T_CAQI 272-2022 茶叶及茶制品中黄曲霉毒素B1的测定.docx
《T_CAQI 272-2022 茶叶及茶制品中黄曲霉毒素B1的测定.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《T_CAQI 272-2022 茶叶及茶制品中黄曲霉毒素B1的测定.docx(15页珍藏版)》请在得力文库 - 分享文档赚钱的网站上搜索。
1、T/CAQI272-2022茶叶及茶制品中黄曲霉毒素B1的测定1范围本文件提供了茶叶及茶制品中黄曲霉毒素B1(以下简称AFTB1)的测定方法。本文件第一法为同位素稀释液相色谱-串联质谱法,第二法为高效液相色谱法,适用于绿茶、红茶、黄茶、黑茶、白茶、乌龙茶、再加工茶、固态速溶茶、茶多酚以及茶黄素中AFTB1的测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅注日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB5009.22食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定GB/T6682分析
2、实验室用水规格和试验方法第一法同位素稀释液相色谱-串联质谱法3原理试样中的黄曲霉毒素B1,用85%乙腈水提取,固相萃取柱和免疫亲和柱净化,液相色谱分离,串联质谱检测,同位素内标法定量。4试剂和材料除非另有规定,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。4.1试剂4.1.1乙腈(CH3CN):色谱纯。4.1.2甲酸(CH2O2):色谱纯。4.1.3氯化钠(NaCl)。4.1.4磷酸氢二钠(Na2HPO4)。4.1.5磷酸二氢钾(KH2PO4)。4.1.6氯化钾(KCl)。4.1.7盐酸(HCl)。4.1.8吐温-20,(C58H114O26)。1T/CAQI272-20224.
3、2试剂配制4.2.185%乙腈水:85mL乙腈(4.1.1)中加入15mL水。4.2.20.1%甲酸水:取1mL甲酸(4.1.2),加水定容至1000mL。4.2.3磷酸盐缓冲溶液(以下简称PBS):称取8.00g氯化钠(4.1.3)、1.20g磷酸氢二钠(4.1.4)、0.20g磷酸二氢钾(4.1.5)、0.20g氯化钾(4.1.6),用900mL水溶解,用盐酸(4.1.7)调节pH至7.40.1,加水稀释至1000mL。4.2.4吐温-20的PBS:取10mL吐温-20(4.1.8),用PBS稀释至1000mL。4.3标准品4.3.1AFTB1标准品(C17H12O6,CAS:1162-6
4、5-8):纯度98%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。4.3.2同位素内标13C17-AFTB1(C17H12O6,CAS:1217449-45-0):纯度98%,浓度为0.5g/mL。注:标准物质可以满足溯源要求的商品化标准溶液。4.4标准溶液配制4.4.1标准储备溶液(10g/mL):准确称取AFTB1(4.3.1)1mg(精确至0.01mg),置于100mL容量瓶,用乙腈(4.1.1)溶解并稀释至刻度,摇匀,制成质量浓度为10g/mL的标准储备液。溶液转移至试剂瓶中后,在-20下避光保存,备用。14.4.2标准中间液(100ng/mL):准确移取AFTB1标准储备溶液1.00m
5、L至100mL容量瓶中,乙腈(4.1.1)定容。此溶液密封后避光-20下保存,有效期三个月。4.4.3同位素内标工作液(100ng/mL):准确移取0.5g/mL13C17-AFTB(4.3.2)2.0mL,用乙腈(4.1.1)定容至10mL。在-20下避光保存,备用,有效期三个月。4.4.4标准工作溶液:准确移取AFTB1(100ng/mL)标准溶液10L、50L、100L、200L、500L、800L、1000L于10mL容量瓶中,加入200L100ng/mL的同位素内标工作液,用初始流动相定容至刻度,配制标准曲线溶液浓度点为:0.1ng/mL、0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.0n
6、g/mL、5.0ng/mL、8.0ng/mL、10.0ng/mL的系列标准溶液。4.5材料4.5.1免疫亲和柱:AFTB1柱容量200ng,回收率85%(对于不同批次的试剂盒在使用前需进行质量验证,验证方法参见GB5009.22附录B)。4.5.2固相萃取柱:6mL,1000mg,含有PSA、C18和MCX等混合填料适用于茶叶样品基质黄曲霉毒素专用型的固相萃取柱。2T/CAQI272-20224.5.3玻璃纤维滤纸:快速、高载量、液体中颗粒保留1.6m。4.5.4微孔滤头:带0.22m有机相微孔滤膜(所选用滤膜应采用标准溶液检验确认无吸附现象,方可使用)。4.5.5筛网:0.85mm试验筛孔径
