T_WEBIO 0001-2023 人源原代细胞制备及质量控制规范.docx
《T_WEBIO 0001-2023 人源原代细胞制备及质量控制规范.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《T_WEBIO 0001-2023 人源原代细胞制备及质量控制规范.docx(13页珍藏版)》请在得力文库 - 分享文档赚钱的网站上搜索。
1、学兔兔标准下载ICS07.080CCSC04团体标准T/WEBIO00012023人源原代细胞制备及质量控制规范Specificationofhumanprimarycellpreparationandqualitycontrol2023-11-10发布2023-11-13实施武汉东湖国家自主创新示范区生物医药行业协会发布学兔标准兔下载学兔兔标准下载T/WEBIO00012023目次前言.II1范围.12规范性引用文件.13术语和定义.14缩略语.15原代细胞制备.26质量控制.3附录A(资料性)捐赠者基本信息表.6附录B(资料性)样本信息表.7附录C(资料性)肿瘤细胞标记物检测流程.8参考文
2、献.9I学兔兔标准下载T/WEBIO00012023前言本文件按照GB/T1.12020标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由武汉大学提出。本文件由武汉东湖国家自主创新示范区生物医药行业协会归口。本文件起草单位:武汉大学、中国典型培养物保藏中心、武汉赛尔朗灵科技有限公司、中国医学科学院基础医学研究所、天津医科大学肿瘤医院肿瘤生物样本库、浙江省肿瘤医院生物样本库、华中科技大学同济医学院附属同济医院、华中科技大学同济医学院附属协和医院、华中科技大学协和东西湖医院、湖南省肿瘤医院、复旦大学附属华山医院、中国人民解放军陆军军医大学第一附属医院、武汉市标准化研究院。本文件
3、主要起草人:沈超、杨媚媚、何静、夏司璇、王昱东、熊君、廖聪、李南、刘玉琴、李继新、刘红亚、王前进、刘霞、李海欣、郑智国、胡志全、杨春光、姜晓兵、章小平、李俊俊、袁海涛、何正文、陈向军、李飞、黄勇、任雯菁。II学兔兔标准下载T/WEBIO00012023人源原代细胞制备及质量控制规范1范围本文件规定了科研用人源原代细胞的制备过程中的样本获取、细胞培养及质量检测的操作程序和一般原则。本文件适用于人源原代细胞的相关研究。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改
4、单)适用于本文件。GB/T37864-2019生物样本库质量和能力通用要求GB/T38736-2020人类生物样本保藏伦理要求GB/T39767-2021人类生物样本管理规范GB/T40352.1-2021人类组织样本采集与处理ASN-0002-2021人源细胞系鉴定之短片段重复序列(STR)检测的标准操作(HumanCellLineAuthenticationStandardizationofShortTandemRepeat(STR)Profiling)中华人民共和国药典2020年版,第三部国卫科教发20234号涉及人的生命科学和医学研究伦理审查办法3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。
5、3.1细胞cell生物体的基本单位,由膜包围的含有细胞核的原生质组成。3.2原代细胞primarycell直接从组织中分离培养的细胞,传代次数不超过10代。3.3有限细胞系finitecellline细胞在体外传代具有一定的期限,到达一定代次后就会衰老死亡,这种细胞系称之为有限细胞系。3.4无限细胞系infinitecellline体外培养具有持续增殖能力的细胞系,称为无限细胞系。3.5细胞株cellstrain通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物的培养物称为细胞株。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。3.6完全培养基completemedium基
