牛奶中黄曲霉毒素M1的检测方法.doc
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1、【精品文档】如有侵权,请联系网站删除,仅供学习与交流牛奶中黄曲霉毒素M1的检测方法.精品文档.牛奶中黄曲霉毒素M1的检测方法食品质量与安全 王婉婷摘要:采用免疫亲和柱荧光光度法快速测定和微细柱快速检测方法测定牛乳中黄曲霉毒素 M1,方法具有准确、简单、快速、安全等优点,可以满足少量和批量样品的检测需要。关键词:牛奶;黄曲霉毒素M1;快速检测 Rapid detecting aflatoxin m1 in milkStudent majoring in Food Quality and Safety WangWantingAbstract:Aflatoxin M1 in milk are ext
2、racted and separated by immunoaffinity column and Micro column for rapid detection methodKey words: milk ;rapid detecting aflatoxin M1 ;aflatioxin M1 immunoaffinity column一前言近代研究表明当奶牛食用饲料中含有黄曲霉素Bl时,牛奶和其他乳制品会含有黄曲霉素Ml1。黄曲霉毒素Ml的毒性和致癌性与黄曲霉毒素Bl的基本相似。由于牛乳及其制品是人类特别是婴儿的主要食品,因此各国对其限量的要求十分严格。我国及许多国家规定牛奶及奶制品中黄
3、曲霉毒素Ml的含量不得超过0.5ugkg;所以,快速、方便、准确的检测方法在牛奶的检测中十分重要,二主要检测方法2.1免疫亲和柱荧光光度法快速测定2.1.1测定原理:试样经过离心、脱脂、过滤后,滤液经过键合有黄曲霉毒素Ml特殊抗体的免疫亲和柱净化,此抗体对黄曲霉毒素Ml具有专一的识别能力,黄曲霉毒素Ml键合在分离柱中的抗体上。用甲醇与水之比为10:90的混合液将免疫亲和柱上杂质除去;以甲醇与水之比为80:20 的混合液通过分离柱洗脱,加入溴溶液衍生,以提高测定灵敏度。衍生化后的洗脱液于荧光光度计中测定黄曲霉毒素Ml。2.1.2仪器设备与试剂系列真菌毒素专用荧光光度计(进口);离心机(相对加速离
4、心力大于2000g );空气压力泵;玻璃试管(12mm*75mm ,无荧光特性)玻璃纤维滤纸(直径11m ,孔径0.5um )黄曲霉毒Ml免疫亲和柱进口)甲醇为液相色谱级纯;氯化钠为分析纯;溴储备液(0.01 ):称取适量溴溶于水,配成质量分数为0.01 的储备液,避光保存溴水使用液(0.002 ):取10ml质量分数为0.01 的溴溶液加入40ml水混匀,于棕色瓶中保存备用(需现用现配)。荧光光度计标定溶液(进口):红色标定管(内含0.00680g二水硫酸奎宁,20ml浓度为0.05molml硫酸溶液,此溶液相当于2ngg 黄曲霉毒素Ml标准溶液;黄色标定管内含0.00340g 二水硫酸奎宁
5、,2ml浓度为0.05molml硫酸溶液,此溶液相当于1ngg黄曲霉毒Ml标准溶液);绿色标定管(内含2ml浓度为硫0.05molml酸溶液,此溶液不含黄曲霉毒素Ml)。 2.1.3分析步骤(1)样品提取液体牛乳及牛乳制品:量取50ml液体样品,加入1.0g 氯化钠,在离心机上以2000g离心10min,仔细地将用于牛奶分析的有效部分低层移取,不要扰动顶部脂肪层,将脱脂的牛奶以玻璃纤维滤纸过滤。(2)净化 将免疫亲和柱连接于10ml玻璃针筒下。准确移取10.0ml上述澄清滤液注入玻璃针筒中,将空气压力泵与针筒连接,调节压力使溶液以约6mlmin流速缓慢通过免疫亲和柱,直至2-3空气通过柱体。以
6、10ml甲醇与水之比为10:90的混合液清洗柱子2次,弃去全部流出液,并使2-3空气通过柱体。准确加入1.0ml甲醇与水之比为80:20的混合液洗脱,流速为1-2mlmin,收集洗脱液于玻璃试管中,供检测用。(3)测定荧光光度计校准:在激发波长360nm ,发射波长50nm条件下,以绿色标定管调节荧光光度计的荧光强度值读数为0.0;以红色标定管调节荧光光度计的荧光强度值读数为2.0;以黄色标定管验证荧光光度计的荧光强度值读数应该为1.00.2 。样液测定:取上述洗脱液加入1.0ml质量分数为0.002溴溶液,于荧光光度计中测定黄曲霉毒素Ml含量。(4)结果计算荧光光度计测定结果按下式计算 X=
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