德州驴DNA亲子鉴定技术规程.docx
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1、 NY/T 2012 ICS 中国标准文献分类号DB6N Y 5德州驴 DNA 亲子鉴定技术规程Technical Specification for DNA Parentage Identification in DEZHOU DonkeyT/CAAA中中国国畜畜牧牧业业协协会会 发发布布2018-发布2018-实施中国畜牧业协会团体标准中国畜牧业协会团体标准T/CAAA XXXX-2018T/CAAA 2018前 言本标准根据GB/T 1.12000标准化工作导则 第1部分:标准的结构和编写规则相关要求制定。本标准由中国畜牧业协会提出。本标准由 全国畜牧业标准化技术委员会 归口。本标准主要
2、起草单位:东阿阿胶股份有限公司、中国农业大学、中国农业科学院北京畜牧兽医研究所、山东农业科学院奶牛研究中心、山东东阿黑毛驴牧业科技有限公司。本标准主要起草人:张新浩、赵春江、李海静、嵇传良、周祥山、杨莉、张莉、王长法、王敏、吕鑫、刘宇、崔冉、韩思勇、胡元岭、赵志超。T/CAAA 20181德州驴 DNA 亲子鉴定技术规程1 范围本标准规定了德州驴 DNA 亲子鉴定的技术方法及结果分析等内容。本标准适用于德州驴亲子鉴定。2规范性引用文件下列文件中的条款对于本标准是必不可少的。凡是标注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不标注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本标准
3、。GB/T 6682 分析实验室用水规格和实验方法GA/T 383 法庭科学 DNA 实验室检验规范SN/T 1193 基因检验实验室技术要求SN/T 1119-2002 进口动物源性饲料中牛羊源性成分检测方法 PCR 方法3 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3.1亲子鉴定 parentage identification利用分子遗传学、生物学及医学的理论和技术判断亲代与子代是否具有血缘关系。3.2微卫星 DNA 标记 DNA microsatellite又称为短串联重复序列(short tandem repeats, STRs)或简单重复序列(simple sequence repea
4、ts) ,是分布于真核生物基因组中的简单重复序列,由 26 个核苷酸的串联重复片段构成。重复单位的重复次数在个体间呈高度变异性并且数量丰富。4鉴定原理根据微卫星 DNA 的侧翼保守序列设计荧光标记引物,通过多重 PCR 技术扩增不同个体的微卫星 DNA 位点。通过分型技术检测微卫星 DNA 标记的遗传多态性。分析亲代个体和子代个体各微卫星标记的基因型是否相符,以达到鉴定亲子关系的目的。5主要试剂配置及器材5.1 试剂5.1.1 乙二胺四乙酸二纳(EDTA) ,分析纯5.1.2 乙醇(Ethanol) ,分析纯T/CAAA 201825.1.3 异丙醇(Isopropanol) ,分析纯5.1.
5、4 氢氧化钠(NaOH) ,分析纯5.1.5 冰醋酸(CH3COOH) ,分析纯5.1.6 十二烷基硫酸钠(SDS) ,分析纯5.1.7 氯化钠(NaCl) ,分析纯5.1.8 乙酸钾(CH3COOK) ,分析纯5.1.9 琼脂糖(Agarose)5.1.10 盐酸(HCl) ,分析纯5.1.11 溴酚蓝(BPB) ,分析纯5.1.12 二甲苯(FF) ,分析纯5.1.13 蔗糖(Sucrose) ,分析纯5.1.14 缓冲液a、血液裂解缓冲液(Buffer A):100 mM Tris-Hcl(PH 7.5) ,100 mM EDTA,100 mM 氯化钠,0.5 % SDS;b、蛋白沉淀缓
6、冲液(Buffer B):200 ml 5 M CH3COOH,500 ml 6 M LiCl;c、DNA 溶解缓冲液(TE):10 M Tris-HCl,d、电泳缓冲液 50TAE:2 M Tris-base,1 M 冰乙酸,0.1 M EDTA(PH 8.0) ;除另有规定外,标准中所使用试剂均为分析纯,水为参见 GB/T 6682 的双蒸水;高压灭菌条件为:1.034105 Pa、121 、20 min。e、琼脂糖电泳缓冲液:0.25 %溴酚蓝,0.25 %二甲苯菁 FF,40 %的蔗糖水溶液。5.2 器材5.2.1 单道可调移液器 2.5 l,10 l,100 l,200 l,1000
7、 l,5 ml5.2.2 离心机,最高转数 14000 r/min5.2.3 电子天平,可精确到 0.001 g5.2.4 旋转混匀器5.2.5 PCR 扩增仪 0.2 ml96 孔5.2.6 恒温水浴锅5.2.7 蛋白质核酸分析仪5.2.11 微波炉5.2.12 冰箱T/CAAA 201835.2.13 高压灭菌锅,温度范围 45135 ,最大压力 0.255 Mpa6亲子鉴定规程6.1 样本采集使用 EDTA 抗凝管静脉采集血样 2 ml5 ml 或带有毛囊的毛发,4 或-20 保存。6.2 DNA 提取采用试剂盒法从全血中提取基因组 DNA。具体方法参见附录 A。DNA 提取操作的注意事
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