辽宁省地方标准编制说明.docx
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1、辽宁省地方标准编制说明标准名称:鹿冷冻精液生产技术规程起草单位:桓仁强风鹿业科研繁育基地辽宁省参茸产品质量监督检验中心桓仁满族自治县重点产业发展服务中心编制日期:20制年5月 好,并把头部稍垫起,拉出舌头,以防食物倒流和呼吸不畅;四 肢用木棒和麻绳固定。处置。戴好一次性长臂手套,涂上凡士林先掏净直肠内宿 粪,再用生理盐水清洗直肠。剪去尿道口周围长毛,用清水冲洗 尿道口周围及包皮内污垢,再用生理盐水清洁尿道口。用手导出 阴茎并用灭菌纱布将龟头下端阴茎缠绕住(不要包过紧),使龟 头露出,再次用生理盐水冲洗,然后用灭菌纱布擦干阴茎及龟头。采集精液。采精前调试好采精器,将集精杯底层加满水并 保持水温3
2、52备用。公鹿采精需要两个人密切配合,一人操作 采精器手持电极棒,一人手握阴茎和集精杯。电刺激采精操作程 序:将涂抹润滑剂的电极棒由肛门慢慢插入直肠内,深度15cm 20cm,使电极紧贴直肠底壁精囊腺。先将电压调至“0”位,打 开电源开关,刺激电压从2V开始由低向高,每次增加1档,在 每档通、断交替刺激23次,每次通电3s,间断2s,直至射精。 从开始射精后,每隔通断电1次更换1次集精杯,直至射精结 束。在电刺激采精的同时,最好能对公鹿的阴茎辅以按摩。采精 员蹲于公鹿腹侧,左手把握阴茎,右手把持集精杯略向上倾斜包 住龟头接取精液。采精结束后将采精器旋钮归“0”,然后拔出 电极棒,公鹿注射苏醒药
3、使其苏醒。采精频率合理安排采精频率既能最大限度地发挥种公鹿的利用率,也 能维持公鹿健康,增加使用年限。采精频率根据鹿的年龄和体况 等来确定。繁殖期内,成年公鹿宜每隔一周采精1次;青年公鹿 宜每两周采精1次。6.精液品质评定该条款是本标准的主要内容,着重介绍了精液品质评定的方 法。精液品质评定的目的是鉴别精液品质的优劣,评定的各项指 标是确定精液稀释、保存的依据。条款内容为:外观检查外观检查是评定精液质量的首要指标,外观检查不合格的精 液不能使用。外观检查主要是对精液色泽、气味以及是否含有脓 性分泌物等的检查。正常情况下,精液为乳白色或淡黄色,略带 腥味。精液量测定目前国内都采用目测法,用肉眼直
4、接观看量筒上刻度(精确 到0.1mL)读取数量值。量筒要经过计量部门检测合格。精子活力和精子畸形率评定活力是判断精液质量的一项重要指标。取精液样品在37环境温度中在显微镜下检查评定,评定方法参见NY/T 1234- 2018中7.5的规定。精子活力评定和精子畸形率评定同时进行。精子密度测定精子密度也是评定精液品质的一项重要指标。精液密度测定使用精子密度测定仪器。推荐使用法国IMV卡苏公司ACCUREAD 密度仪,使用简便、精确度高、密度直接读取。目前国内鹿冷 冻精液生产没有专用的精子密度测定仪设备,主要靠操作者凭经 验估算,这种方法即不科学、也不准确,是导致鹿冻精质量参差 不齐的主要原因之一。
5、精液评价及处理只有外观正常,鲜精活力大于等于60%、畸形率小于等于 15%、密度大于等于6亿/mL的精液进行稀释,任何一项指标不 合格的精液应废弃处理。7.精液稀释该条款着重介绍了精液稀释液量的计算和精液稀释方法。只 有经过稀释的精液,才能进行冷冻、保存和运输,所以精液的稀 释处理是本标准的一个重要技术环节。条款内容为:稀释液量的确定精液稀释主要根据精液的活力、密度、采精量、每个输精剂 量所含有的有效精子数等指标计算。应加入稀释量计算如下:a)生产细管冻精数(支)=精液量(mL) X密度(亿/mL)义预估的冻精活力/每个输精剂量所含有的有效精子数b)稀释总量(mL)=生产细管冻精数(支)X0.
