任务十四测定食品中毒素天然毒素和激素.ppt
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1、任务十四测定食品中毒素天然毒素和激素1现在学习的是第1页,共39页项目一:测定贝类食品中麻痹性贝类毒素v一、案例v二、选用的国家标准GB/T5009.213-2008贝类中麻痹性贝类毒素的测定。2现在学习的是第2页,共39页v三、测定方法1试样制备v(1)牡蛎、蛤、贻贝、扇贝等:用清水洗净贝类外壳,切断闭壳肌,开壳,用清水淋洗内部,除去泥沙及其它外来杂质,仔细取出贝肉,勿割破肉体,开壳前不用麻醉剂或加热。收集约200g肉沥水5min,避免贝肉堆积,捡出碎壳等杂物,贝肉均质。v(2)冷冻贝类:室温下将样品自然融化,其余操作同上。v(3)贝类罐头:将罐内所有内容物(包括贝肉和汁液)倒入均质器中均质
2、,大容量罐头可以过滤贝肉,分别称重,然后将固形物和汁液按比例混匀,充分均质。v(4)干贝类:等体积0.18mol/L盐酸溶液浸泡2448h(4冷藏),按照上法沥干,分别存放贝肉和酸液备用。3现在学习的是第3页,共39页v2保存样品不能及时送检,可以取200g样品用200mL0.18mol/L盐酸浸泡,4冷藏保存。v3麻痹性贝类毒素(PSP)标准品对照试验4现在学习的是第4页,共39页v4试样提取(1)将100g处理后样品于800mL烧杯中,加0.18mol/L HCl溶液100mL,充分搅拌,均质,调pH于2.04.0,需要时可以用5mol/L HCl或0.1mol/L NaOH逐滴滴加,并不
3、断搅拌,防止毒素破坏。(2)混合物加热,徐徐煮沸5min,室温冷却后倒入200mL量筒中,调pH于2.04.0,pH勿大于4.5稀释至200mL。(3)混合物倒回烧杯中,搅拌均匀,自然沉降至上清液半透明,不阻塞针头为止,必要时可以用3000r/min离心上清液或混合物5min。5现在学习的是第5页,共39页v5小鼠试验(1)取19.021.0g健康雄性小鼠6只,称重并记录重量,分空白组和实验组,每组3只。(2)对每只实验组小鼠腹腔注射1mL提取液,注射时若有一滴以上提取液逸出,须将该小鼠丢弃,并重新注射1只小鼠。(3)记录注射完毕时间,仔细观察并用秒表记录小鼠停止呼吸时的死亡时间(到小鼠呼出最
4、后一口气时)。(4)若小鼠死亡时间小于5min则要稀释样品提取液后,注射另一组3只小鼠,得到57min的死亡时间,稀释提取液时,要逐滴加入0.1mol/L或0.01mol/L HCl,调节pH至2.04.0。注射样品后,有1只或2只小鼠的死亡时间大于7min,则需要注射至少3只小鼠以确定样品的毒力。6现在学习的是第6页,共39页v6结果计算与判断(1)待测样品校正鼠单位(CMU)确定:v根据待测样品的小鼠死亡时间,在表14-1PSP 死亡时间-鼠单位的关系,查出相应的鼠单位;再根据小鼠的质量,在表14-2 小鼠体重校正表中查出质量校正系数,同一只小鼠的鼠单位(MU)与质量校正系数之积,即该小鼠
5、的CMU。受试组3只小鼠CMU的中位数受试组中位数。7现在学习的是第7页,共39页v(2)PSP的计算与结果陈述:PSP结果计算:vX=CMU1CFDF200v式中vX每100g样品中PSP的含量,g/100g;vCMU1检测样品受试组小鼠的中位数校正鼠单位vCF毒素转换系数;vDF稀释倍数;v200样品提取液体积,mL。PSP毒力结果表述:v若空白对照组小鼠正常,则报告待测样品中PSP含量为:g/100g。 8现在学习的是第8页,共39页v(3)MU毒力的计算与结果陈述:MU毒力计算:vY= CMU1DF200Y每100g样品的MU值,MU/100g;其余同上式MU毒力与结果表述:v空白组正