6、础培养基添加血清、抗生素等物质后,叫完全培养基,也叫(血清)细胞培养基。4缩略语1兔学兔标准下载5.2.2.2将组织切成1mm2mm大小。T/WEBIO00012023下列缩略语适用于本文件。DNA:脱氧核糖核酸(DeoxyribonucleicAcid)PCR:聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction)STR:短片段重复序列(ShortTandemRepeat)PBS:磷酸盐缓冲溶液(PhosphateBufferSaline)HRP:辣根过氧化物酶(HorseradishPeroxidase)EDTA:乙二胺四乙酸(EthyleneDiamineTetraacetic
7、Acid)5原代细胞制备5.1组织样本收集与运输5.1.1组织样本的收集、处理应遵循涉及人的生命科学和医学研究伦理审查办法和GB/T40352.1-2021的规定。5.1.2组织样本的保藏应遵循GB/T38736-2020和GB/T39767-2021的规定。5.1.3组织样本采集前应通过伦理委员会审批,具备捐赠者或代理人签署的知情同意书。5.1.4专人负责组织样本的收集,所取组织放入含有组织保存液的取样管中,在管壁上标记取样信息,并记录其他必要信息,包括但不限于捐赠者编号、性别、年龄、疾病名称、取材部位病理诊断等,具体表格可参见附录A、附录B,以备后续查询。5.1.5用生物样本专用运输箱及时
8、将组织样本送往实验室,取适量组织用于细胞分离,剩余组织冻存,用于二次细胞分离和相关鉴定。冻存组织时应采用合适的组织冻存液,以长时间维持组织活性。5.1.6离体组织的临时保存和运输时间应不超过24h,温度28,细胞分离培养需在满足条件的细胞实验室中进行。5.2细胞分离5.2.1组织块法5.2.1.1充分去除血块、坏死组织等组织后,用4平衡盐溶液清洗。5.2.1.2将组织切成1mm32mm3大小。5.2.1.3转移至细胞培养瓶中,加入完全培养基培养,于37,5%浓度二氧化碳培养箱中静置72h。5.2.1.472h后观察细胞贴壁增殖情况。5.2.2酶消化法5.2.2.1充分去除血块、坏死组织等组织后
9、,用4平衡盐溶液清洗。335.2.2.3加入组织消化液,37恒温震荡消化0.5h3h。5.2.2.4加入完全培养基终止消化,用细胞筛过滤,收集细胞悬液并计数。5.2.2.5低速离心,除去上清,加入适量完全培养基。调整合适的细胞密度,接种至培养瓶中培养。5.2.3直接离心法胸腹水或血液样本以300g500g转速离心5min10min,收集细胞沉淀后直接接种培养;若红细胞较多需去除红细胞后再接种培养。5.3细胞培养与传代5.3.1细胞培养初期应轻拿轻放,定期补充或更换新鲜培养液,并记录细胞生长状态。2学兔兔标准下载5.5.2加入4预冷的细胞冻存液重悬细胞,稀释细胞密度至0.510个/mL110个/
10、mL。T/WEBIO000120235.3.2待细胞融合度达到80%以上时,去除培养基,并用平衡盐溶液清洗细胞1次2次。5.3.3向T25细胞培养瓶内加入1mL含0.02%EDTA浓度为0.05%0.25%的胰蛋白酶,置于37下进行消化1min3min,消化后在倒置显微镜下进行观察,当发现胞质回缩、细胞间隙增大后,立即终止消化。5.3.4向细胞培养瓶内加入完全培养基,混匀终止消化。5.3.5使用吸管,吸取瓶内培养液,按顺序反复轻轻吹打瓶壁细胞,使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。5.3.6用吸管转移细胞悬液至离心管中,以300g500g转速离心5min。5.3.7去掉上清液,加入适量平衡盐溶液清洗细胞
11、2次3次,需要时可进行细胞计数和活性检测。5.3.8去掉细胞上清液,在离心管中加入1mL培养液,并反复吹打细胞,制成细胞悬液。5.3.9补足新鲜培养基,调整细胞密度,接种至培养瓶,于37,5%浓度二氧化碳培养箱中进行培养。5.4细胞纯化5.4.1机械刮除法在培养瓶背面标记目的细胞的生长区域,刮除无标记区域的杂细胞,用PBS洗去杂细胞,加入新鲜培养基继续培养。5.4.2反复贴壁法参考步骤5.3.15.3.6收集细胞,接种至新的培养瓶中培养5min20min。收集未贴壁的细胞悬液,接种至新的培养瓶中培养5min20min。重复数次,收集最后一次细胞悬液,接种至新培养瓶中培养。5.4.3消化排除法参
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- T_WEBIO 0001-2023 人源原代细胞制备及质量控制规范 0001 2023 人源原代 细胞 制备 质量 控制 规范
限制150内