病毒灭活试验.docx
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1、 病毒灭活试验2.1.1.10.1 适用范围主要适用于消毒产品鉴定或日常监测。用具有一定代表性的、活的病毒及其细胞感染技术,评价各种用途的消毒因子对测试病毒的杀灭效果。按此方法进行的试验,只是对消毒因子的灭活病毒能力的重要方面进行验证。2.1.1.10.2 试验器材(1)试验用病毒株:脊髓灰质炎病毒 1 型(poliovirus-,PV-)疫苗株;艾滋病病毒 1 型(HIV-1)美国株。(2)宿主细胞:可采用 VERO 细胞系、BGM 细胞、Hela 细胞系或 FL细胞系,作为 PV-1 的测试细胞。用含有人 T 淋巴细胞白血病病毒 1 型(human T cell leukemiavirus
2、 1,HTLV-1)基因的人淋巴细胞(MT4 株)作为 HIV-1 的测试细胞。(3)细胞培养瓶与 96 孔培养板。(4)恒温水浴箱。(5)二氧化碳培养箱。(6)层流超净工作台。(7)低温冰箱(-20,-80)。(8)液氮罐。(9)倒置显微镜。(10)离心机。(11)可调移液器及配套一次性塑料吸头。(12)细胞维持培养基:见附录 A。(13)细胞完全培养基:见附录 A。(14)去离子水。2.1.1.10.3 病毒悬液的制备(1)从液氮中取出冻存的试验用宿主细胞,在 37温水中迅速融化,用毛细吸管移植于含有细胞维持液的细胞管内,吹吸数次,使混匀,立即离心(3000r/min,3min),去上清液
3、。再加入适当的细胞维持液,吹吸数次,使混匀,同上离心后,转种于加有 10ml 完全培养基的培养瓶中。逐日观察细胞生长情况,在细胞长满单层时,用于消毒试验。(2)取出低温冻存的试验病毒毒种,37水浴融化,用细胞维持液作 10 倍稀释,然后接种于已经长满单层细胞的细胞瓶内,置 37温箱中,使与细胞吸附、生长。逐日观察病变,待 3/4 细胞出现病变时,收获病毒。(3)将含有病毒及宿主细胞的培养液,在冰浴条件下,用超声波(或反复冻融)破碎宿主细胞,释放病毒。然后,尽快离心(6000r/min,15min)去除沉淀(主要为细胞碎片),上清液即为所需的病毒悬液。按每管 1.0ml 分装于无菌离心管(1.5
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