7、。5仪器设备5.1液相色谱-串联质谱仪:带电喷雾离子源。5.2天平:感量分别为0.01mg和0.01g。5.3涡旋混合器。5.4高速粉碎机。5.5氮吹仪。5.6高速均质器:转速6500r/min24000r/min。5.7离心机:转速6000r/min。5.8pH计。5.9固相萃取装置。6试验步骤警示:整个分析操作过程应在指定区域内进行。该区域应具备相对独立的操作台和废弃物存放装置。在实验过程中,操作者在配制AFTB1标准溶液时应按照接触剧毒物的要求采取相应的保护措施。6.1试样制备试样用高速粉碎机将其粉碎,过筛,使其粒径小于0.85mm孔径试验筛。6.2试样前处理6.2.1提取准确称取5.0
8、g(精确到0.01g)样品于50mL具塞离心管中,加入100L同位素内标工作液(4.4.3),加入20mL85%乙腈水,涡旋混匀,高速均质器均质提取3min,6000r/min离心10min,上清液用玻璃纤维滤纸过滤,滤液待净化。6.2.2净化6.2.2.1固相萃取柱净化固相萃取柱(4.5.2)用5mL85%乙腈水溶液活化,取4mL滤液通过固相萃取柱中,收集净化液,再用5mL85%乙腈水分两次洗脱,流速控制在1mL/min3mL/min,合并净化液。氮吹浓缩至4mL,用吐温-20的PBS缓冲液定容至50mL,混匀,待免疫亲和柱净3时间(min)流动相A(%)流动相B(%)010904.5901
9、06.5109010.01090T/CAQI272-2022化。6.2.2.3免疫亲和柱净化6.2.2.3.1免疫亲和柱的准备将低温下保存的免疫亲和柱(4.5.1)恢复至室温。6.2.2.3.2试样的净化待免疫亲和柱内原有液体流尽后,将上述样液移至50mL注射器筒内,调节下滴速度,控制样液以1mL/min3mL/min的速度稳定下滴。待样液滴完后,往注射器筒内加入10mL水,以稳定流速,淋洗免疫亲和柱,重复淋洗2次。待水滴完后,用真空泵抽干亲和柱。脱离真空系统,在免疫亲和柱下部放置10mL刻度试管,取下50mL注射器筒,分4次分别使用0.5mL乙腈(4.1.1)洗脱亲和柱,控制流速在1mL/m
10、in3mL/min的范围内下滴,再用真空泵抽干亲和柱,收集全部洗脱液至试管中,在50下用氮气缓缓地将洗脱液吹至近干,加入1.0mL初始流动相,涡旋30s溶解残留物,0.22m滤膜过滤,收集滤液于进样瓶中以备进样。6.3仪器测定6.3.1液相色谱参考条件如下:a)色谱柱:C18柱,3.0mm100mm,粒径5.0m,或性能相当者;b)流动相:A为乙腈(4.1.1),B为0.1%甲酸水溶液,梯度洗脱(见表1);c)流速:0.3mL/min;d)柱温:40;e)进样量:10L。表1流动相梯度洗脱程序6.3.2质谱参考条件质谱参考条件列出如下:a)检测方式:多离子反应监测(MRM);b)离子源控制条件
11、:参见表2;c)离子选择参数:参见表3。4电离方式+ESI毛细管电压/kV3.5锥孔电压/V30射频透镜1电压/V14.9射频透镜2电压/V15.1离子源温度/150锥孔反吹气流量/(L/h)50脱溶剂气温度/500脱溶剂气温度/(L/h)800电子倍增电压/V650化合物名称母离子(m/z)定量离子(m/z)碰撞能量eV定性离子(m/z)碰撞能量eV离子化方式AFTB13132852224138+ESI13C17-AFTB13302552330135+ESIT/CAQI272-2022表2离子源控制条件表3离子选择参数表6.3.3定性测定试样中目标化合物色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留
12、时间相比较,变化范围应在2.5之内。每种化合物的质谱定性离子必须出现,至少应包括一个母离子和两个子离子,而且同一检测批次,对同一化合物,样品中目标化合物的两个子离子的相对丰度比与浓度相当的标准溶液相比,其允许偏差不超过表4规定的范围。5相对离子丰度/%502050102010允许相对偏差/%20253050T/CAQI272-2022表4定性时相对离子丰度的最大允许偏差6.3.4标准曲线的制作在6.3.1、6.3.2的液相色谱串联质谱仪分析条件下,将标准系列溶液由低到高浓度进样检测,以AFTB1色谱峰与对应内标色谱峰的峰面积比值-浓度作图,得到标准曲线回归方程,其线性相关系数应大于0.99。6
13、.3.5试样溶液的测定取6.2处理得到的待测溶液进样,内标法计算待测液中目标物质的质量浓度,计算样品中待测物的含量。待测样液中的响应值应在标准曲线线性范围内。6.3.6空白试验不称取试样,按6的试验步骤做空白实验。应确认不含有干扰待测组分的物质。7试验数据处理试样中AFTB1的残留量按式(1)计算。计算公式:X=V1V31000V2m1000(1)式中:X试样中AFTB1的含量,单位为微克每千克(mg/kg);进样溶液中AFTB1按照内标法在标准曲线中对应的浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL);V1试样提取液体积,单位为毫升(mL);V3样品经净化洗脱后的最终定容体积,单位为毫升(mL);10
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- T_CAQI 272-2022 茶叶及茶制品中黄曲霉毒素B1的测定 272 2022 茶叶 制品 中黄 曲霉 毒素 B1 测定
限制150内