超速离心-高效液相色谱测定血清高密度脂蛋白和低密度脂蛋白胆固醇:一种候选参考方法.ppt
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1、超速离心超速离心-高效液相色谱测定血清高密度脂蛋白高效液相色谱测定血清高密度脂蛋白和低密度脂蛋白胆固醇:一种候选参考方法和低密度脂蛋白胆固醇:一种候选参考方法董军董军 国汉邦国汉邦 陈文祥陈文祥卫生部老年医学研究所卫生部老年医学研究所 HDL-CHDL-C降低降低 和和LDL-CLDL-C升高,是明确的心血管病独立危险因素升高,是明确的心血管病独立危险因素 心血管病防治工作需要准确的心血管病防治工作需要准确的HDL-CHDL-C和和LDL-CLDL-C测定结果测定结果 建立和保证建立和保证HDL-CHDL-C和和LDL-CLDL-C常规测定结果的准确性需要常规测定结果的准确性需要 可靠的参考方
2、法可靠的参考方法HDL-C HDL-C 和和LDL-CLDL-C准确测定准确测定 必要性必要性美国疾病控制与预防中心美国疾病控制与预防中心(CDC)定量法定量法D=1.006超速离心分离极低密度脂蛋白(超速离心分离极低密度脂蛋白(VLDL),),制备底部组分(制备底部组分(BF)(包括包括IDL,LDL,HDL和和Lp(a)等)等)用肝素用肝素-锰离子试剂沉淀锰离子试剂沉淀BF中的中的 脂蛋白,制备脂蛋白,制备HDL组分组分分别用分别用AK胆固醇参考方法测定胆固醇参考方法测定BF胆固醇胆固醇(BFC)和和HDLC,自自BFC中减去中减去HDLC得得LDL-C(包括包括IDL和和Lp(a)样品量
3、大样品量大(5mL),其应用受到可得样品量限制其应用受到可得样品量限制LDL和和HDL的分离采用化学沉淀法,影响因素较多的分离采用化学沉淀法,影响因素较多样品制备需多部手工容量操作,费时,技术要求高样品制备需多部手工容量操作,费时,技术要求高受超速离心转头品种的限制,每次分析最多受超速离心转头品种的限制,每次分析最多18个样品个样品由于脂蛋白的不稳定性,样品制备过程(约需由于脂蛋白的不稳定性,样品制备过程(约需24-28小时)小时)本身造成本身造成HDL-C和和LDL-C的变化的变化-定量法存在的问题定量法存在的问题血清脂蛋白胆固醇的体外再分布血清脂蛋白胆固醇的体外再分布超速离心法超速离心法:
4、各类脂蛋白的定义方法,在分析化学上可能各类脂蛋白的定义方法,在分析化学上可能也是最可靠的脂蛋白分离方法,是一种物理分离方法,也是最可靠的脂蛋白分离方法,是一种物理分离方法,影响因素最少。影响因素最少。电泳法电泳法:很难用于精密脂蛋白分析。很难用于精密脂蛋白分析。沉淀法沉淀法:沉淀剂和沉淀条件多种多样,影响因素多,沉淀剂和沉淀条件多种多样,影响因素多,较难实现一致的特异性。较难实现一致的特异性。脂蛋白的分离方法脂蛋白的分离方法超速离心中的定量操作困难、繁琐,样品量大超速离心中的定量操作困难、繁琐,样品量大部分部分Lp(a)在在HDL密度范围内,造成密度范围内,造成HDL测定偏差测定偏差超速离心法
5、(结合精密胆固醇分析)超速离心法(结合精密胆固醇分析)参考方法参考方法血清脂蛋白的密度分布血清脂蛋白的密度分布LDLHDLVLDLLp(a)Lp(a)是二硫键连接的是二硫键连接的LDL-apo(a)复和体,还原剂复和体,还原剂可使可使Lp(a)解离为解离为LDLLp(a-)和和apo(a).Lp(a-)密度与密度与LDL相近,或略小于相近,或略小于LDL.若能建立条件,使若能建立条件,使Lp(a)解离,又不改变解离,又不改变HDL的密度的密度性质,则可实现性质,则可实现HDL的超速离心分离的超速离心分离.Lp(a)LDL-apo(a)复合体复合体不同密度下不同密度下ME对超速离心对超速离心BF
6、C的影响的影响ME对血清脂蛋白密度的影响对血清脂蛋白密度的影响样品溶液中样品溶液中ME浓度对浓度对1.063密度下超速离心密度下超速离心BFC的影响的影响取来自不同个体的血清取来自不同个体的血清49份份在在1.063背景密度及背景密度及ME(0.05mol/L)存在和不存在下存在和不存在下超速离心,测定超速离心,测定BFC(BFC1.063ME(+)和和BFC1.063ME(-))用免疫比浊法测定用免疫比浊法测定Lp(a)质量质量用用DCM测定测定HDLC(HDLCDCM)ME解离解离Lp(a)有效性有效性BFC1.063ME(-)与与BFC1.063ME(+)之差与之差与Lp(a)的关系的关
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