医学专题一分光光度法血糖实习.ppt
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1、 p31实验四实验四 分光分光(fn un)光度技术与光度技术与 葡萄糖氧化酶法测定血糖葡萄糖氧化酶法测定血糖第一页,共二十四页。一、分光一、分光(fn un)光度法光度法 分光分光(fn un)光度法是根据不同物质对于光度法是根据不同物质对于不同不同波长的光波具有选择性吸收的光学特性,建波长的光波具有选择性吸收的光学特性,建立起来的分析方法。立起来的分析方法。(一)分光(一)分光(fn un)光度法的依据光度法的依据第二页,共二十四页。I0It溶液溶液(rngy)当一定波长的光线通过某种当一定波长的光线通过某种透明介质透明介质时,时,其中一部分光可透过其中一部分光可透过(tu u),一部分光
2、被吸收,这种,一部分光被吸收,这种某种溶液对一定波长的光的某种溶液对一定波长的光的吸收特性吸收特性可用于该物可用于该物质的质的定性和定量分析定性和定量分析。第三页,共二十四页。分光分光(fn un)光度计可获得光度计可获得单色光单色光 分光光度计利用棱镜或光栅取得分光光度计利用棱镜或光栅取得(qd)波长范围波长范围为几个为几个nm甚至更窄的单色光。甚至更窄的单色光。第四页,共二十四页。测定的时候需选择不同测定的时候需选择不同(b tn)物质物质最大吸收峰所对应的波长最大吸收峰所对应的波长波长波长(bchng)(nm)光光吸吸收收值值最大吸收最大吸收(xshu)峰峰第五页,共二十四页。分光分光(
3、fn un)光度计的优点光度计的优点 分光光度法的灵敏度、准确度及选择性分光光度法的灵敏度、准确度及选择性都很高,是一种最常用的灵敏、精确、都很高,是一种最常用的灵敏、精确、快速快速(kui s)和简便的分析方法。和简便的分析方法。第六页,共二十四页。不同分光光度计的波长不同分光光度计的波长(bchng)范围范围紫外光紫外光(200-400nm)可见光可见光(400-760nm)红外光红外光(760nm-30m)第七页,共二十四页。(二)分光(二)分光(fn un)光度法原理光度法原理 Lambert-beer定律,该定律阐明定律,该定律阐明(chnmng)了了溶液对单色光吸收的多少与溶液浓度
4、及液层厚溶液对单色光吸收的多少与溶液浓度及液层厚度的乘积成正比关系。度的乘积成正比关系。I0Itlg=KCL第八页,共二十四页。I0Itlg:光密度(光密度(O.D.),或称吸光度),或称吸光度(gungd)(gungd)(A)I0:入射光强度入射光强度(qingd)It:透过:透过(tu u)光强度光强度K:吸光系数,它与该物质吸收光能力有关:吸光系数,它与该物质吸收光能力有关I0Itlg=KCLC:溶液浓度:溶液浓度(mol/L)L:液层厚度:液层厚度(cm)第九页,共二十四页。(三)分光光度法计算待测溶液浓度(三)分光光度法计算待测溶液浓度(nngd)的方法的方法1 1、利用、利用(ly
5、ng)(lyng)标准溶液测定溶液的浓度标准溶液测定溶液的浓度A标标=KC标标LA样样=KC样样LA标标A样样C标标C样样第十页,共二十四页。2 2、利用标准、利用标准(biozhn)(biozhn)曲线求得待测溶液的浓度曲线求得待测溶液的浓度标准曲线的制作:标准曲线的制作:先配制一系列已知不同浓度的测定物标准溶先配制一系列已知不同浓度的测定物标准溶液,按测定管显色液,按测定管显色(xin s),分别读取各管光密度,分别读取各管光密度,以各管光密度为纵坐标,各管浓度为横坐标,以各管光密度为纵坐标,各管浓度为横坐标,作图得标准曲线。作图得标准曲线。第十一页,共二十四页。浓度浓度(nngd)吸吸光
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- 医学 专题 分光光度法 血糖 实习
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