6、常情况下表述如下:v若小鼠死亡时间大于60min,则待测样品的鼠单位即小于0.875MU/g。v若小鼠死亡时间小于5min,则应对样品提取液稀释后,注射另一组3只小鼠,得到中位数死亡时间在57min为止,根据最后的稀释实验结果计算样品的鼠单位毒力,报告该样品的鼠单位为MU/100g。v若实验组中位数死亡时间大于7min,则直接计算确定样品鼠单位毒力,报告该样品的鼠单位为MU/100g。v若实验组中所有小鼠在15min内无死亡,则报告该样品鼠单位小于400 MU/100g。9现在学习的是第9页,共39页v7.试剂(1)0.18mol/L盐酸:15mL浓盐酸稀释至1L。(2)5mol/L盐酸:41
7、.7mL浓盐酸稀释至100mL。(3)0.1mol/L氢氧化钠溶液:4.0g氢氧化钠溶于1L水。(4)PSP毒素(saxitoxin)标准溶液(10g/mL):20%乙醇溶液,用5mol/L盐酸调节pH至2.04.0之间,用该液配制PSP标准溶液。(5)小鼠:体重在1921g雄性小鼠。(6)蒸馏水(pH为3):用盐酸调。v8仪器(1)均质器。(2)离心机。(3)天平。(4)注射器。(5)电炉。(6)秒表。(7)玻璃器皿。10现在学习的是第10页,共39页v四、相关知识(一)贝类中麻痹性贝类毒素的测定生物法原理v根据小鼠注射贝类提取液后死亡的时间,查出鼠单位,并按小鼠体重,查表校正鼠单位,计算确
8、定每100g贝类肉内的PSP含量,所测结果代表存在于该贝肉内各种化学结构的PSP总量。v本法摘自GB/T5009.213-2008,适用于贝类及其制品中PSP检测。(二)注意事项v1鼠单位(MU):对体重20g的雄性小鼠腹腔注射1mL麻痹性贝类毒素提取液,使其在15min内死亡所需最小毒素量。v2毒素对人体有害,应该在有保护情况下进行操作,所用玻璃实验室仪器应该用5%次氯酸钠溶液浸泡1h,使毒素分解;废弃提取液也需用5%次氯酸钠处理。v3PSP死亡时间与MU的关系表11现在学习的是第11页,共39页v五、测定食品中麻痹性贝类毒素的方法(一)进出口贝类中麻痹性贝类毒素检测方法v本法摘SN/T17
9、73-2006酶联免疫吸附试验法测定贝类中麻痹性贝类毒素,适用于双壳类贝肉、贝柱和其他可食用部分麻痹性贝类毒素的筛选检测。(二)高效液相色谱法测定贝类产品中麻痹性贝类毒素v本法摘自SN/T1735-2006进出口贝类产品中麻痹性贝类毒素检验方法,适用于贝类产品中麻痹性贝类毒素的检验。12现在学习的是第12页,共39页 项目二 测定食品中的黄曲霉毒素v一、案例v二、选用国家标准GB/T 5009.22-2003食品中黄曲霉毒素B1的测定薄层色谱法。13现在学习的是第13页,共39页v三、测定方法1取样v试样中污染黄曲霉毒素B1高的霉粒一粒左右可以测定结果。由于有毒霉粒的比例小,且分布不均匀,为避
10、免取样带来的误差,应大量取样,并将该大量试样粉碎,混合均匀,才有可能得到确能代表一批试样的相对可靠的结果,因此采样应注意以下几点:v(1)根据规定采取有代表性试样。v(2)对局部发霉变质的试样检验时,应单独取样。v(3)每份分析测定用的试样应从大样经粗碎与连续多次用四分法缩减至0.51kg,然后全部粉碎。14现在学习的是第14页,共39页v2提取(1)玉米、大米、麦类、面粉、薯干、豆类、花生、花生酱等。v甲法:称取20.00g粉碎过筛试样(面粉、花生酱不需粉碎),置于250mL具塞锥形瓶中,加30mL正己烷或石油醚和100mL甲醇水溶液,在瓶塞上涂上一层水,盖严防漏。振荡30min,静置片刻,
11、以叠成折叠式的快速定性滤纸过滤于分液漏斗中,待下层甲醇水溶液分清后,放出甲醇水溶液于另一具塞锥形瓶内。取20.00mL甲醇水溶液(相当于4g试样)置于另一125mL分液漏斗中,加20mL三氯甲烷,振摇2min,静置分层,如出现乳化现象可滴加甲醇促使分层。放出三氯甲烷层,经盛有约10g预先用三氯甲烷润湿的无水硫酸钠的定量慢速滤纸过滤于50mL蒸发皿中,再加5mL三氯甲烷于分液漏斗中,重复振摇提取,三氯甲烷层一并滤于蒸发皿中,最后用少量洗过滤器,洗液并于蒸发皿中。将蒸发皿放在通风柜于65水浴上通风挥干,然后放在冰盒上冷却23min后,准确加入1mL苯-乙腈混合液(或将三氯甲烷用浓缩蒸馏器减压吹气蒸
