水中细菌总数测定.pptx
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1、(一)实验目的(一)实验目的(二)实验原理(二)实验原理(三)实验器材(三)实验器材(四)实验方法(四)实验方法(五)实验作业(五)实验作业培 养 基 的 制 备 与 灭 菌第1页/共27页(一)实验目的(一)实验目的1、明确培养基的配制原则;2、掌握配制培养基的一般方法和步骤;3、了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围;4、掌握高压蒸汽灭菌技术,了解几种常用灭菌方法。第2页/共27页(二)实验原理(二)实验原理 培养基是按照微生物生长繁殖或积累代谢产物所需的各种营养物质,用人工方法配制而成的一种基质。它包括碳源、氮源、能源、生长因子、无机盐和水六类营养要素。由于不同微生物细胞组成不同,因而所需
2、营养基质不同,为了分离、培养和鉴定不同的微生物,必须根据其需要,配制合适的培养基.培养基的种类繁多,根据培养基的成分、物理性状不同,可分为天然培养基、合成培养基、半合成培养基、固体培养基、半固体培养基和液体培养基。第3页/共27页常用加热灭菌法:1、干热灭菌:用火焰烧灼或电热干燥箱内高温热空气灭菌2、湿热灭菌 高压蒸汽灭菌法 间歇灭菌法 煮沸消毒法 灭菌是指应用物理或化学的方法,杀灭物体表面和内部一切微生物营养体、芽孢和孢子。灭菌方法很多,可分为加热、过滤、照射和化学药品法等。第4页/共27页(三)实验器材(三)实验器材1.药品和试剂:药品和试剂:牛肉膏、蛋白胨、牛肉膏、蛋白胨、NaClNaC
3、l、1010NaOHNaOH溶液、溶液、1010盐酸溶液。盐酸溶液。2.器材:器材:天平、药匙、瓷缸、玻璃棒、电炉、天平、药匙、瓷缸、玻璃棒、电炉、PHPH试纸、试管、三角瓶、分装漏斗、牛皮纸、试纸、试管、三角瓶、分装漏斗、牛皮纸、棉花、线绳、干燥箱、高压锅。棉花、线绳、干燥箱、高压锅。第5页/共27页1.1.称量称量按照培养基配方,准确称量各成份放于瓷缸中。按照培养基配方,准确称量各成份放于瓷缸中。配方:牛肉膏配方:牛肉膏5.0g,5.0g,蛋白胨蛋白胨10.0g10.0g,NaCl5.0g,NaCl5.0g,琼琼脂脂20.0g,20.0g,蒸馏水蒸馏水1000ml,pH7.01000ml,
4、pH7.0。(四)实验方法 培养基的制备过程称量-溶解-调节pH值-过滤-分装及包扎-灭菌-灭菌后试管摆放斜面第6页/共27页2.2.溶解溶解向上述瓷缸中加入所需要的水量,搅拌,加热使向上述瓷缸中加入所需要的水量,搅拌,加热使其溶解。如是配制固体培养基,在琼脂的熔化过其溶解。如是配制固体培养基,在琼脂的熔化过程中,需不断搅拌,并控制火力不要使培养基溢程中,需不断搅拌,并控制火力不要使培养基溢出或烧焦。待完全熔化后,补足所失水分。出或烧焦。待完全熔化后,补足所失水分。3.3.调节调节pHpH值值用玻璃棒沾少许液体,测量用玻璃棒沾少许液体,测量PHPH值。用氢氧化钠值。用氢氧化钠和盐酸调节和盐酸调
5、节PHPH。第7页/共27页4.4.过滤过滤用滤纸或多层纱布过滤,一般无特殊要求可用滤纸或多层纱布过滤,一般无特殊要求可省去。省去。5.5.分装及包扎分装及包扎根据不同的需要,可将制好的培养基分装入根据不同的需要,可将制好的培养基分装入试管内(用分装漏斗)或三角瓶内,管(瓶)试管内(用分装漏斗)或三角瓶内,管(瓶)口塞上棉塞。最后用牛皮纸将棉塞部分包好。口塞上棉塞。最后用牛皮纸将棉塞部分包好。第8页/共27页6.6.灭菌:灭菌:高压蒸汽灭菌,高压蒸汽灭菌,1211210 0C C灭菌灭菌2020分钟。分钟。第9页/共27页7.灭菌后试管摆放斜面第10页/共27页第11页/共27页第12页/共2
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