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1、关于实验直接抗人球蛋白实验第一页,讲稿共十六页哦第一部分第一部分 直接抗人球蛋白试验原理直接抗人球蛋白试验原理第二页,讲稿共十六页哦直接抗人球蛋白试验原理直接抗人球蛋白试验原理 :直接抗人球蛋白试验是检测红细胞在体内是否被直接抗人球蛋白试验是检测红细胞在体内是否被不完全抗体致敏的实验。若红细胞在体内已被不完全不完全抗体致敏的实验。若红细胞在体内已被不完全抗体所致敏,加入的抗人球蛋白则可与红细胞表面不抗体所致敏,加入的抗人球蛋白则可与红细胞表面不完全抗体结合使红细胞相互连接起来出现凝集现象。完全抗体结合使红细胞相互连接起来出现凝集现象。直接抗人球蛋白试验阳性直接抗人球蛋白试验阳性 第三页,讲稿共
2、十六页哦 致敏红细胞致敏红细胞 抗人球蛋白抗人球蛋白直接抗人球蛋白试验直接抗人球蛋白试验第四页,讲稿共十六页哦抗球蛋白试剂通常有三种:抗球蛋白试剂通常有三种:v多特异性抗球蛋白试剂,简称多抗,多抗包括了抗多特异性抗球蛋白试剂,简称多抗,多抗包括了抗-IgG-IgG和抗和抗-C3-C3两种两种成分,在直抗试验中常常作为初筛试剂使用。成分,在直抗试验中常常作为初筛试剂使用。v单特异性抗单特异性抗-IgG-IgG试剂,简称抗试剂,简称抗-IgG-IgGv单特异性抗单特异性抗-C3-C3试剂,简称抗试剂,简称抗-C3-C3v在直抗试验中一旦出现阳性结果,通常需要抗在直抗试验中一旦出现阳性结果,通常需要
3、抗-IgG-IgG和抗和抗-C3-C3进一步进一步分析。分析。第五页,讲稿共十六页哦 直接抗人球蛋白试验临床意义直接抗人球蛋白试验临床意义 检测体内红细胞是否被不完全抗体或补体致敏检测体内红细胞是否被不完全抗体或补体致敏,可用于:可用于:1 1)新生儿溶血病胎(婴)儿致敏红细胞检测)新生儿溶血病胎(婴)儿致敏红细胞检测 2 2)自身免疫溶血性贫血的诊断)自身免疫溶血性贫血的诊断 3 3)溶血性输血反应的研究)溶血性输血反应的研究 第六页,讲稿共十六页哦 第二部分第二部分 直接抗人球蛋白试验操作直接抗人球蛋白试验操作第七页,讲稿共十六页哦直接抗人球蛋白试验难点:直接抗人球蛋白试验难点:难以获取致
4、敏红细胞标本?难以获取致敏红细胞标本?解决方案:解决方案:试剂红细胞试剂红细胞+IgG+IgG抗抗D D血清(人工致敏血清(人工致敏RBC)RBC)第八页,讲稿共十六页哦受检标本受检标本红细胞悬液配制:红细胞悬液配制:1.1.抗凝全血抗凝全血 2ml2ml(与抗凝剂混匀)(与抗凝剂混匀)1000g 1000g 离心离心3min3min 分离上层血浆分离上层血浆 2.2.压积红细胞的制备:压积红细胞的制备:NSNS洗涤三次,注意离心速度及时间洗涤三次,注意离心速度及时间 (1000g1000g离心离心1min1min)(注意操作轻柔,防溶血!)(注意操作轻柔,防溶血!)3.3.取压积红细胞配成取
5、压积红细胞配成5 5的红细胞悬液(的红细胞悬液(1d1d压积红细胞压积红细胞19d NS19d NS)第九页,讲稿共十六页哦 人工制备人工制备IgGIgG型致敏红细胞(阳性对照):型致敏红细胞(阳性对照):1 1、采集、采集3 3人份人份O O型型RhDRhD阳性抗凝全血,阳性抗凝全血,1000g1000g离心离心3min3min,分离血浆;红,分离血浆;红细胞经生理盐水(细胞经生理盐水(NSNS)3 3次洗涤后,取次洗涤后,取3 3人份的压积红细胞各人份的压积红细胞各5 5滴混匀,滴混匀,备用;备用;2 2、用一次性吸管取压积红细胞、用一次性吸管取压积红细胞3 3滴于试管中,加入滴于试管中,