12、干后,准确加入1mL苯-乙腈混合液)。用带橡胶皮头的滴定管的管尖将残渣充分混合,若有苯的结晶析出,将蒸发皿从冰盒上取出,继续溶解、混合,晶体即消失,再用此滴管吸取上清液转移于2mL具塞试管中。v乙法(限于玉米、大米、小麦及其制品): 15现在学习的是第15页,共39页(2)花生油、香油、菜油等:(3)酱油、醋。(4)干酱类(包括豆豉、腐乳制品。(5)发酵酒类:16现在学习的是第16页,共39页v3测定(1)单向展开法v薄层板的制备:称取约3g硅胶G,加相当于硅胶量23倍左右的水,用力研磨12min至成糊状后立即倒于涂布器内,推成5cm20cm,厚度约为0.25mm的薄层板三块。在空气中干燥约1
13、5min后,在100活化2h,取出,放干燥器中保存。一般可保存2天3天,若放置时间较长,可再活化后使用。17现在学习的是第17页,共39页v点样:将薄层板边缘附着的吸附剂刮净,在距薄层板下端3cm的基线上用微量注射器或血色素吸管滴加样液。一块板可滴加4个点,点距边缘和点间距约为1cm,点直径约为3mm。在同一块板上滴加的大小应一致,滴加时可用吹风机用冷风边吹边加。滴加样式如下:第一点:10L黄曲霉毒素B1标准使用液(0.04g/mL)。第二点:20L样液。第三点:20L样液+10L0.04g/mL黄曲霉毒素B1标准使用液。第四点:20L样液+10L0.2g/mL黄曲霉毒素B1标准使用液。18现
14、在学习的是第18页,共39页v展开与观察:在展开槽内加10mL无水乙醚,预展12cm,取出挥干。再于另一展开槽内加10mL丙酮-三氯甲烷(8+92),展开1012cm,取出。在紫外光下观察结果,方法如下。由于样液点上加滴黄曲霉毒素B1标准使用液,可使黄曲霉毒素B1标准点与样液中的黄曲霉毒素B1荧光点重叠。如样液为阴性,薄层板上的第三点中黄曲霉毒素B1为0.0004g,可用作检查在样液内黄曲霉毒素B1最低检出量是否正常出现;如为阳性,则起定性作用。薄层板上的第四点中黄曲霉毒素B1为0.002g,主要起定位作用。若第二点在与黄曲霉素标准点的相应位置上无蓝紫色荧光点,表示试样中黄曲霉毒素B1含量在5
15、g/kg以下;如在相应位置上有蓝紫色荧光点,则需进行确证试验。19现在学习的是第19页,共39页v确证试验:为了证实薄层板上样液荧光系由黄曲霉毒素B1产生的,加滴三氟乙酸,产生黄曲霉毒素B1的衍生物,展开后此衍生物的比移值约在0.1左右。于薄层板左边依次滴加两个点。第一点:0.04g/mL黄曲霉毒素B1标准使用液10L。第二点:20L样液。于以上两点各加一小滴三氟乙酸盖于其上,反应5min后,用吹风机吹热风2min后,使热风吹到薄层板上的温度不高于40,再于薄层板上滴加以下两个点。第三点:0.04g/mL黄曲霉毒素B1标准使用液10L。第四点:20L样液。再展开,在紫外光灯下观察样液是否产生与
16、黄曲霉毒素B1标准点相同的衍生物。未加三氟乙酸的三四两点,可依次作为样液与标准的衍生物空白对照。20现在学习的是第20页,共39页v稀释定量:样液中的黄曲霉毒素B1荧光点的荧光强度如与黄曲霉毒素B1标准点的最低检出量(0.0004g)的荧光强度一致,则试样中黄曲霉毒素B1含量即为5g/kg。如样液中荧光强度比最低检出量强,则根据其强度估计减少滴加微升数或将样液稀释后再滴加不同微升数,直至样液点的荧光强度与最低检出量的荧光强度一致为止。滴加式样如下:第一点:10L黄曲霉毒素B1标准使用液(0.04g/mL)。第二点:根据情况滴加10L样液。第三点:根据情况滴加15L样液。第四点:根据情况滴加20
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- 任务 十四 测定 食品 毒素 天然 激素
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