生化室作业指导书(80页).doc
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1、-生化室作业指导书-第 77 页生化室作业指导书文件编号:ZTGRY-1-SH-0161第1版编制: 审核: 批准: 生效日期:2014年1月1日梓潼县工人医院检验科目 录序号主 题 内 容 代 号页 号1血清总胆红素测定ZTGY-1-SH-0152血清直接胆红素测定ZTGY-1-SH-02103血清总蛋白液体双缩脲法测定ZTGY-1-SH-033134血清白蛋白溴甲酚绿法测定ZTGY-1-SH-04165血清丙氨酸氨基测定ZTGY-1-SH-05196血清天门冬氨酸氨基测定ZTGY-1-SH-06237血清碱性磷酸酶测定ZTGY-1-SH-07278血清-淀粉酶测定ZTGY-1-SH-083
2、19血清葡萄糖氧化酶法测定ZTGY-1-SH-093510血清尿素氮Urease-GLDH紫外法ZTGY-1-SH-0103911血清肌酐苦味酸法测定ZTGY-1-SH-114312血清尿酸Uricase法测定ZTGY-1-SH-124613血清总胆固醇酶试剂法测定ZTGY-1-SH-135014血清甘油三酯酶试剂法测定ZTGY-1-SH-145415血清高密度脂蛋白胆固醇测定ZTGY-1-SH-157616血清低密度脂蛋白胆固醇测定ZTGY-1-SH-168017血清肌酸激酶(CK) 法测定ZTGY-1-SH-178418血清肌酸激酶MB同工酶测定ZTGY-1-SH-188819血清乳酸脱氢
3、酶DGKC法测定ZTGY-1-SH-199220血清a-羟丁酸脱氢酶测定ZTGY-1-SH-209921血清g-谷氨酰转移酶ZTGY-1-SH-2110622复合校准品ZTGY-1-SH-2219223美菱冰箱操作维护规程ZTGY-1-SH-2320325纯水机操作维护规程ZTGY-1-SH-2420526DS-301生化分析仪操作维护规程ZTGR -3-SH-2520927离心机操作维护规程ZTGR -3-SH-26222 修 订 页序号文件编号页码需更改的内容更改内容批准人批准日期123456789101112131415161718192021血清总胆红素(T-BIL)测定1. 实验原理
4、血清中的胆红素分为直接(结合)胆红素和间接(未结合)胆红素。大多数方法是在1883年Ehrlich提出的重氮法胆红素测量法1,一些改良的方法已被用来增进反应。这些改良的方法是使直接胆红素直接和重氮化合物进行反应,生成一种有颜色的化合物,而间接胆红素需要一种溶剂,如表面活性剂后才能进行反应。英诺华总胆红素试剂是钒酸氧化法,PH接近于3时,在钒酸盐及表面活性剂的作用下,总胆红素被氧化成胆绿素。此时,胆红素特有的黄色减少,通过测定钒酸作用前后的吸光度的差可求得样品中总胆红素的浓度。胆红素 钒酸胆绿素2. 标本:2.1 病人准备:无特殊要求。最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。2.2 类型:血清、肝素
5、或EDTA血浆,应避光保存。3. 标本存放:1525保存可稳定2天;28保存可稳定7天;-20保存可稳定3个月,如冰冻保存,不可反复冻融!。4. 标本运输:常温条件下避光保存运输。5. 标本拒收标准:标本溶血、细菌污染、脂血、非避光保存运输的标本。6. 实验材料6.1 试剂:英诺华总胆红素试剂盒( 试剂1: 432ml; 试剂2:8ml)6.1.1 试剂组成试剂1:柠檬酸缓冲液 88mmol/L试剂2:磷酸盐缓冲液 50mmol/L 偏钒酸钠 3mmol/LSID 见瓶签6.1.2 试剂准备:液体试剂,直接使用,无需配制。6.1.3 试剂稳定性与贮存试剂避光保存于28,若无污染,可稳定至失效期
6、。试剂有效期为12个月。试剂2必需避光保存。试剂不可冰冻。6.1.4 变质指示:当试剂有浊度时,表明有细菌污染,不能继续使用。6.1.5 注意事项:此试剂为体外诊断用,不要入口,毒性还末确定;警告!腐蚀剂!不要入口;避免和眼睛,皮肤或衣服接触,如果接触到,立即用大量的水冲洗受损害的部位15分钟,接触到眼睛或吞服,立即寻找医疗保护。6.2 校准品:参见生化检验校准品和质控品.SOP文件6.3 质控品:参见生化检验校准品和质控品.SOP文件7. 仪器:英诺华生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数:参见英诺华DS-301生化分析仪项目测定参数.SOP文件。8.2仪器操作步骤:参见英诺华DS-3
7、01生化分析仪操作规程.SOP文件。9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制:在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析,以2S为质控警告限,3S为失控限,绘制质控图,判断是否在控。质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。11. 计算方法:以朗道校准品复合校准品校准仪器后,在病人结果可报告范围内,仪器直接报告可靠的检测结果无需手工计算,以mol/L报告。手工测定计算方法为: A标本总胆红素(mol/L) = 校准液浓度 A标准12. 参考值范围:mol/L参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验,每个实验室应建立自己的参考值。13.
