以竹粉为基质固态培养虫拟蜡菌及其产漆酶条件研究.docx
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1、以竹粉为基质固态培养虫拟蜡菌及其产漆酶条件研究 打开文本图片集 摘 要:该探讨探讨了不同培育条件对Ceriporiopsis subvermispora NL-4固态发酵产漆酶的影响。结果表明,当培育温度为30、培育基的初始含水率为64%、接种量为12%、起始pH 6.0时,该菌株活力最好且漆酶产量高;在条件下培育10d,漆酶活力可达12.45 U/g干基,比优化前提高了40%。 关键词:虫拟蜡菌;固态发酵;漆酶 中图分类号 TQ925 文献标识码 A 文章编号 1017-773108-0018-03 Abstract:Effect of culture conditions for the
2、production of laccase by Ceriporiopsis subvermispora NL-4 were investigated in solid-state fermentation using the milled bamboo as main substrate.The results of single-factor test showed that the optimal culture conditions of the temperature,moisture of medium,inoulum volume and the initial pH were
3、30,64%,12% and 6.0.After the strain of C. subvermispora NL-4 was cultured for 10d growth under the conditions of the above parameters,the laccase activity was up to 12.45U/g dry medium,which was 40% higher than that under the primitive conditions. Key words:Ceriporiopsis subvermispor;Solid-fermentat
4、ion;Laccase 漆酶最初是從漆树中获得的,随着生物技术的发展,微生物源漆酶有了较大的发展。由于漆酶在多个领域具有广泛的用途,对漆酶的需求日益增多1-2。但目前微生物产漆酶的产量仍不高3,培育期过长导致染菌的可能性增大;漆酶的产量过低严峻制约了其分别提取和纯化4。采纳农林生物质资源作为主要基质,通过固态培育的方式探究漆酶的产生及其产量的提高,不但可以有效节约资源,降低生产成本,削减污染物的排放5;同时,与液体发酵相比,固态发酵更接近于自然界的生态环境,有利于菌株产酶6-7。虫拟蜡菌8是一类高产漆酶的白腐菌,本探讨室对其进行了菌株的诱变,获得了一株漆酶产量明显提高的菌株C. subverm
5、ispora NL-49。因此,本探讨以Ceriporiopsis subvermispora NL-4为发酵菌株,以竹粉为主要基质,对该菌固态发酵产漆酶的条件进行优化,以提高漆酶产量和产酶效率10。 1 材料与方法 1.1 菌株 C. subvermispora NL-4,本探讨室诱变选育获得。 1.2 竹粉 竹粉,为毛竹的加工剩余物,产自浙江临安,烘干后过40目筛,干燥贮存备用。 1.3 试剂 葡萄糖等均为国产分析纯,购自杭州木木生物科技有限公司;ABTS,购于sigma公司;马铃薯等购于临安浙皖农贸城。 1.4 培育基 PDA固体培育基:马铃薯20%,葡萄糖2%,琼脂2%,KH2PO4
6、0.3%,MgSO47H2O 0.15%,121灭菌20min10。液体种子培育基:酵母膏0.3%,葡萄糖2%,蛋白胨0.5%,pH自然,121灭菌20min10。固态发酵基础培育基:在250mL三角瓶中装竹粉30g,含水率60%,121灭菌20min10。 1.5 固态发酵 参照王超等固态培育方法10。 1.6 生化参数的测定 粗酶液制备及酶活测定:参照高恩丽等方法并改进11。参照黄丹莲等方法并改进12。生物量的测定:用氨基葡糖法,参照彭丹方法测定13。 2 结果与分析 2.1 C. subvermispora NL-4生长曲线和产酶曲线 将液体种子以10%接种量接入固体发酵基础培育基中,1
7、80r/min、28培育16d,漆酶产量和生物量如图1。由图1中菌体的生长曲线显示,在前4d之内,菌体生长较慢,之后在48d之内菌体干重增加较快,呈现出对数生长期,811d后保持基本稳定10。酶活曲线显示,C. subvermispora NL-4在固态发酵条件下,第5d才起先产酶,第12d漆酶活力达到最高,因此初步确定12d为后续发酵条件探讨的培育时间。 2.2 培育温度对C. subvermispora NL-4固态发酵产漆酶的影响 将固态发酵基础培育基分别在15、20、25、30、35、40条件下,180r/min、恒温培育12d后测漆酶产量,结果如图2。图2表明,培育温度对C. sub
8、vermispora NL-4固态发酵产漆酶的影响较大,30时漆酶酶活达到最高,40时仅为最高酶活的39%,因此确定30为固态发酵产漆酶的最适培育温度10。 2.3 起始含水率对C. subvermispora NL-4固态发酵产漆酶的影响 将固态发酵基础培育基的含水率分别调为44%、48%、52%、56%、60%、64%、68%和73%,180r/min、30培育12d后测漆酶产量,结果见图3。图3显示,随着培育基含水量的增加,漆酶活力也有提高,当培育基的含水率64%时,漆酶活力最高。含水率接着增加时,漆酶活力快速下降。 2.4 起始pH对C. subvermispora NL-4固态发酵产
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- 基质 固态 培养 虫拟蜡菌 及其 产漆酶 条件 研究
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