[精选]淀粉酶的固定化生产10104.pptx
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1、微生物发酵工程实验微生物发酵工程实验中南民族大学工商学院中南民族大学工商学院环境与生物工程实验教学中心环境与生物工程实验教学中心1实验四、淀粉酶的固定化生产实验四、淀粉酶的固定化生产 一、实验目的二、实验原理三、实验材料四、实验步骤五、实验结果六、注意事项 七、思考题2 学习细胞固定化的原理,通过海藻酸钠学习细胞固定化的原理,通过海藻酸钠包埋固定产淀粉酶的酵母,掌握菌体包埋固包埋固定产淀粉酶的酵母,掌握菌体包埋固定的基本方法,了解固定化细胞在实际中的定的基本方法,了解固定化细胞在实际中的应用。应用。一、实验目的一、实验目的3细胞固定化技术:细胞固定化技术:固定化细胞就是被限制自由的细胞。即采用
2、固定化细胞就是被限制自由的细胞。即采用物理或化学的方法将细胞固定在载体上或限度在物理或化学的方法将细胞固定在载体上或限度在一定的空间界限内,但细胞仍保留催化活性并能一定的空间界限内,但细胞仍保留催化活性并能反复或连续使用。反复或连续使用。二、实验原理二、实验原理游离细胞游离细胞 固定化细胞固定化细胞4 最令人感兴趣的是固定化增殖细胞,因最令人感兴趣的是固定化增殖细胞,因为多数微生物代谢的产物与其生长相关。为多数微生物代谢的产物与其生长相关。微生物在固定化后以其生长状态可分为微生物在固定化后以其生长状态可分为3类:类:固定化死细胞;固定化死细胞;固定化活细胞(休眠状态);固定化活细胞(休眠状态)
3、;固定化增殖细胞(生长状态)。固定化增殖细胞(生长状态)。5微生物细胞的固定化方法有:微生物细胞的固定化方法有:(1)吸附法,)吸附法,(2)包埋法,)包埋法,(3)不用载体法。)不用载体法。包埋法包埋法67 本实验采用本实验采用凝胶包埋的固定化方法凝胶包埋的固定化方法,把,把酵母细胞悬浮在海藻酸钠溶液中,再滴加入酵母细胞悬浮在海藻酸钠溶液中,再滴加入CaCl2溶液,形成海藻酸钙凝胶小球,细胞溶液,形成海藻酸钙凝胶小球,细胞包埋在凝胶的小孔中,制成固定化细胞。包埋在凝胶的小孔中,制成固定化细胞。8三、实验材料三、实验材料1.酵母菌细胞:酵母菌细胞:面包酵母。面包酵母。2.培养基:培养基:发酵培
4、养基:发酵培养基:葡萄糖:葡萄糖:4%4%;蛋白胨:;蛋白胨:1%1%;磷酸二氢钾:;磷酸二氢钾:0.5%0.5%;七水硫酸镁:;七水硫酸镁:0.2%0.2%酵母膏:酵母膏:0.5%0.5%,pHpH:5.5-6.55.5-6.5。固定化培养基:固定化培养基:淀粉:淀粉:2 2;葡萄糖:;葡萄糖:0.5%0.5%;蛋白胨:;蛋白胨:1%1%;磷酸二氢钾:;磷酸二氢钾:0.5%0.5%;七水硫酸镁:;七水硫酸镁:0.2%0.2%;酵母膏:;酵母膏:0.5%0.5%,pHpH:5.5-6.55.5-6.5。3.3.海藻酸钠溶液及交联剂海藻酸钠溶液及交联剂CaClCaCl2 2溶液。溶液。9四、实验
5、步骤四、实验步骤(一)培养基灭菌(一)培养基灭菌 取取250ml250ml三角瓶,分别放入配好的液体培养基三角瓶,分别放入配好的液体培养基 100ml100ml,灭菌冷却。,灭菌冷却。(二)种子活化和接种(二)种子活化和接种 酵母菌接入培养基,酵母菌接入培养基,25培养活化,取活化后的培养活化,取活化后的酵母菌分别接入已灭菌冷却的三角瓶培养瓶,振荡混酵母菌分别接入已灭菌冷却的三角瓶培养瓶,振荡混匀。匀。10(三)培养(三)培养 将已接种的三角瓶培养液置于振荡培养箱,将已接种的三角瓶培养液置于振荡培养箱,200r/min200r/min,2525培养,离心收获菌体并用无菌水洗涤一培养,离心收获菌
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