血清天门冬氨酸氨基转移酶IFCC方法测定作业指导书.docx
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1、血清天门冬氨酸氨基转移酶IFCC推荐方法测定作业指导书1 .实验原理:国际临床化学学会(IFCC)推荐的紫外连续监测法。L-天门冬氨酸+ a-酮戊二酸 AST草酰乙酸+L-谷氨酸草酰乙酸+ NADH +H1” 勺*果琢+NA -2 .标本:2 . 1病人准备:12小时禁食。3 . 2类型:血清,肝素或EDTA血浆。4 .标本存放:3天内的活性损失:28保存:8%; 1525保存:10%:标本稳定性: -20保存至少可稳定3个月。5 .标本运输:常温条件下保存运输。6 .标本拒收标准:标本溶血、细菌污染的标本。7 .实验材料6. 1试剂:申能AST测定试剂盒(货号:141 26017170 1
2、试剂1:6X64ml;试剂2: 6X16ml )6. 1. 1试剂组成试剂1 (R1):Tris缓冲液pH7. 8L-天门冬氨酸MDH(苹果酸脱氢酶)LDH(乳酸脱氢酶)试剂2(R2):a-酮戊二酸NAD1I磷酸瞰哆醛试剂:Good s 缓冲液 pH9. 6磷酸毗哆醛6. 1.2试剂准备:试剂为即用式。6. 1. 3试剂稳定性与贮存试剂保存于28C,若无污染,80mmo1/L240mmol/L2600U/L600U/L12mmol/L0.18mmol/L0.7mmol/L0.09mmol/L可稳定至失效期。试剂不可冰冻。变质指示:当试剂有看得见的微生物生长,有浊度,或者未开盖的液体有沉淀时,表
3、明试剂已变质,不能继续使用。6. 1.5注意事项:试剂中含叠氮钠(0.95g/L)为防腐剂。不可入口!避免接触皮肤及粘 膜。应采取必要的预防措施使用试剂。6 . 2校准品:使用DiaSys公司提供的TruCal U校准品对自动分析仪进行校准,具体参见 生化检验校准品和质控品.SOP文件。7 . 3质控品:具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。8 .仪器:奥林巴斯AU1OOO生化分析仪9 .操作步骤9.1 项目基本参数:参见生化检验奥林巴斯AU1OOO生化分析仪项目测定参数.SOP文件9.2 仪器操作步骤:参见生化检验奥林巴斯AU1OOO生化分析仪操作规程.SOP文件10 检验结果的判断与
4、分析11 .质量控制:在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分 析,以2S为质控警告限,3S为失控限,绘制质控图,判断是否在控。质控规则参见生化 室室内质控操作规程.SOP文件。12 .计算方法:以TruCal U亚合校准品AST校准值校准仪器后,在病人结果可报告范围 内,仪器直接报告可靠的检测结果。不使用校准品进行AST活力检测,可以直接使用A A/min 均值乘以计算因子得到结果,但是这样所得结果的可靠性不如使用校准品。计算ALT活力 的计算因子见下表:A A/min底物起始的反应(37 )X因子=AST活力U/L样品起始的反应(37 )340nm214317453
5、34nm21841780365nm3971323512.参考值范围不含磷酸毗哆醛含磷酸毗哆醛女性31U/L1035U/L男性37U/L1050U/L参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验,每个实 验室应建立自己的参考值。13 .临床意义丙氨酸氨基转移酶(ALT)旧称谷丙转氨酶(GPT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST)旧 称谷草转氨酶(GOT).它们是氨基转移酶类的典型代表。氨基转移的催化氨基从氨基酸转 移给a-酮酸的反应。ALT是肝脏的特异性酶,仅在肝胆疾病时显著升高。而AST水平的升高和心肌或骨骼 肌损伤,以及肝组织损害等都有关。因此同时进行ALT和AST的检测用
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