量瓶中,加入甲醇(3.1
11、.1)约 40 mL,涡旋 2 min,超声 30 min,放冷至室温,用甲醇定容至刻度,摇匀,过微孔滤膜(0.22m,尼龙膜) ,取滤液,根据实际浓度适当稀释至标准曲线线性范围内,供液相色谱-质谱联用仪分析。除不加试样外,均按试样同法操作,作为空白溶液。供测定用样液应在制备后 12 小时内进样。5.2 仪器参考条件5.2.1 色谱条件5.2.1.1 正模式a)色谱柱:Acclaim RSLC C18 (2.1100 mm,2.2 m),或性能相当者。b) 流动相:5 mmol/L 甲酸铵溶液(含 0.1%的甲酸) (3.1.7) ;B 相:0.1%甲酸乙腈(3.1.8) ,梯度洗脱程序见表
12、1。 4 c) 流速:0.3 mL/min。d) 柱温:30 。e) 进样量:2 L。f) 运行时间:35 min。 表 1 梯度洗脱 TIMEA/%B/% 0955 1955 176337 271585 28595 31595 32955 359555.2.1.2 负模式a)色谱柱:Acclaim RSLC C18 (2.1100 mm,2.2 m),或性能相当者。b)流动相:A 相:5 mmol/L 甲酸铵溶液(3.1.6) ;B 相:乙腈(3.1.3) ,梯度洗脱程序见表 2。c)柱温:30 。d)流速:0.3 mL/min。e)进样量:2 L。f) 运行时间:16 min。 表 2 梯
13、度洗脱 TIMEA/%B/% 0955 1955 11595 13595 14955 169555.2.2 质谱条件a) 离子源:电喷雾离子源(ESI)b) 扫描方式:多反应监测模式(MRM)c) 干燥气、雾化气、鞘气等均为高纯氮气或其他合适气体,使用前应调节相应参数使质谱灵敏度达到检测要求,毛细管电压、干燥气温度、鞘气温度、鞘气流量、碰撞能量等参数应优化至最佳灵敏度,监测离子对和定量离子对等信息详见附录 B。注:(1)方法提供的监测离子对等测定条件为推荐条件,各实验室可根据所配置仪器的具体情况作出适当调整;在样品基质有测定干扰的情况下,可选用其他监测离子对。 5 (2)为提高检测灵敏度,可根
14、据保留时间分段监测各化合物。5.3 定性测定按照高效液相色谱-串联质谱条件测定试样和标准工作溶液,记录试样和标准溶液中各化合物的色谱保留时间,以相对于最强离子丰度的百分比作为定性离子对的相对丰度,记录浓度相当的试样与标准工作溶液中相应成分的相对离子丰度。当试样中检出与 59 种化合物中某标准品质量色谱峰保留时间一致的色谱峰(变化范围在2.5%之内) ,并且相对离子丰度(k)允许偏差不超过表 3 规定的范围,可以确定试样中检出相应化合物。 表 3 定性时供试品溶液中离子相对丰度的允许偏差范围相对丰度(%)最大允许偏差(%)k50%2050%k20%2520%k10%30k10%505.4 定量测
15、定5.4.1 标准曲线的制作将混合标准工作溶液(3.3.6)分别按仪器参考条件(5.2)进行测定,得到相应的标准溶液的色谱峰面积。以混合标准工作溶液的浓度为横坐标,以色谱峰的峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。5.4.2 试样溶液的测定将试样溶液(5.1)按仪器参考条件(5.2)进行测定,得到相应的样品溶液的色谱峰面积。根据标准曲线得到待测液中组分的浓度。6 结果计算按下式(1)计算试样中待测物的含量:(1)fmVcX1000式中:X 试样中各待测物的含量,单位为毫克每千克( mg/kg) ;c 从标准曲线中读出的 供试品溶液中各待测物的浓度,单位为纳克每毫升( ng /mL) ;V 样液最终定容体
16、积,单位为毫升( mL) ;m 试样溶液所代表的质量,单位为克(g) ;f 稀释倍数;计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留三位有效数 6 字。7 检测方法的灵敏度、精密度7.1 灵敏度当样品取样量为 1 g,定容体积为 50mL 时,本方法中各化合物的定量限如下:安替比林、氨基比林、保泰松、倍氯米松双丙酸酯、倍他米松双丙酸酯、倍他米松戊酸酯、苯海拉明、布地奈德、地西泮、非那西丁、氟米龙醋酸酯、磺胺甲恶唑、甲基泼尼松龙、甲氧苄啶、罗通定、氯倍他索丙酸酯、氯苯那敏、泼尼卡酯、曲安奈德、曲安奈德醋酸酯、曲安西龙双醋酸酯、异丙安替比林定量限为 0.1mg/kg;泼尼松
17、龙醋酸酯、氟轻松醋酸酯、二氟拉松双醋酸酯、阿氯米松双丙酸酯、安西奈德、氟替卡松丙酸酯、莫米他松糠酸酯、氯倍他松丁酸酯、对乙酰氨基酚、泼尼松龙、可的松、倍他米松、地塞米松、氢化可的松丁酸酯、氢化可的松戊酸酯定量限为 0.25mg/kg;氢化可的松、泼尼松、氟米松、倍氯米松、酮洛芬、氟米龙、氢化可的松醋酸酯、地夫可特、泼尼松醋酸酯、可的松醋酸酯、甲基泼尼松龙醋酸酯、倍他米松醋酸酯、地塞米松醋酸酯、甲芬那酸定量限为 0.5mg/kg;曲安西龙、氟氢缩松、氟氢可的松醋酸酯、哈西奈德、阿司匹林、布洛芬、氯唑沙宗、安乃近定量限为 2.5mg/kg。7.2 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差
18、值不得超过算术平均值的 15%。 7 附录 A 59 种化合物的相关信息表 A.1 59 种解热镇痛类化合物中文名称、英文名称、CAS 登录号、分子式、相对分子质量 序号化合物名称英文名称CAS 登录 号分子式相对分子质量 1对乙酰氨基酚4-Acetamadophenol103-90-2C8H9NO2151.1 2氨基比林Aminophenazone58-15-1C13H17N3O231.1 3甲氧苄啶Trimethoprim738-70-5C14H18N4O3290.1 4安替比林Antipyrine60-80-0C11H12N2O188.1 5磺胺甲恶唑Sulfamethoxazole72
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