6、 23 (mL)c)应加入稀释液量(mL)=稀释总量(mL) 一精液量(mL)根据a)、b)、c)推导出应加入稀释液量公式如下:Lx Px MV =x0.23-r式中:v稀释液量,单位为毫升(mL);l采精量,单位为毫升(mL);p精液密度,单位为亿个/mL;m冻精解冻后预测的精子活力;z每支细管冻精要求最低有效精子数量,单位为亿个。.23每支细管精液容量,单位为毫升(mL);稀释方法精液稀释应在采精后立即进行。采集后把精液迅速置于32七 水浴锅中,将稀释液和精液都调整到相同温度,以使精液和稀释 液等温稀释。稀释时把稀释液沿着精液容器的壁慢慢加入精液 中,边加入、边搅拌。稀释后静置片刻做活力检
7、查,目的是检查 稀释液是否存在问题。根据使用的稀释液种类,鹿精液稀释采用 一次稀释法,即一次性将稀释液加入精液中至最终稀释量。8.精液的分装与平衡该条款着重介绍了细管标识,精液分装、平衡的方法。条款 内容为:细管标识鹿细管冷冻精液标识参考了 NY 12342018附录D的内容。鹿细管冷冻精液标记由17位数四部分组成,排列顺序如下:第一部分第二部分第三部分第四部分鹿场代号4位数 种鹿品种4位数 种鹿号5位数 生产日期4位数第一部分鹿场代号由种鹿所在单位名称前四个汉字的汉语 拼音的第一个字母组合;第二部分种鹿品种代号由品种名称前四 个汉字的汉语拼音的第一个字母组合;第三部分种鹿号由五位数 组成,公
8、鹿出生年度的后两位组成种鹿号的前二位,种鹿场内编 号组成种鹿号的后三位,不足三位用“0”代替;第四部分生产 日期由年度的四位数组成。部分之间空一个汉字,标记清晰易认。标记示例:HRQF XFWH 18003 2020 |棉塞端封口端HRQF为桓仁强风鹿业科研繁育基地代号;XFMH为西丰梅花 鹿品种代号;18003为2018年出生的种公鹿号,场内编号003;2020为2020年的生产日期代号。精液分装人工分装目前国内鹿细管精液生产设备十分简陋,精液分装主要靠人用嘴吸,这种方法很不科学,容易传染疾病。正确的方法是精液 稀释lOmin后,在22T25T环境条件下,用胶头滴管一支一 支分装,分装后用封
9、口粉(聚乙烯醇粉)封口,封口长度10mm 15mmo棉塞和封口粉要润湿,否则解冻时容易爆塞。人工分装前 细管应事先打印标识。机械分装细管精液分装一体机,是一套在完成灌装与封口后即刻进行 喷墨印字的一体化设备。精液稀释lOmin后,在22P25。(2环 境条件下进行精液的分装、标识和封口。精液平衡精液的降温、平衡是稀释后精子在降温和在低温下的一个适 应过程,这个过程是必须的,至少3h4h。因此,分装后的细 管精液放在塑料盒中或用毛巾包裹,置于52冷藏柜中经lh L5h缓慢降温至5。,再在此温度下经2h3h平衡。9 .精液冷冻该条款是本标准的技术难点,着重介绍了细管精液冷冻的方 法。条款内容为:上
10、架上架是细管精液冷冻前的必要环节。精液冷冻前需要码放在 托架上(托架事先要预冷至与精液相同温度),上架在5C环境 条件下进行,防止温度回升,上架时把棉塞端靠近操作者,封口 端远离操作者,放入冷冻箱时也应如此摆放,这是冷冻完成后, 便于细管棉塞端在下、封口端在上装入拇指管或纱布袋中,避免 以后取用时,因为温差的原因引起细管棉塞的爆脱。冷冻细管精液冷冻分为人工冷冻和自动冷冻,人工冷冻使用简易 冷冻箱,自动冷冻使用由计算机控制的冷冻仪。目前国内鹿细管 精液全部使用简易冷冻箱冷冻,如果操作得当,使用简易冷冻箱 冷冻细管精液也能取得理想的效果。简易冷冻箱2020年10月,桓仁强风鹿业科研繁育基地使用简易
11、冷冻箱 开展了鹿细管精液冷冻技术研究。a)试验材料:精液来源于本场种公鹿,选择种公鹿3只,每 隔一周采精1次,共3次试验;细管、稀释液法国卡苏公司生产; 冷冻装置大型泡沫箱;MCT200测温仪北京宇时技术开发公司。b)试验方法:打开泡沫箱上盖,加入少量液氮预冷,待液氮 面平稳后放入一个空托架,通过增减液氮调整液氮面与托架之间 距离,用直尺测量托架下沿与液氮面之间距离,同时用低温仪测量托架上细管所在位置温度。调整好液氮面后,把已放置细管精 液的托架迅速放入箱内,盖严盖子,当温度降到一140C以下时 完成冷冻过程,打开上盖,取一支精液解冻检查活力。每次冷冻 放一个托架,冷冻数量不超过100支。c)
