重组DNA技术的工具 高二下学期生物人教版(2019)选择性必修3.pptx
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1、一、概念检测1.DNA连接酶是重组DNA技术常用的一种工具酶。下列相关叙述正确的是 A.能连接DNA分子双链碱基对之间的氢键 B.能将单个脱氧核苷酸加到DNA片段的末端,形成磷酸二酯键 C.能连接用同种限制酶切开的两条DNA片段,重新形成磷酸二酯键 D.只能连接双链DNA片段互补的黏性末端,不能连接双链DNA片段的平末端2.在重组DNA技术中,将外源基因送入受体细胞的载体可以是 A.大肠杆菌的质粒 B.切割DNA分子的酶 C.DNA片段的黏性末端 D.用来识别特定基因的DNA探针CA课本P74练习与应用二、拓展应用1.想一想,为什么限制酶不切割细菌本身的DNA分子?细菌中限制酶之所以不切割自身
2、的DNA,是因为含有某种限制酶的细胞的DNA分子不具备这种限制酶的识别序列,或者通过甲基化酶将甲基转移到了限制酶所识别序列的碱基上,使限制酶不能将其切开。这样,尽管细菌中含有某种限制酶,也不会使自身的DNA被切断,并且可以防止外源DNA入侵。课本P74练习与应用2.有2个不同来源的DNA片段A和B,A片段用限制酶SpeI进行切割,B片段分别用限制酶Hind、XbaI、EcoRV和XhoI进行切割。各限制酶的识别序列和切割位点如下。(1)哪种限制酶切割B片段产生的DNA片段能与限制酶SpeI切割A片段产生的DNA片段相连接?为什么?Xba。因为XbaI与SpeI切割产生了相同的黏性末端。课本P7
3、5练习与应用2.有2个不同来源的DNA片段A和B,A片段用限制酶SpeI进行切割,B片段分别用限制酶Hind、XbaI、EcoRV和XhoI进行切割。各限制酶的识别序列和切割位点如下。(1)哪种限制酶切割B片段产生的DNA片段能与限制酶SpeI切割A片段产生的DNA片段相连接?为什么?Xba。因为XbaI与SpeI切割产生了相同的黏性末端。(2)不同的限制酶切割可能产生相同的黏性末端,这在基因工程操作中有什么意义?识别DNA分子中不同核苷酸序列,但能切割产生相同黏性末端的限制酶被称为同尾酶。同尾酶使构建载体时,切割位点的选择范围扩大。例如,我们选择了用某种限制酶切割载体,如果目的基因的核苷酸序
4、列中恰好含有该例如,我们选择了用某种限制酶切割载体,如果目的基因的核苷酸序列中恰好含有该限制酶的识别序列,那么用该限制酶切割含有目的基因的限制酶的识别序列,那么用该限制酶切割含有目的基因的DNADNA片段时,目的基因就很可片段时,目的基因就很可能被切断;这时可以考虑用合适的同尾酶(目的基因的核苷酸序列中不能有它的识别能被切断;这时可以考虑用合适的同尾酶(目的基因的核苷酸序列中不能有它的识别序列)来获取目的基因。序列)来获取目的基因。限制酶限制酶DNA连接酶连接酶载体载体对受体细胞无害;对受体细胞无害;有一个至多个限制酶切割位点;有一个至多个限制酶切割位点;有特殊的标记基因;有特殊的标记基因;能
5、自我复制或能整合到宿主能自我复制或能整合到宿主DNADNA上。上。质粒、质粒、噬菌体、动植物病毒噬菌体、动植物病毒作为载体的条件作为载体的条件种类:磷酸二酯键磷酸二酯键来源:来源:主要来源于原核生物主要来源于原核生物特点:特点:作用部位:作用部位:具有专一性具有专一性作用结果:作用结果:形成黏性末端或平末端形成黏性末端或平末端连接部位:磷酸二酯键连接部位:磷酸二酯键 种类:种类:E.coliDNAE.coliDNA连接酶、连接酶、T T4 4 DNA DNA连接酶连接酶作用:把两条双链DNA片段拼接起来 小结:基因工程的基本工具 实验:DNA的粗提取与鉴定一、实验原理1提取DNA的原理2鉴定D
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