实验一普通光学显微镜的结构与使用方法.ppt
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1、实验一 普通光学显微镜结构与使用方法,杭州师范大学 陈建明,一、实验目的和要求,了解显微镜的构造和各部分的作用,掌握显微镜的使用技术和保养措施 学会简易临时玻片的制作方法和生物绘图方法,二、实验内容,在显微镜下练习观察动、植物玻片标本。 制作洋葱鳞叶内表皮细胞临时装片,进行显微镜操作练习。 在显微镜下观察池塘水样中的微小生物。,三、相关知识与实验原理,要知道的几个重要的分辨率,人眼:0.2mm/250mm 光学显微镜:0.2um 电子显微镜:0.2nm,显微镜是观察细胞的主要工具。根据光源不同,可分为光学显微镜和电子显微镜两大类。前者以可见光(紫外线显微镜以紫外光)为光源,后者则以电子束为光源
2、。 1.光学显微镜 普通生物显微镜由3部分构成: 照明系统:包括光源和聚光器。 光学放大系统:由物镜和目镜组成, 是显微镜的主体。 机械装置:用于固定材料和观察方便, 包括镜台(载物台) 、调节器和、 物镜转换器(旋转器)等。,尼康E-600显微镜,显微镜概述,普通光学显微镜的构造,2.荧光显微镜,尼康E800荧光DIC显微镜,荧光显微镜照片(微管呈绿色、微丝红色、核蓝色),3. 激光共聚焦扫描显微镜,LCSM照片 蓝色为细胞核,绿色为微管,4. 暗视野显微镜 dark field microscope,聚光镜中央有挡光片,视野背景是黑的,只允许被标本反射和衍射的光线进入物镜,物体边缘是亮的。
3、 可观察 4200nm的微粒子,分辨率比普通显微镜高50倍。,把透过标本的可见光的光程差变成振幅差,从而提高了各种结构间的对比度,使各种结构变得清晰可见。在构造上,相差显微镜有不同于普通光学显微镜两个特殊之处。 环形光阑(annular diaphragm):位于光源与聚光器之间。 相位板(annular phaseplate):物镜中加了涂有氟化镁的相位板,可将直射光或衍射光的相位推迟1/4。,5. 相差显微镜,Four types of light microscope Bright-field microscope: the image obtained by the simple tr
4、ansmission of light through a cell in culture Dark-field microscope: the cell appears as a bright object against a dark background Phase-contrast microscope: visualizing living cells Differential-interference-contrast microscope: visualizing living cells,普通光学显微镜的基本结构,普通光学显微镜的构造可分为两部分:一为机械装置,二为光学系统 。
5、 机械装置由镜座、镜筒、物镜转换器、载物台、推动器、粗动螺旋和微动螺旋等组成。 光学系统由目镜、物镜、聚光器、光源、滤光片、虹彩光圈等组成,显微镜的结构,普通光学显微镜基本构造,光学显微镜基本结构: 1. 照明灯(Lamp) 2. 聚光器(Condenser) 3. 载物台和切片夹(Mechanical stage and specimen retainer) 4. 推进器(Mechanical stage adjustment knob) 5. 物镜(Objectives) 6. 粗细螺旋(Course and fine focus knob) 7. 目镜(Oculars) 8. 照相机等接
6、口(Connection to camera, etc.),1.物镜 物镜(objective)是光学显微镜成像系统中决定其分辨率或叫分辨本领的最关键部件。,物镜标识,2.目镜 目镜的作用是把物镜放大的实象再放大一级,并把物象映入观察者的眼中,实质上目镜就是一个放大镜。显微镜的分辨率能力是由物镜的数值孔径所决定的,而目镜只是起放大作用。对于物镜不能分辨出的结构,目镜放的再大,也仍然不能分辨出。 3.聚光镜 聚光镜装在载物台的下方。小型的显微镜往往无聚光镜,在使用数值孔径0.40以上的物镜时,则必须具有聚光镜。聚光镜不仅可以弥补光量的不足和适当改变从光源射来的光的性质,而且将光线聚焦于被检物体上
7、,以得到最好的照明效果。,显微镜的光学原理,成像原理 光路:光源虹彩光圈聚光镜通光孔标本(一定要透明)物镜镜筒目镜眼。,显微镜的放大倍数,四、实验器材,显微镜、擦镜纸、镊子、小剪、载玻片、 盖玻片、解剖针、表面皿、吸水纸、碘液、清水、香柏油、二甲苯。 洋葱鳞茎,棉花老根横切玻片标本, 池塘水样,五、实验方法和步骤,(一)显微镜的使用 1.取镜和安放 置显微镜于平稳的实验台上,镜座距实验台边沿约为34cm。镜检者姿势要端正。 (取、放显微镜时应一手握住镜臂,一手托住底座,使显微镜保持直立、平稳。切忌用单手拎提;且不论使用单筒显微镜或双筒显微镜均应双眼同时睁开观察,以减少眼睛疲劳,也便于边观察边绘
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