植物硝酸还原酶(NR)活力测定(活体法).docx
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1、植物硝酸还原酶(NR )活力测定(活体法)于图一、原理硝酸还原酶(NR )是植物氮素同化的关键酶,它催化植物体内的硝酸盐还原为亚硝酸 盐,产生的亚硝酸盐与对-氨基苯磺酸(或对-氨基苯磺酰胺)及蔡胺(或蔡基乙烯二胺) 在酸性条件下定量生成红色偶氮化合物。其反应如下:N02- + 2H+ + Cl-、CI-N=NC1-N=N+ 2 HQ+SO3HNH2SO3H生成的红色偶氮化合物在540nm波长下有最大吸收峰,可用分光光度法测定。硝酸 还原酶活性可由产生的亚硝态氮的量表示。一般以NpggLh-i为单位。NR的测定可分为 活体法和离体法。活体法步骤简单,适合快速、多组测定。离体法复杂,但重复性较好二
2、、仪器与用具分光光度计;真空抽气泵(或20ml注射器筒);天平;单面刀片呆温箱(或恒温水 浴);刻度试管(15ml);移液管(5mlx2 , 2m1x8 , lmlx2 三、试剂1. 亚硝酸钠标准液 称取分析纯NaNO2 0.1000g水溶后定容至100ml ,吸取5ml 用水稀释定容至1000ml ,即为每ml含NaNO2 5pg (亚硝态氮近似lpg/ml )的标准液。2. 0.1mol/L pH7.5 的磷酸缓冲液:K2HPO4 19.24g , KH2Po4 2.2g ,加水溶解后定 容至1000mL3. 1% ( W/V )对-氨基苯磺酸溶液:称取10.0g加入250ml浓HCI中,
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