6、加入2 2倍体积的单克隆倍体积的单克隆IgGIgG抗抗D D血清,混匀,置于血清,混匀,置于3737孵育孵育45min45min;3 3、孵育结束取出试管,、孵育结束取出试管,1000g1000g离心离心2min2min,弃上清,用,弃上清,用2 2倍体积的倍体积的NSNS洗洗涤涤3 3次(次(1000g1000g离心离心1min1min),最后加入),最后加入NSNS配制成约配制成约5 5的致敏红细胞悬液的致敏红细胞悬液(1d1d压积红细胞压积红细胞19d NS19d NS),备用),备用第十页,讲稿共十六页哦 未致敏红细胞(阴性对照):未致敏红细胞(阴性对照):取取3 3滴滴3 3人份混合
7、压积红细胞,加入人份混合压积红细胞,加入5757滴滴NSNS混匀,备用。混匀,备用。(无须(无须单克隆单克隆IgGIgG抗抗D D血清致敏)血清致敏)第十一页,讲稿共十六页哦v标记标记3支试管,分别为待检管、阴性对照和阳性对照。支试管,分别为待检管、阴性对照和阳性对照。按下表加入各反应物:按下表加入各反应物:反应物反应物 待检管待检管 阴性对照阴性对照 阳性对照阳性对照5待检标本待检标本RBC 1 5阴性对照阴性对照RBC 15阳性对照阳性对照RBC 1多特异性抗球蛋白试剂多特异性抗球蛋白试剂 1 1 1受检者标本检测第十二页,讲稿共十六页哦v混匀,混匀,1000g离心离心15s,观察凝集反应
8、,记录结果。,观察凝集反应,记录结果。v如果使用的是多特异性抗球蛋白试剂或抗如果使用的是多特异性抗球蛋白试剂或抗C3抗球蛋白试剂,将未出现反应的试管抗球蛋白试剂,将未出现反应的试管置室温孵育置室温孵育5min,再离心,观察凝集。,再离心,观察凝集。v实验结果阴性时,应按照试剂说明书要求验证阴性结果的正确性。加实验结果阴性时,应按照试剂说明书要求验证阴性结果的正确性。加1滴滴IgG致敏致敏5红细胞悬液于未出现凝集的试管中,红细胞悬液于未出现凝集的试管中,1000g离心离心15s,观察凝集,观察凝集,记录结果。,记录结果。受检者标本检测第十三页,讲稿共十六页哦v如阳性对照凝集,阴性对照不凝集,受检
9、如阳性对照凝集,阴性对照不凝集,受检RBC凝集者直凝集者直接抗球蛋白试验为阳性,不凝集者为阴性。接抗球蛋白试验为阳性,不凝集者为阴性。结果判定第十四页,讲稿共十六页哦v标本采集后应尽快进行试验,试验延迟或中途停止可能使抗体从细胞上释放出来。标本采集后应尽快进行试验,试验延迟或中途停止可能使抗体从细胞上释放出来。v待检红细胞一定要用盐水洗涤至少待检红细胞一定要用盐水洗涤至少3次,除去红细胞悬液中混杂的血清蛋白,以防止假阴性次,除去红细胞悬液中混杂的血清蛋白,以防止假阴性结果。结果。v离心时间和离心力要按标准操作。离心时间和离心力要按标准操作。v若果要了解在体内致敏红细胞的免疫球蛋白类型,则可分别以抗若果要了解在体内致敏红细胞的免疫球蛋白类型,则可分别以抗IgG、抗、抗IgM或或抗抗C3单特异性抗球蛋白试剂进行试验。单特异性抗球蛋白试剂进行试验。v红细胞上若抗体吸附较少,自身免疫性溶血性贫血直接抗球蛋白试验可呈阴性红细胞上若抗体吸附较少,自身免疫性溶血性贫血直接抗球蛋白试验可呈阴性反应。反应。v全凝集、冷凝集血标本或脐血标本,试验前应充分洗涤,否则产生假阳性。全凝集、冷凝集血标本或脐血标本,试验前应充分洗涤,否则产生假阳性。注意事项 第十五页,讲稿共十六页哦感谢大家观看感谢大家观看第十六页,讲稿共十六页哦
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