8、临床意义:胆红素是血红蛋白的降解产物。游离胆红素非极性很强,几乎不溶解于水。在血液中与白蛋白形成复合物由脾脏向肝脏运输。在肝脏中,胆红素与葡萄糖醛酸结合,生成可溶性胆红素葡萄糖醛酸酯由胆管排入肠道。溶血(肝前黄疸)、实质的肝损伤(肝性黄疸)和胆管堵塞(肝后黄疸)都会导致血液胆红素增高,形成高胆红素血症。人群中常见先天性慢性高胆红素血症,称为Gilbert综合症。由于胆红素降解酶的功能滞后以及出生后红细胞破碎增多,使6070%的婴儿血液出现总胆红素增高。常用的胆红素检测方法能检测总胆红素和直接胆红素。直接胆红素的测定主要检测水溶性的结合胆红素,因此可以根据总胆红素和直接胆红素的差来估计游离胆红素
9、的含量。14. 操作性能14.1 线性范围:0-300mol/L14.2 精密度:批内精密度CV3%,批间精密度R10%。14.3 灵敏度:本试剂的检测限为0mol/L。14.4 病人结果可报告范围:0300mol/L15. 超出范围结果处理:本法线性上限为684mol/L。如样品测定值超过上限时,应将样品用氯化钠溶液作1:1稀释,重新测定,结果乘以2。16. 病危报警值的处理 当新生儿血清标本测定结果总胆红素340mol/L时,在经过复查等确认手段处理后应及时向临床主管医生汇报。17. 方法局限性17.1 本法线性上限为300mol/L。如样品测定值超过上限时,应将样品用氯化钠溶液作1:1稀
10、释,重新测定,结果乘以2。17.2 干扰物质:当样品中抗坏血酸浓度g /L,血红蛋白浓度3.00g/L,甘油三酯浓度/L时无明显干扰。18. 补救措施:当仪器发生故障时,迅速联系仪器厂家进行维修。19. 参考文献 1.李影林.中华医学检验全书M.北京:人民卫生出版社,1996.2.BurtisCA,AshwoodER,editors.TietzTextbookofClinicalChemistry.3rdedM.Philadelphia:SaundersCompany,1999.3.WS/T225-2002,临床化学检验血液标本的收集与处理S.4.叶应妩,王毓三,申子瑜.全国临床检验操作规程M
11、.南京:东南大学出版社,2006.5.CLSI/NCCLSC28-A2,HowtoDefineandDetermineReferenceIntervalsintheClinicalLaboratory,ApprovedGuidelineS.8. 产品说明书,南京神州英诺华医疗科技有限公司,无版号20. 其他:仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按检验科废物处置管理规定执行。血清直接胆红素(D-BIL)测定1. 实验原理PH接近于3时,在钒酸及表面活性剂的作用下,直接胆红素被氧化成胆绿素,此时,胆红素特有的黄色减少,通过检测钒酸作用前后吸光度的差,可求得样品中直接胆红素的浓度。2. 标本:2
12、.1 病人准备:无特殊要求。最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。2.2 类型:血清、肝素或EDTA血浆,应避光保存。3. 标本存放:1525保存可稳定2天;28保存可稳定7天;-20保存可稳定3个月,如冰冻保存,不可反复冻融!。4. 标本运输:常温条件下避光保存运输。5. 标本拒收标准:标本溶血、细菌污染、脂血、非避光保存运输的标本。6. 实验材料6.1 试剂:英诺华直胆红素试剂盒:试剂1:( 432ml; 试剂2:8ml)6.1.1 试剂组成试剂1:.1.1 试剂组成试剂1:柠檬酸缓冲液 88mmol/L试剂2:磷酸盐缓冲液 50mmol/L 偏钒酸钠 3mmol/LSID 见瓶签6.1.2
13、 试剂准备:试剂为即用式液体试剂,直接使用,无需配制。6.1.3 试剂稳定性与贮存:试剂避光保存于28,若无污染,可稳定至失效期。试剂有效期为12个月。试剂2必需避光保存。试剂不可冰冻。6.1.4 变质指示:当试剂有浊度时,表明有细菌污染,不能继续使用。6.1.5 注意事项:此试剂为体外诊断用。警告!腐蚀剂!不要入口。避免和眼睛,皮肤或衣服接触。如果接触到,立即用大量的水冲洗受损害的部位15分钟。接触到眼睛或吞服,立即寻找医疗保护。6.2 校准品:参见生化检验校准品和质控品.SOP文件6.3 质控品:参见生化检验校准品和质控品.SOP文件7. 仪器:英诺华DS-301生化分析仪8. 操作步骤8
14、.1 项目基本参数:参见英诺华DS-301生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2 仪器操作步骤:参见英诺华DS-301生化分析仪操作规程.SOP文件检验结果的判断与分析10. 质量控制:在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析,以2S为质控警告限,3S为失控限,绘制质控图,判断是否在控。质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。11. 计算方法 以贝克曼复合校准品复合校准品校准仪器后,在病人结果可报告范围内,仪器直接报告可靠的检测结果无需手工计算,以mol/L报告。手工测定计算方法为: Au直接胆红素(mol/L) =-校准液浓度 As12. 参考值范围:mm