12、试验结果,见表3:表3不同冷冻温度冷冻细管精液对比注:同列肩标相同小写字母表示无差异(P0. 05),相邻小写字母表示差组别液氮高度cm冷冻温度 冷冻时间 min鲜精活力冻精活力第一组0.5-2一 190 一170560. 800, 120. 400. 03a第二组2. 53 170 1608-100. 750. 090. 580. 06b第三组45一 150 一 13010 120. 750. 050. 430. 04a异显著(P0.05) o结果表明,精液冷冻速率过快、过慢对 冻精质量都有影响,精液只有在适宜的温度下冷冻才能获得理想 的效果。根据上述试验,使用简易冷冻箱冷冻细管精液的操作程
13、序:使用前加入液氮预冷,待液氮面平稳后放入一个空托架,调 整液氮面与托架之间距离,托架下沿与液氮面之间的距离应保持 在2. 5cm3cm,此时精液的冷冻温度为- 17(TC 160o调整好液氮面后,把已放置细管精液的托架迅速放入箱内,盖严盖 子,8min后完成冷冻过程。自动冷冻仪自动冷冻仪是由计算机控制的全自动冷冻容器。根据需要已 设定多条降温、冷冻温度曲线,使用时根据需要选择最佳冷冻温 度曲线,也可以自行编制降温、冷冻曲线(冷冻程序)。使用时, 根据需要设置好最佳冷冻程序,然后按照程控冷冻仪的操作程序 进行冷冻。基本操作程序:首先开启液氮罐阀门把冷冻容器内温 度降至5七预冷,然后关闭风扇电源
14、,待风扇完全停止后,把已 放置细管精液的托架迅速放入冷冻容器内,盖严冷冻容器盖子, 按预先设定好的程序启动冷冻仪,计算机控制自动完成冷冻过 程。10 .冻精活力检查精液冷冻后必须进行活力检查,只有检查合格的精液才能包 装贮存。其过程是精液冷冻完成后,打开冷冻容器上盖,随机抽 取1支冻精迅速浸泡在37C水中并晃动,待细管内的冻精溶解 后取出,擦干水珠,剪去细管两端,弃掉前两滴后取中间任一滴 精液滴于载玻片上,加盖盖玻片后在37。2恒温装置的显微镜上 评定活力。评定方法按照NY/T 12342018中7. 5的规定。解冻 后精子活力应大于等于35% (0.35) o1L冻精包装与贮存(1)冻精包装
15、冻精包装应符合 GB/T 303962013 中 4. 1. 1、4. 1. 2、4. 2 的规定。4. 1. 1拇指管 最多能贮存25支0.25mL细管冻精,注满 液氮后拇指管中的细管精液能全部浸泡在液氮中。4. 1.2 包装袋4. 1.2. 1材料灭菌纱布。缝制 毛边内置,可穿系封口绳。纱布应双层缝 制。规格长度等于170mm、宽度等于55mni,宜装入 四个拇指管,封口绳长度不少于300mni、直径不少于2mm。要求 装入细管冷冻精液后能自然浸泡在液氮 中。4.2要求4. 2. 1细管冷冻精液包装应一14CTC以下的环境中进行,首 先把细管棉塞端朝向拇指管底部装入拇指管,然后再把拇指管底
16、 部朝向包装袋里面装入包装袋。每个拇指管包装数量不得超过25 支;每个包装袋包装数量不得超过100支。用封口绳打一个活结,系牢后放入液氮罐中。一、工作简介错误!未定义书签。(一)任务来源错误!未定义书签。(二)协作单位错误!未定义书签。(三)主要工作过程错误!未定义书签。(四)主要起草人及其所做的工作错误!未定义书签。二、标准编制原则和确定地方标准主要内容的依据 错误!未定义书签。三、主要试验(或验证)的分析报告、相关技术和经济影响论证、预期的经济社会效益错误!未定义书签。(一)主要试验(或验证)的分析报告错误!未定义书签。(-)相关技术和经济影响论证错误!未定义书签。(三)预期的经济社会效益
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