肿瘤细胞培养基本方法.doc
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1、肿瘤细胞培养基本方法(一)准备和安装过滤器清洗好过滤器,干燥,放入一张孔径0.22m的微孔滤膜,用布包装好,15磅20 min进行高压灭菌处理。 在超净台内打开过滤器架好,胶管一端接入滤泵再插入待除菌的液体中,出口端胶管深入到已消毒好的瓶子中。用泵过滤,过滤后要检查滤膜是否完好无损。(二)合成培养基的配制1、根据细胞目录中的说明,按下表选择合适品牌及货号的培养基干粉,用适量超纯水充分溶解。培养基品牌货号D-MEM/F-12GIBCO12400024Dulbeccos Modified Eagle Medium (D-MEM), powder (high glucose)GIBCO1280001
2、7F-12 Nutrient Mixture (Ham) powderGIBCO21700075Iscoves Modified Dulbeccos Medium (IMDM) powderGIBCO12200036Leibovitzs L-15 Medium powderGIBCO41300039McCOYs 5ASIGMAM4892Minimum Essential Medium (MEM) Alpha Medium powder (MEM)with ribonucleosides and deoxyribonucleosidesGIBCO11900024Minimum Essential
3、 Medium (MEM) Alpha Medium powder (MEM)without ribonucleosides and deoxyribonucleosidesGIBCO12000022Minimum Essential Medium (MEM) powderGIBCO41500034NUTRIENT MIXTURE F12 HAM KAIGHNSMODIFICATION (F12K)SIGMAN3520RPMI Medium 1640GIBCO31800022EGFSIGMAE9644Sodium pyruvateSIGMAP2256-25GMEDIUM 199, WITH E
4、ARLES SALTS AND L-GLUTAMINE, WITHOUT SODIUM BICARBONATE. CELL CULTURE TESTEDSIGMAM50172、 按要求添加碳酸氢钠、谷氨酸钠、HEPES等,充分搅拌使之溶解。3、 调 pH至7.2左右。4、 加水至最终体积。5、 在超净台中对溶液进行滤过除菌,分装入250 mL或500 mL玻璃瓶中,用翻帽塞塞紧瓶口。6、 瓶口封好,4冰箱贮存。(三)小牛血清的处理市场上出售的小牛血清一般做了灭菌处理,但在使用前还应做热灭活处理,即通过加热的方法破坏补体(近来也有观点认为热灭活处理是不必要的)。胎牛血清不必灭活。1、 将血清加热
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