15、ol/L参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验,每个实验室应建立自己的参考值。13. 临床意义:胆红素是血红蛋白的降解产物。游离胆红素非极性很强,几乎不溶解于水。在血液中与白蛋白形成复合物由脾脏向肝脏运输。在肝脏中,胆红素与葡萄糖醛酸结合,生成可溶性胆红素葡萄糖醛酸酯由胆管排入肠道。溶血(肝前黄疸)、实质的肝损伤(肝性黄疸)和胆管堵塞(肝后黄疸)都会导致血液胆红素增高,形成高胆红素血症。人群中常见先天性慢性高胆红素血症,称为Gilbert综合症。由于胆红素降解酶的功能滞后以及出生后红细胞破碎增多,使6070%的婴儿血液出现总胆红素增高。常用的胆红素检测方法能检测总胆
16、红素和直接胆红素。直接胆红素的测定主要检测水溶性的结合胆红素,因此可以根据总胆红素和直接胆红素的差来估计游离胆红素的含量。14. 操作性能14.1 线性范围:0320mmol/L14.2 精密度:批内精密度CV3%,批间精密度R10。 灵敏度:0mmol/L。14.5 病人结果可报告范围:0320mol/L15 超出范围结果处理 本法线性上限为320mol/L。样品测定值超过上限时,应将样品用氯化钠溶液作1:1稀释,重新测定,结果乘以2。16. 病危报警值的处理 无。17. 方法局限性17.1 本法线性上限为171mmol/L。样品测定值超过上限时,应将样品用氯化钠溶液作1:1稀释,重新测定,
17、结果乘以2。,干扰物质:当样品中抗坏血酸浓度g /L,甘油三酯浓度/L时无明显干扰。18. 补救措施:当仪器发生故障时,迅速联系仪器厂家进行维修。19. 参考文献:1.李影林.中华医学检验全书M.北京:人民卫生出版社,1996.2.BurtisCA,AshwoodER,editors.TietzTextbookofClinicalChemistry.3rdedM.Philadelphia:SaundersCompany,1999.3.WS/T225-2002,临床化学检验血液标本的收集与处理S.4.叶应妩,王毓三,申子瑜.全国临床检验操作规程M.南京:东南大学出版社,2006.5.CLSI/N
18、CCLSC28-A2,HowtoDefineandDetermineReferenceIntervalsintheClinicalLaboratory,ApprovedGuidelineS.8. 产品说明书,南京神州英诺华医疗科技有限公司,无版号20. 其他:仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按检验科废物处置管理规定执行。血清总蛋白 (TP)双缩脲法测定1. 实验原理双缩脲比色终点法。在碱性条件下,蛋白与铜离子生成紫蓝色复合物。显色强度和蛋白浓度成正比。OH蛋白质 + Cu2+ -紫红色复合物2. 标本采集2.1 病人准备:无特殊要求。最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。2.2 类型:血
19、清或血浆。3. 标本存放 2025保存可稳定6天;48保存可稳定4周;-20保存至少可稳定1年。4. 标本运输 室温条件下运输5. 标本拒收标准:细菌污染的不能做测定。6. 实验材料:6.1 江苏英诺华总蛋白测定试剂盒 试剂1:470ml6.1.1 试剂组成试剂1(R1):氢氧化钠200 mmol/L酒石酸钾钠64 mmol/L氢氧化钠200 mmol/L碘化钾30 mmol/L硫酸铜12 mmol/L6.1.2 试剂准备:试剂为即用式。6.1.3 试剂稳定性与贮存:试剂避光保存于225,若无污染,可稳定至失效期。试剂有效期为12个月。试剂不可冰冻。开盖后应避免污染。6.1.4 变质指示:当试
20、剂有浊度时,表明有细菌污染,不能继续使用。6.1.5 注意事项:试剂中含有氢氧化钠,不可入口!如与皮肤及粘膜接触,请立即用大量水冲洗。使用试剂时应采取必要的防护。6.2 校准品:牛血清白蛋白,具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。6.3 质控品:具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。7. 仪器:英诺华DS-301生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数:参见英诺华DS-301生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2仪器操作步骤:参见英诺华DS-301生化分析仪操作规程.SOP文件9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制:在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标
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